一种菊酯类农药降解酶的制备方法技术

本发明专利技术涉及农药降解酶的制备方法技术领域，尤其涉及一种菊酯类农药降解酶的制备方法，包括以下步骤：1）以重组大肠杆菌{E.coliBL21(DE3)/pET-28a-est825}作为生产菌种，用甘油管将生产菌种在-86℃的温度下保存；2）种子培养；3）发酵培养；4）补料发酵培养；5）乳糖诱导；6）酶粉制备。本发明专利技术采用重组大肠杆菌高效表达菊酯类农药降解酶，最终制得的降解酶酶粉产量25~40g/L，酶粉酶活为48000~60000U/g，大大提高了菊酯类农药降解酶的产量，降低菊酯类农药降解酶的使用成本，为规模化生产菊酯类农药降解酶提供了一条有效、经济、可行的途径。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及农药降解酶的制备方法
，尤其涉及。
技术介绍
菊酯类农药是广谱性杀虫剂，具有速效、高效、低毒、低残留的特点，对140多种害虫的防治有特效。然而，用农药对农作物进行害虫防治时将使农作物的表面或多或少残留一些农药，尤其是菊酯类农药降解速度慢，不仅对人体健康造成危害，而且对生态系统也造成一定的影响。为此，人们采用微生物对农药进行降解，而微生物对农药的作用方式多样，多数属于通过酶促反应降解农药。 中山大学的刘玉焕等通过(一种新型酯酶及其应用，ZL201010547206. 8)中的高通量功能筛选的方法克隆了Sp.ZD112中具有菊酯类农药降解能力的新基因est825，构建了重组表达的大肠杆菌万.coli BL21 (DE3)/pET-28a_est825，酶学性质研究发现，通过此重组大肠杆菌生产的重组酶在常温下对氯氟氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯的降解率分别达到80. 82%, 82. 98%, 69. 23%和69. 65%，菊酯类农药降解酶降解效率高、安全无毒、环境适应强，具有良好的应用前景。目前，国内外已出现通过构建基因组文库克隆一个菊酯类农药降解酶的新基因本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种菊酯类农药降解酶的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：1）以重组大肠杆菌{E.coli？BL21(DE3)/pET？28a？est825}作为生产菌种，用甘油管将生产菌种在？86℃的温度下保存；2）种子培养：将甘油管中的生产菌种按2~4%的接种量接入摇瓶种子培养基，以转速为200~220r/min、温度为37℃、培养时间为8~10h的培养条件在恒温摇床中培养；？3）发酵培养：将培养好的种子液以2~5%的接种量接入装有3.75~4.5L发酵培养基的7.5L发酵罐中进行发酵培养，发酵培养的时间为24~28h，在发酵过程中通过通入无菌空气和改变搅拌转速来控制发酵液溶氧值维持在20%~25%；4）...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：黄皓，罗华建，刘玉焕，梁卫驱，胡珊，刘远星，罗诗，莫忠兴，李艳芳，陈仕丽，徐匆，
申请(专利权)人：东莞市农业科学研究中心，中山大学，
类型：发明
国别省市：