一种RNA的预备模板PCR检测方法技术

本发明专利技术提供了一种RNA的预备模板PCR（Template-Ready?PCR，TRPCR）检测方法。本发明专利技术方法与采用传统的RT-PCR方法相比，不需要纯化抽提RNA，不需要进行逆转录反应，将原本长达3个小时以上的PCR前处理过程缩短为约50分钟，因此，操作简便快速易行，具有较高的RNA检测的灵敏度和特异性，适合对各种来源的样品裂解得到RNA进行检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种RNA的预备模板PCR (Template-Ready PCR, TRPCR)检测方法。
技术介绍
RNA是遗传信息传递的载体。RT-PCR (reverse transcription逆转录-聚合酶链反应)，指将逆转录反应(Reverse Transcription, RT)和 PCR (Polymerase ChainReaction)反应组合在一起的方法.RT- PCR将以RNA为模板的cDNA合成，即RT，同PCR结合在一起，提供了一种分析基因表达的快速灵敏的方法。RNA的RT-PCR检测或定量分析，比其他包括Northern印迹、RNase保护分析、原位杂交及SI核酸酶分析在内的RNA分析技术，更灵敏，更易于操作，已发展成为进行基因表达水平的检测分析，病原体的检测分析等 有力的手段。RT-PCR的模板可以为总RNA或poly (A) +RNA.其中RT需要用逆转录酶，可以用随机引物、oligo (dT)或基因特异性的引物(GSP)起始.RT和PCR可以在两个反应管中分步先后进行(两管法)，也可以在一个反应管中先后进行(一管法)。两管法比较常见，在两管法R本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种RNA的预备模板PCR检测方法，所述方法包括：（1）设计与目标RNA上任意一段序列互补的长度为25~40mer的单链寡核苷酸DNA，记为探针A；探针A的GC含量为40~60%，解链温度为70~85℃；将探针A锚定在PCR管内，得到锚定PCR管；（2）设计部分序列与目标RNA上另一段任意序列互补的单链寡核苷酸DNA，其结构为:？两端是特异的长度为20~30mer的PCR引物序列、中间为与目标RNA互补的长度为25~40mer的序列，记为探针B；探针B？的GC含量为40~60%，解链温度为70~85℃，与探针A和目标RNA的结合区域互不重叠；（3）取待测样本，加入探针B和含表面活性剂的细胞裂解...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈燃，伍迪，金晓铮，
申请(专利权)人：浙江今复康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：