本发明专利技术涉及医药和保健食品开发技术领域，提供了一种经大孔吸附树脂、中空纤维柱超滤分离等技术，从传统中药人参中提取分离得到人参糖蛋白的方法，该糖蛋白中总糖含量为30%左右，酸性糖含量在10%左右，蛋白质含量在30%以上，人参糖蛋白重均分子量(Mw)分布在1.7×104左右，糖部分的糖苷键连接方式为以1→4连接葡萄糖为主链，蛋白质部分由16种氨基酸组成，通过药效学试验也证明了人参糖蛋白具有抗炎、镇痛和镇静的作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种由人参中提取分离得到的人参糖蛋白，其中总糖含量为30%左右，酸性糖含量在10%左右，蛋白质含量在30%以上，人参糖蛋白重均分子量(Mw)分布在I. 7X IO4左右，糖部分的糖苷键连接方式为以I — 4连接葡萄糖为主链，蛋白质部分由16种氨基酸组成。此人参糖蛋白具有抗炎、镇痛、镇静的作用。本专利技术属于医药和保健食品开发领域。
技术介绍
人参为五加科植物人参(Panax ginseng C. A. Meyer)的干燥根及根莖。为名贵药材，具有独特的药用价值和医疗保健作用，一直深受人们的重视。多年的研究结果表明，人参在调节中枢神经系统、提高学习记忆能力、改善心脏功能、降血糖作用、增强机体的免疫功能、抗肿瘤作用、抗氧化作用等方面都显示出很强的药用活性。迄今为止，已从人参中分 离出的化学成分有皂苷类化合物、多糖(寡糖)类成分、多肽、脂肪酸类化合物、氨基酸等，其中研究最多的是人参皂苷类和多糖类成分为人参生物活性的主要成分。目前，对人参糖蛋白的研究报道甚少。经文献检索，仅查到张彬等报道的人参糖蛋白的分离纯化及其性质研究(药物分析杂志2006 (26) 2 272-276页)，该文献报道的人参糖蛋白的制备是将人参粗多糖提取物先经Hiprep2660Sephacryl S200柱层析分离纯化得到第一个组分峰I,再经过HitrapQ 26/60柱层析梯度洗脱纯化得到组分P1,经HPGPC检测，该组分P1为一峰形对称的蛋白质-糖组分，重均分子量(Mw)分布在24000左右，该组分对水透析，冷冻干燥，SP为人参糖蛋白。张彬报道的人参糖蛋白仅是人参糖蛋白其中的一个片段(分子量在24000左右)，并对该片段的理化性质进行了研究。而本权利要求书I所制得的人参糖蛋白重均分子量(Mw)分布在I. 7X IO4左右，所以，本权利要求书I与张彬报道的人参糖蛋白有其本质差异。本专利技术所得到的人参糖蛋白其重均分子量(Mw)分布在I. 7X IO4左右，其中人参糖蛋白中的总糖含量为30%左右，酸性糖含量为10%左右，蛋白质含量在30%以上。本专利技术所得到的人参糖蛋白，为今后以人参为原料开发新药、保健食品或食品拓宽了开发空间。经文献检索，有关糖蛋白生物活性报道很多，主要集中在抗氧化、抗肿瘤、增强免疫方面的活性研究，关于糖蛋白的其他方面的用途非常少见。到目前为止，尚未检索到有关人参糖蛋白生物活性的报道。在本专利技术中，通过药效学实验数据证明了人参糖蛋白在抗炎、镇痛、镇静方面的活性，其中抗炎作用通过对小鼠二甲苯耳水肿的影响和对小鼠角叉菜胶足肿胀的影响来证实；镇痛作用通过对醋酸所致小鼠扭体反应的影响和对福尔马林所致小鼠疼痛的影响来证实；镇静作用通过对小鼠自主活动的影响和对小鼠戊四氮致惊厥的影响来证实。在本专利技术之前，尚未见有关人参糖蛋白抗炎、镇痛、镇静方面的研究报道。因此，本专利技术权利要求所保护的内容具有创新性和新颖性
技术实现思路
本专利技术的目的之一是提供了一种植物资源丰富、可产业化生产的人参糖蛋白，可以更好地开发和利用著称为“百草之王”的传统中药一人参。该人参糖蛋白的特征在于(a)人参糖蛋白中的总糖含量为30%左右，酸性糖含量为10%左右，蛋白质含量在30%以上；(b)人参糖蛋白重均分子量(Mw)分布在I.7X IO4左右；(c)人参糖蛋白中的糖部分主要为葡萄糖，此外，还含有少量的甘露糖、半乳糖、岩藻糖、半乳糖醛酸；(d)糖部分的糖苷键连接方式为以I — 4连接葡萄糖为主链，(e)蛋白质部分由天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、组氨酸、甘氨酸、精氨酸、苏氨酸、脯氨酸、丙氨酸、缬氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、络氨酸等16种氨基酸组成。本专利技术的目的之二是通过药效学试验筛选出人参糖蛋白的活性，通过试验结果表明人参糖蛋白在抗炎、镇痛、镇静方面具有良好的生物活性，为将人参糖蛋白开发成新药、保健食品或食品用于疾病的预防治疗及保健奠定了基础。为了实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案 I、人参糖蛋白的制备将人参Panax ginseng C. A. Meyer粉碎,加10_15倍量的水煎煮2次,每次3小时，滤过，合并滤液，浓缩至每Iml含Ig药材，通过已处理好的DlOl大孔吸附树脂，用水洗脱2倍量柱体积，水洗脱液通过截留分子量为20000的中空纤维柱进行超滤，超滤液继续通过截留分子量为1000的中空纤维柱进行超滤，浓备液浓缩，真空干燥，得人参糖蛋白。2、人参糖蛋白结构表征为了确定人参糖蛋白中糖与蛋白部分的基本构成，我们利用化学方法和光谱数据验证上述工艺生产的产品为人参糖蛋白，分析结果如下(I)理化性质结果总糖含量的测定采用苯酚-硫酸法，葡萄糖作为对照品，制作标准曲线，结果表明，人参糖蛋白中的总糖含量在34%。酸性糖含量的测定采用间-羟基联苯法，半乳糖醛酸作为对照品，制作标准曲线，结果表明，人参糖蛋白中的酸性糖含量为12%，蛋白质含量的测定采用Lowry法，牛血清蛋白作为对照品，制作标准曲线，结果表明，人参糖蛋白中的蛋白含量在45%。(2)分子量分布采用HPLC，示差检测器，美国赛芬柱SRT SEC-100 (截留分子量100-100000)，以色氨酸(分子量为204. 23)、蛋白酶抑制剂(分子量为6512)、VB12(分子量为1355)、细胞色素C(分子量为12327)、牛血清白蛋白(分子量为66200)作为对照品，制作标准曲线，GPC软件计算结果表明，人参糖蛋白重均分子量(Mw)分布在1.74X 104左右。Ln(Mn) =Βο+Β1 X T+B2 X T2+B3 X T3Βο=6· 421077，Bl=-O. 1460711, Β2=0, Β3=0R2=O. 996563(3)组成糖分析采用PMP-柱前衍生化法，将人参糖蛋白中糖部分制备成衍生物，以各单糖的衍生物作为对照品，HPLC结果表明，人参糖蛋白中糖部分主要为葡萄糖，还含有及少量的甘露糖、半乳糖、岩藻糖及半乳糖醛酸组成。(4)甲基化分析采用Hakomori法,将人参糖蛋白中糖部分制备成衍生物，GC-MS结果表明，人参糖蛋白中糖苷键连接方式为以I — 4连接葡萄糖为主链。(5)氨基酸分析，采用HPLC，将人参糖蛋白用6mol/L盐酸水解20小时，以20种氨基酸作为对照品，分别制作标准曲线，结果表明，人参糖蛋白由天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、组氨酸、甘氨酸、精氨酸、苏氨酸、脯氨酸、丙氨酸、缬氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、络氨酸16种氨基酸组成。人参糖蛋白具有抗炎、镇痛、镇静的作用，这些药理作用，通过以下药效学试验例得到证实。口服及腹腔给予小鼠人参糖蛋白，观察其对炎症、疼痛及中枢神经系统的影响。方法采用小鼠二甲苯耳水肿及角叉菜胶足肿胀作为炎症模型、小鼠醋酸扭体、甲醛舔后足为疼痛模型，小鼠自主活动、戊四氮引起惊厥作镇静模型。动物昆明种小鼠，体重18_22g，雄性，购自长春生物制品研究所，许可证号SCXK (吉)-2006-0001。自由摄食饮水。 药物人参糖蛋白由吉林省中医药科学院植化室提供，为浅黄色粉末。阿司匹林为沈阳奥吉娜药业有限公司产品，批号20120107。安痛定为河南润弘制药股份有限公司产品，批号1206091。300、200、100mg/kg为人参糖蛋白本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种人参糖蛋白的制备方法，其特征在于：将人参Panax？ginseng？C.A.Meyer粉碎，加10？15倍量的水煎煮2次，每次3小时，滤过，合并滤液，浓缩至每1ml含1g药材，通过已处理好的D101大孔吸附树脂，用水洗脱2倍量柱体积，水洗脱液通过截留分子量为20000的中空纤维柱进行超滤，超滤液继续通过截留分子量为1000的中空纤维柱进行超滤，浓备液浓缩，真空干燥，得人参糖蛋白。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：姜瑞芝，王颖，陈英红，高其品，刘威，徐宏，罗浩铭，
申请(专利权)人：姜瑞芝，
类型：发明
国别省市：
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