一种楠木脂素A的提纯方法技术

本发明专利技术公开了一种楠木脂素A的提纯方法，方法包括：（1）取原料红楠干燥树皮，经粉碎处理，用酶溶液浸泡，水浴酶解；（2）将酶解液过滤，取滤渣用5-10倍量的乙醇水溶液提取2-3次，合并提取液，减压浓缩得浸膏；（3）将浸膏过大孔吸附树脂柱，醇水混合溶液洗脱，收集洗脱液；（4）将洗脱液减压回收乙醇，上硅胶柱，乙酸乙酯-乙醇梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集楠木脂素A流分，减压浓缩，冷冻干燥即得粗品；（5）粗品采用高速逆流色谱分离，收集目标成分，浓缩干燥即得高纯度楠木脂素A。本发明专利技术操作简单、所得产品收率高、成本低，适合规模化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物提取
，涉及一种从红楠干燥树皮中提取纯化楠木脂素A的方法。
技术介绍
红楠thunbergii Sieb. et Zucc.系樟科植物，主要分布于我国山东、江苏、浙江、安徽、江西、福建、台湾、四川、广东、广西等省区。现代药理研究表明，楠木脂素A具有免疫抑制活性，对分裂素(刀豆球蛋白A)诱导的人外周血液淋巴细胞增生有极强的抑制作用，其IC5tl为O. (^yg/ml，与强的松龙相当；另外还具有细胞毒活性，对人型白血病细 胞株HL-60和Molt-4细胞具有细胞毒活性，其IC5tl (ng/ml)分别为26和54。楠木脂素A (Machilin A),分子式为C2tlH22O4,分子量为326. 39,为无色针晶，是从红楠的树皮分离出的一种木脂素类化合物。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种楠木脂素A的提纯方法，该方法提率高、成本低，适合规模化生产。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的 一种楠木脂素A的提纯方法，其特征在于包括以下步骤 (1)酶解取原料红楠干燥树皮，经粉碎处理，用酶溶液浸泡，水浴酶解2-5小时，并充分搅拌； (2)提取将上述酶解液过滤，取滤渣用5-6倍药材重量的乙醇水溶液提取2-3次，合并提取液，减压浓缩得浸膏； (3)富集将浸膏过大孔吸附树脂柱，醇水洗脱，收集洗脱液； (4)纯化将上述洗脱液减压回收乙醇，上硅胶柱(硅胶粒度为100-200目)，乙酸乙酯-乙醇梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集楠木脂素A流分，减压浓缩，冷冻干燥得粗品； (5)高速逆流色谱分离粗品采用高速逆流色谱分离，以氯仿-甲醇-水为溶剂系统，比例为(1-5): (5-9) : (3-7)，收集目标成分，浓缩干燥即得高纯度楠木脂素A。步骤(I)中所述酶可选纤维素酶、葡聚糖酶和果胶酶中的一种或几种，酶用量为2-3. 5%0，pH 为 4-4. 6，酶解温度为 45-50°C。步骤(2)中所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分比浓度为80-90%。步骤(3)中所述大孔树脂选自AB-8、XAD-16、XDA-8或HZ806型中的一种。步骤(3)中所述醇水洗脱为3-4BV10%-20%乙醇水溶液一4_6BV80%-90%乙醇水溶液。步骤(4)中所述乙酸乙酯-乙醇体积比为3-10:1。本专利技术采用酶解提取，有效成分更容易溶出，提高了提取率；采用采用大孔树脂和硅胶柱粗分，比萃取法处理量大、含量高，更容易操作；采用高速逆流色谱分离，操作简单，制备周期短，产品无损失，可得到高含量的楠木脂素A，产品纯度较高。具体实施例方式 实施例I: 取红楠干燥树皮粉碎过60目筛，称取5kg，加15LpH4. 2的纤维素酶水溶液(每kg生药加入2. 2g纤维素酶)进行浸泡半小时，然后在42°C下水浴酶解3小时，并充分搅拌，过滤，取滤渣用5倍药材重量的80%乙醇加热回流提取I小时，提取3次，合并提取液，减压浓缩得浸膏，将浸膏加热水分散，加入XAD-16大孔吸附树脂柱，先取3BV10%乙醇洗脱杂质，再取4BV80%乙醇洗脱有效成分，减压回收乙醇，上硅胶柱层析(硅胶粒度为100目)，用乙酸乙酯-乙醇按10:1、5:1、3:1梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集楠木脂素A流分，减压浓缩，冷冻干燥得楠木脂素A粗品；取氯仿、甲醇、水，按比例1:5:3在分液漏斗中充分混合，静置，取下相注满高速逆流色谱柱，开启主机，设置转速900rpm，泵入上相做流动相，建立动态平衡后，调整流速为3ml/min，用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器检测，收集目标成分，连续制备合并流分，得楠木脂素Al. 3g，经HPLC检测，含量98. 2%。 实施例2: 取红楠干燥树皮粉碎过60目筛，称取5kg，加12LpH4. 2的纤维素酶水溶液(每kg生药加入3. Ig纤维素酶)进行浸泡半小时，然后在44°C下水浴酶解2小时，并充分搅拌，过滤，取滤渣用6倍药材重量的90%乙醇加热回流提取I小时，提取2次，合并提取液，减压浓缩得浸膏，将浸膏加热水分散，加入AB-8大孔吸附树脂柱，先取4BV20%乙醇洗脱杂质，再取4BV90%乙醇洗脱有效成分，减压回收乙醇，上硅胶柱层析(硅胶粒度为200目)，用乙酸乙酯-乙醇按10:1、5:1、3:1梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集楠木脂素A流分，减压浓缩，冷冻干燥得得楠木脂素A粗品；取氯仿、甲醇、水，按比例5:9:7在分液漏斗中充分混合，静置，取下相注满高速逆流色谱柱，开启主机，设置转速850rpm，泵入上相做流动相，建立动态平衡后，调整流速为3ml/min，用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器检测，收集目标成分，连续制备合并流分，得楠木脂素Al. 6g，经HPLC检测，含量98. 1%。实施例3 取红楠干燥树皮粉碎过60目筛,称取5kg,加15LpH4. 2的纤维素酶水溶液(每kg生药加入2g纤维素酶和果胶酶混合复合酶，纤维素酶和果胶酶的质量比为I: I)进行浸泡半小时，然后在50°C下水浴酶解5小时，并充分搅拌，过滤，取滤渣用5倍药材重量的90%乙醇加热回流提取I小时，提取2次，合并提取液，减压浓缩得浸膏，将浸膏加热水分散，加入XDA-8大孔吸附树脂柱，先取3BV15%乙醇洗脱杂质，再取6BV90%乙醇洗脱有效成分，减压回收乙醇，上硅胶柱层析(硅胶粒度为200目)，用乙酸乙酯-乙醇按10:1、5:1、3:1梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集楠木脂素A流分，减压浓缩，冷冻干燥得得楠木脂素A粗品；取氯仿、甲醇、水，按比例4:7:3在分液漏斗中充分混合，静置，取下相注满高速逆流色谱柱，开启主机，设置转速800rpm，泵入上相做流动相，建立动态平衡后，调整流速为3ml/min，用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器检测，收集目标成分，连续制备合并流分，得楠木脂素Al. 5g，经HPLC检测，含量98. 3%。实施例4: 取红楠干燥树皮粉碎过60目筛,称取5kg,加12LpH4. 6的纤维素酶水溶液(每kg生药加入3. 5g果胶酶)进行浸泡半小时，然后在45°C下水浴酶解4小时,并充分搅拌,过滤，取滤渣用10倍药材重量的80%乙醇加热回流提取I小时，提取3次，合并提取液，减压浓缩得浸膏，将浸膏加热水分散，加入HZ806大孔吸附树脂柱，先取4BV15%乙醇洗脱杂质，再取6BV85%乙醇洗脱有效成分，减压回收乙醇，上硅胶柱层析(硅胶粒度为100目)，用乙酸乙酯-乙醇按10:1、5:1、3:1梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集楠木脂素A流分，减压浓缩，冷冻干燥得得楠木脂素A粗品；取氯仿、甲醇、水，按比例3:7:6在分液漏斗中充分混合，静置，取下相注满高速逆流色谱柱，开启主机，设置转速900rpm，泵入上相做流动相，建立动态平衡后，调整流速为3ml/min，用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器检测，收集目标成分，连续制备合并流分，得楠木脂素Al. 5g，经HPLC检测，含量98. 7%。实施例5: 取红楠干燥树皮粉碎过60目筛,称取5kg,加13LpH4的纤维素酶水溶液(每kg生药加入2. 6g葡聚糖酶和果胶酶的混合复合酶，葡聚糖酶和果胶酶的质量比为1:3)进行浸泡半小时，然后在48°C下水浴酶解2小时，并充分搅拌，过滤，取本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种楠木脂素A的提纯方法，其特征在于包括以下步骤：（1）酶解：取原料红楠干燥树皮，经粉碎处理，用酶溶液浸泡，水浴酶解2？5小时，并充分搅拌；（2）提取：将上述酶解液过滤，取滤渣用5？6倍药材重量的乙醇水溶液提取2？3次，合并提取液，减压浓缩得浸膏；（3）富集：将浸膏过大孔吸附树脂柱，醇水洗脱，收集洗脱液；（4）纯化：将上述洗脱液减压回收乙醇，上硅胶柱（硅胶粒度为100？200目），乙酸乙酯？乙醇梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集楠木脂素A流分，减压浓缩，冷冻干燥得粗品；（5）高速逆流色谱分离：粗品采用高速逆流色谱分离，以氯仿？甲醇？水为溶剂系统，比例为（1？5）:（5？9）:（3？7），收集目标成分，浓缩干燥即得高纯度楠木脂素A。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘东锋，万冬梅，
申请(专利权)人：南京泽朗医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：