免疫学测定方法和芯片技术

本发明专利技术提供一种免疫学测定方法和芯片，该免疫学测定方法适于在芯片上实施。免疫学测定方法为以下方法，在反应腔室（7）中得到测定对象抗原（2）与抗体（3）已结合的状态下的抗原抗体复合物后，通过使用样品溶液（8）洗涤反应腔室（7），将抗原抗体复合物和未与测定对象抗原结合的抗体分离。根据本发明专利技术，不使用处于不含有蛋白质等测定对象抗原的状态下的以Tris-HCl缓冲液为代表的洗涤液，就能够洗涤反应腔室，并能够以与使用洗涤液的情况相当的精度检测出反应测定对象抗原的量的信号。由此，不需要将洗涤液从芯片的外部供给或将洗涤液预先保持在芯片上，就能够容易地在芯片上实施免疫学测定方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及利用抗原抗体反应测定样品溶液中的特定成分的量的免疫学測定方法，特别涉及适于在芯片上实施的免疫学測定方法。而且，本专利技术涉及适于实施该免疫学测定方法的芯片。
技术介绍
作为高精度地对活体样品(例如血液)中含有的过敏反应的起因物质、病毒和细菌等蛋白质进行识别和定量分析的方法，免疫学測定方法正受到注目。免疫学測定方法大致分为免疫比浊法和免疫标记法。免疫比浊法，是对抗原抗体反应产生的抗原抗体复合物引起的样品溶液的浊度变化进行测定的方法。免疫标记法，是使用被标记物质标记的抗体，对抗原抗体反应后的标记物质量的变化进行測定的方法。免疫标记法按照标记物质的种类被细分。例如能够列举使用放射性同位素作为标记物质的放射免疫测定法，使用酶的酶免疫测定法(EIA enzyme immunoassay),使用突光体的荧光免疫測定法等。EIA与其他免疫标记法相比，标记物质的安全性较高，能够简便的操作，測定精度也高，因此被广泛使用。作为代表性的EIA,例如是酶联免疫吸附测量法(Enzyme-linked ImmunosorbentAssay :ELISA)。參照图I说明ELISA的ー个例子。(エ序I-A:固相抗原的形成)将含有捕获抗原的溶液导入反应腔室7内，其中，该捕获抗原具有与測定对象抗原的抗原表位(印itope)相同的抗原表位，并且在规定温度下保持规定时间，使该捕获抗原吸附于反应腔室7的表面。之后，以不參与之后的抗原抗体反应和酶反应的蛋白质覆盖(屏蔽)吸附的捕获抗原。由此，在反应腔室7的内部形成固相抗原6。固相抗原6固定在反应腔室7的表面，不会被后述的洗涤从反应腔室7除去。(エ序I-B:测定对象抗原与抗体、以及固相抗原与抗体的结合反应)在样品溶液9中添加与测定对象抗原2特异性结合的抗体3。抗体3处于被标记物质(例如酶)4标记的状态。之后，将含有该抗体3的样品溶液9导入反应腔室7。由此，在反应腔室7中，固相抗原6与抗体3之间、以及测定对象抗原2与抗体3之间进行抗原抗体反应。序I-C :未反应的抗体和抗原抗体复合物的除去)使用以Tris-HCL缓冲液为代表的洗涤液10，对反应腔室7的内部进行洗涤。由此，从反应腔室7中除去抗原抗体复合物和未与固相抗体6结合的抗体3，其中，该抗原抗体复合物是抗体3与测定对象抗原2结合而形成的，固相抗原6和抗体3的结合物残留于反应腔室7内。接着，对反应腔室7内残留的、固相抗原6和抗体3的结合物所具有的标记物质4的量进行测定。该测定例如以下述方式进行。首先，调制含有与标记物质4反应的测定用试剂(例如酶的基质)的溶液。接着，通过将该溶液导入反应腔室7，在反应腔室7内得到含有固相抗原6与抗体3的结合物和测定用试剂的测定溶液。在测定溶液中，使测定用试剂和标记物质4进行反应后，对反映反应生成物的量的信号进行检测。样品溶液9中的测定对象抗原2的量，根据该测定的结果、固相抗原6的量、和在工序I-B中导入反应腔室7内的样品溶液9的量而被算出。从使用微量的样品溶液，在短时间内测定样品溶液中的测定对象物质的量的观点出发，芯片型的生物传感器受到注目。例如，日本特开平2-062952号公报中公开了一种芯片型的生物传感器，该生物传感器设置有绝缘性基板，配置在基板上的电极系统，配置在电极系统上的酶反应层，以及以露出电极系统和酶反应层的方式配置在基板上的具有切口部的绝缘层。酶反应层含有由氧化还原酶和电子介质(electron mediator)等代表的、用 于诱导酶循环反应的测定用试剂。作为氧化还原酶，使用以测定对象物质为基质的酶。例如，在测定葡萄糖量的情况下使用葡萄糖氧化酶，此外，例如，在测定胆固醇量的情况下，使用胆固醇氧化酶。该生物传感器，通过在切口部滴下样品溶液，使测定用试剂溶解在样品溶液中，通过电子介质进行测定对象物质和酶的反应(酶循环反应)。样品溶液中的测定对象物质的量根据氧化电流值被计算出，该氧化电流值是通过使经酶反应而还原的电子介质电化学氧化而得到的。在图I所示的现有的免疫学测定方法中，如上所述，使用以Tris-HCL缓冲液为代表的洗涤液进行工序Ι-c。因此，为了在芯片上实施该免疫学测定方法，需要从芯片的外部供给洗涤液，或者将洗涤液预先保持在芯片上。但是，在从外部供给洗涤液的情况下，为了该供给而多余地花费劳力和时间。在将洗涤液保持在芯片上的情况下，优选以密封状态并且在洗涤时能够容易地导入芯片的状态将该液体保持在芯片上。但是，在芯片上形成这样的保持状态并不容易。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种适用于在芯片上实施的免疫学测定方法，该免疫学测定方法不需要将以Tris-HCL缓冲液为代表的洗涤液从芯片的外部进行供给并预先保持在芯片上。而且，本专利技术的目的是提供一种适于实施该免疫学测定方法的芯片。此外，本专利技术的目的是提供一种使用该芯片的测定方法。在现有的免疫学测定方法中，对于反应腔室的洗涤，认为使用不含有蛋白质等测定对象物质的以Tris-HCL缓冲液为代表的洗涤液很重要。但是，本专利技术者意外地发现了以下情况取代以Tris-HCL缓冲液为代表的洗涤液，使用含有蛋白质等测定对象物质的活体试剂来洗涤反应腔室，由此，也能够以与使用洗涤液的情况相当的优良的精度检测出反应测定对象物质的量的信号。本专利技术提供一种方法，其为使用芯片测量样品溶液中含有的测定对象抗原的量的方法，上述芯片具有反应腔室、洗涤液保持腔室、废液腔室、和注入上述样品溶液的注入孔，上述注入孔和上述反应腔室之间通过第一流路连接，上述注入孔和上述洗涤液保持腔室之间通过第二流路连接，上述洗涤液保持腔室和上述反应腔室之间通过第三流路连接，上述反应腔室和上述废液腔室之间通过第四流路连接，上述方法包括从上述注入孔注入上述样品溶液，将上述样品溶液通过上述第一流路分配给上述反应腔室，并通过上述第二流路分配给上述洗涤液保持腔室的エ序；在上述反应腔室内，使上述样品溶液中含有的测定对象抗原、与抗体结合，得到抗原抗体复合物的エ序，其中，该抗体为与上述测定对象抗原特异性结合的抗体；通过上述第三流路向上述反应腔室注入保持在上述洗涤液保持腔室中的上述样品溶液，并对具有上述抗原抗体复合物的上述反应腔室进行洗涤，由此，将从i)上述抗原抗体复合物、和ii)未与上述测定对象抗原结合的上述抗体中选择的一方残留在上述反应腔室内，并将另一方移动至上述废液腔室，将上述抗原抗体复合物和未与上述測定对象抗原结合的上述抗体分离的エ序；对上述抗原抗体复合物或未与上述测定对象抗原结合的上述抗体的量进行测定的エ序；和根据测量的上述抗原抗体复合物或未与上述測定对象抗原结合的上述抗体的量，计算出上述样品溶液中含有的上述测定对象抗原的量的エ序。本专利技术从另一方面提供ー种方法，其为测量样品溶液中含有的测定对象抗原的量的方法，该方法包括在反应腔室内，使上述测定对象抗原与抗体结合，得到抗原抗体复合 物的结合エ序，其中，该抗体为与上述测定对象抗原特异性结合的抗体；通过利用上述样品溶液对上述反应腔室进行洗涤，将上述抗原抗体复合物和未与上述测定对象抗原结合的上述抗体分离的洗涤分离エ序；对上述抗原抗体复合物或未与上述测定对象抗原结合的上述抗体的量进行測定的测定エ序；和根据测得的上述抗原抗体复合物或未与上述測定对象抗原结合的上述抗体的量，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种免疫学测定方法，其为使用芯片测定样品溶液中含有的测定对象抗原的量的方法，该方法的特征在于：所述芯片具有反应腔室、洗涤液保持腔室、废液腔室、和注入所述样品溶液的注入孔，所述注入孔和所述反应腔室之间通过第一流路连接，所述注入孔和所述洗涤液保持腔室之间通过第二流路连接，所述洗涤液保持腔室和所述反应腔室之间通过第三流路连接，所述反应腔室和所述废液腔室之间通过第四流路连接，所述方法包括：从所述注入孔注入所述样品溶液，将所述样品溶液通过所述第一流路分配给所述反应腔室，并通过所述第二流路分配给所述洗涤液保持腔室的工序；在所述反应腔室内，使所述样品溶液中含有的测定对象抗原与抗体结合，得到抗原抗体复合物的结合工序，其中，该抗体为与所述测定对象抗原特异性结合的抗体；通过所述第三流路向所述反应腔室注入保持在所述洗涤液保持腔室中的所述样品溶液，并对具有所述抗原抗体复合物的所述反应腔室进行洗涤，由此，将选自i)所述抗原抗体复合物、和ii)未与所述测定对象抗原结合的所述抗体中的一方残留在所述反应腔室内，并将另一方移动至所述废液腔室，将所述抗原抗体复合物和未与所述测定对象抗原结合的所述抗体分离的工序；对所述抗原抗体复合物或未与所述测定对象抗原结合的所述抗体的量进行测定的工序；和根据测得的所述抗原抗体复合物或未与所述测定对象抗原结合的所述抗体的量，计算出所述样品溶液中含有的所述测定对象抗原的量的工序，在所述反应腔室内固定有固相抗体，在所述结合工序中，使所述 固相抗体与所述测定对象抗原结合，进一步，使所述抗体的一部分与处于与所述固相抗体结合的状态的所述测定对象抗原结合，所述抗原抗体复合物是所述固相抗体、所述测定对象抗原和所述抗体的结合物，在进行所述分离的工序中，将所述抗原抗体复合物残留在所述反应腔室内，并将未与所述测定对象抗原结合的所述抗体移至所述废液腔室。...

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：畠冈由香利，
申请(专利权)人：松下电器产业株式会社，
类型：发明
国别省市：