荧光增白剂CBS-X检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种荧光增白剂CBS-X检测试剂盒，属于添加剂检测技术领域。该试剂盒包括每个微孔内包被浓度为1-3μg/mL荧光增白剂CBS-X特异性抗原的酶标板，浓度为1-3μg/mL的荧光增白剂CBS-X特异性抗体，且所述荧光增白剂CBS-X特异性抗原与荧光增白剂CBS-X特异性抗体溶液的用量比为1：1。本发明专利技术还公开了一种荧光增白剂CBS-X检测试剂盒制备方法。本发明专利技术的试剂盒在检测荧光增白剂CBS-X时可一次连续检测多个样品，具有便捷，快速，灵敏、成本低的特点。适合用于快速而准确得检测大批量样品中的荧光增白剂CBS-X。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种添加剂检测技术，具体来说，特别是涉及一种用于荧光增白剂CBS-X含量的酶联免疫检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
荧光增白剂0851，化学名称为4，4/ -双(2_磺酸钠苯乙烯基)联苯，属双二苯乙烯-联苯型光学增白剂，特点是增白强度高，耐氯漂，氧漂性能优良，具有优异的耐洗牢度和干、湿日晒度，匀染性能良好，适合用于洗涤用品，也可直接用于纺织品、纸张的光学增白。长期以来，荧光增白剂的安全性颇受争议，有资料显示荧光增白剂是低毒的，也有 资料显示荧光增白剂的分子结构稳定，不易被分解，在生物体内长期累积，会使细胞发生变异，产生潜在的致癌因素。因此，在未充分评估荧光增白剂的安全性的情况下，并不是所有荧光增白剂都被允许使用，欧盟、美国、日本、中国等许多国家对荧光增白剂都有一定的监管，相关法规如欧盟2002/72/EC指令、美国联邦法规21CFR178. 3297和GB 9685-2008《食品容器、包装材料用添加剂使用卫生标准》都制定了允许用于生产塑料食品接触材料和制品的添加剂清单，对允许使用的荧光增白剂的最大添加量进行限制。鉴于此，建立相关产品的荧光增白剂的快速检测方法，开展定期监测和安全性评估，对于规范行业发展，保证产品质量，保护消费者身体健康和保护环境等具有深远的意义。而荧光增白剂CBS-X做为允许添加的荧光增白剂中的一种，也亟需一种合适的快速检测方法。目前，国内外对荧光增白剂的检测方法包括以下几种紫外灯直接照射观测法、色谱法、色谱质谱联用法。其中，紫外灯直接照射观测法只是一种简单的判断，不能鉴别荧光增白剂的种类；色谱法和色谱质谱联用法具有特异性高、结果准确的优点，但是这两种方法的缺点是样品前处理繁琐，消耗大量溶剂，且需要昂贵的实验室设备，检测成本高。
技术实现思路
基于此，本专利技术在于克服现有技术的缺陷，提供一种荧光增白剂CBS-X检测试剂盒和一种荧光增白剂CBS-X试剂盒制备方法，该试剂盒在检测荧光增白剂CBS-X时可一次连续检测多个样品，具有便捷，快速，灵敏、成本低的特点。本专利技术的第一个目的在于提供一种突光增白剂CBS-X检测试剂盒,其技术方案如下一种荧光增白剂CBS-X检测试剂盒，主要包括I)包被荧光增白剂CBS-X特异性抗原的酶标板所述酶标板的每个微孔内荧光增白剂CBS-X特异性抗原的浓度为1-3 μ g/mL ；2)荧光增白剂CBS-X特异性抗体溶液该荧光增白剂CBS-X特异性抗体的浓度为1-3 μ g/mL ；所述荧光增白剂CBS-X特异性抗原与荧光增白剂CBS-X特异性抗体溶液的用量比为 I :1。在其中一个实施例中，所述荧光增白剂CBS-X检测试剂盒还包括有酶标二抗，所述酶标二抗是浓度按1:10000比例稀释的辣根过氧化物酶标记羊抗鼠二抗。在其中一个实施例中，所述荧光增白剂CBS-X特异性抗原的浓度为2μ g/mL ;所述荧光增白剂CBS-X特异性抗体的浓度为2 μ g/mL。在其中一个实施例中，所述荧光增白剂CBS-X检测试剂盒还包括荧光增白剂CBS-X标准品溶液、底物显色剂、洗涤液、终止液、封闭液和浓缩样品稀释液。在其中一个实施例中，所述特异性荧光增白剂CBS-X特异性抗体是鼠源单克隆抗体；所述荧光增白剂CBS-X特异性抗原为荧光增白剂CBS-X与载体蛋白的偶联物；所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、兔血清白蛋白、甲状腺球蛋白中的一种；所述荧光增白剂 CBS-X 标准品溶液浓度分别为 I X IO5 μ g/L, I X IO4 μ g/L, I X IO3 μ g/L, I X IO2 μ g/L,IXIOiU g/L、I X 10° μ g/L ;所述显色剂由显色剂A和显色剂B组成，所述显色剂A为过氧化氢或过氧化脲，所述显色剂B为邻苯二胺或四甲基联苯胺；所述终止液为l-2mol/L的硫酸 溶液；所述洗涤液为含有O. 05%-0. 5%吐温-20的O. 01M，pH7. 4的磷酸盐缓冲液；所述封闭液为含5%脱脂奶粉的O. 01M，pH7. 4的磷酸盐缓冲液；所述浓缩样品稀释液为O. 01M，pH7. 4的磷酸盐缓冲液；所述酶标板的材料为聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯中的一种。本专利技术的第二个目的在于提供一种荧光增白剂CBS-X检测试剂盒制备方法，主要包括以下步骤I)制备包被荧光增白剂CBS-X特异性抗原的酶标板将2-磺酸基苯甲醛、2-磺酸基-5羟基-苯甲醛和荧光增白剂CBS-X分散于干燥DMSO中，加入哌啶，微波加热，反应结束倒入水中，抽滤固体，得到带有酚羟基的荧光增白剂CBS-X衍生物；将带酚羟基的荧光增白剂CBS-X衍生物和碳酸钾分散于干燥DMF中，常温搅拌，加入N- (3-溴丙基)氨基甲酸叔丁酯，加热回流，荧光增白剂CBS-X的酚羟基被叔丁氧酰胺丙氧基所取代；随后将中间产物加入三氟乙酸中，回流搅拌，脱去叔丁氧酰基的保护，裸露出胺基，制得能够与蛋白质偶联的荧光增白剂CBS-X的半抗原；再将其与N-羟基丁二酰胺(NHS)和碳二亚胺(EDC)混合后反应，与载体蛋白偶联制备得到荧光增白剂CBS-X特异性抗原，将荧光增白剂CBS-X特异性抗原包被于酶标板中，所述酶标板的每个微孔内荧光增白剂CBS-X特异性抗原的浓度为1-3 μ g/mL ；2)制备荧光增白剂CBS-X特异性抗体以步骤I)中合成的荧光增白剂CBS-X特异性抗原作为免疫原对小鼠进行免疫；免疫后，取血清效价高的小鼠，取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合；采用有限稀释法筛选杂交瘤细胞，得到完全同质的单克隆抗体和稳定的单克隆杂交瘤细胞株；并取不完全佐剂腹腔注射进行致敏后的小鼠，将杂交瘤细胞混悬液注射到小鼠腹腔中，收集腹水，经辛酸-硫酸铵沉淀法进行腹水纯化，得到纯化的荧光增白剂CBS-X单克隆抗体；所述荧光增白剂CBS-X特异性抗体的浓度为1-3 μ g/mL。在其中一个实施例中，上述步骤I)中，制备荧光增白剂CBS-X特异性抗原的方法优选为将O. 186g,即I. Ommol的2-磺酸基苯甲醒、O. 20g,即I. Ommol的2-磺酸基_5轻基-苯甲醛和O. 40g,即I. Ommol的荧光增白剂CBS-X分散于30mL干燥DMSO中，加入哌啶3mL，微波500瓦加热5min，反应结束倒入水中，抽滤固体，得到带有酚羟基的荧光增白剂CBS-X衍生物；将O. 53g，即I. Ommol的带酚羟基的荧光增白剂CBS-X衍生物和I. Olg,即IOmmol的碳酸钾分散于80mL干燥DMF中，常温搅拌30min,加入I. 2g,即5mmol的N- (3-溴丙基)氨基甲酸叔丁酯，加热回流5h，荧光增白剂CBS-X的酚羟基被叔丁氧酰胺丙氧基所取代；随后将中间产物加入30倍的三氟乙酸(TFA)中，回流搅拌lh，脱去叔丁氧酰基的保护，裸露出胺基，制得能够与蛋白质偶联的荧光增白剂CBS-X的半抗原；再将其与N-羟基丁二酰胺和碳二亚胺混合后反应，与牛血清白蛋白偶联制备得到荧光增白剂CBS-X特异性抗原。在其中一个实施例中，上述步骤2)为以步骤I)中合成的荧光增白剂CBS-X特异性抗原作为免疫原对10周龄的Ba lb/c小鼠进行免疫，首次免疫使用完全弗氏佐剂与荧光增白剂CBS-X特异性抗原溶液乳化，抗原浓度为O. 5mg/mL，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种荧光增白剂CBS？X检测试剂盒，其特征在于，主要包括：1）包被荧光增白剂CBS？X特异性抗原的酶标板：所述酶标板的每个微孔内荧光增白剂CBS？X特异性抗原的浓度为1？3μg/mL；2）荧光增白剂CBS？X特异性抗体溶液：该荧光增白剂CBS？X特异性抗体的浓度为1？3μg/mL；所述荧光增白剂CBS？X特异性抗原与荧光增白剂CBS？X特异性抗体溶液的用量比为1：1。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：冼燕萍，郭新东，罗海英，侯向昶，吴玉銮，邓龙，罗东辉，柯振华，
申请(专利权)人：广州市质量监督检测研究院，
类型：发明
国别省市：