一种紫杉醇菌株的筛选方法及其半定量分析技术

本发明专利技术公布了一种紫杉醇菌株的筛选方法及其半定量分析，属于微生物发酵产物的测定与检验方法技术领域，包括紫杉醇标准溶液的配制、真菌发酵与薄层层析、紫杉醇菌株的筛选与半定量分析方法等。称取紫杉醇标准品2mg，溶解于10mL三氯甲烷，配制成0.2mg/mL标准溶液；分离红豆杉内生真菌纯培养物进行液体发酵；对发酵液的滤液萃取后收集有机相，获得内生真菌发酵液的萃取物；将标准紫杉醇溶液或真菌发酵产物的萃取物进行薄层层析与显色反应；根据显色反应结果可以从红豆杉内生真菌中筛选到紫杉醇菌株并对菌株的紫杉醇产量进行半定量分析。本发明专利技术重现性较好，灵敏度较高，专一性较强，筛选效率较高，与高效液相色谱等分析方法相比较具有更低的设备和技术要求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种紫杉醇菌株的筛选方法及其半定量分析，属于微生物发酵产物的测定与检验方法

技术介绍
紫杉醇(Taxol)为二萜类化合物，具有较为独特的抗肿瘤机制，通过影响微管蛋白的稳定来抑制肿瘤细胞的分裂和增殖。但是紫杉醇作为重要的天然抗癌药物，药源问题一直未得到有效解决。直到现在，商业用紫杉醇主要提取自红豆杉属植物的树皮，红豆杉是世界性的濒危珍稀植物，而且紫杉醇在红豆杉树皮内的含量极低，结果导致紫杉醇的供需矛盾突出。为了在不破会自然资源的情况下有效解决紫杉醇的药源问题，各国学者主要从三个方面开展研究工作。 一是紫杉醇的化学合成。尽管全合成或半合成紫杉醇的研究均已经取得积极进展，但是合成步骤太多，合成条件难以控制，产物收率偏低，并不适于工业化生产； 二是红豆杉的组织培养和细胞培养。期望通过生物反应器实现大规模培养并最终获取目的产物，但是红豆杉细胞容易褐化、培养物生物量小，培养规模小、紫杉醇产率较低和生产稳定性差等问题并没有得到彻底解决，距离真正实现紫杉醇工业化生产还有距离； 第三个是真菌发酵，通过微生物发酵的方法生产紫杉醇开创了解决紫杉醇药源问题的新思路。由于真菌生长本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种紫杉醇菌株的筛选方法及其半定量分析，包括紫杉醇标准溶液的配制、真菌发酵产物的制备，其特征在于：还包括薄层层析与显色反应、紫杉醇菌株的筛选和菌株紫杉醇产量的半定量分析，（1）真菌发酵产物的制备：选取若干红豆杉植物的组织块进行表面消毒，分离内生真菌纯培养物；将得到的菌株充分活化，转接入50mL种子培养基，22℃、130？rpm/min，恒温振荡培养3天获得发酵种子；以20%（体积比）接种量，转接100mL发酵培养基，22℃，110？rpm/min，恒温振荡培养15天后完成发酵；过滤内生真菌的发酵产物，滤液用等体积的氯仿？甲醇液(10/1，体积比)萃取2次，收集有机相，即真菌发酵产物的萃取物；（...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：臧威，孙剑秋，范呈浪，尹军霞，沈国娟，
申请(专利权)人：绍兴文理学院，
类型：发明
国别省市：