本发明专利技术涉及医药领域，特别涉及一种从菝葜中提取高纯度抗肿瘤物质氧化白藜芦醇的方法，本发明专利技术采用酶解后二氧化碳超临界萃取，粗产物又通过三次柱层析提纯的工艺。整套工艺成熟、稳定、产率高，终产物纯度好，能够应用于许多分析实验和精密配制。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药领域，特别涉及。
技术介绍
氧化白藜芦醇化学名为2，4，3’，5’-四羟基芪，熔点为203 207°C，外观为黄色结晶体，比红酒活性物质白藜芦醇多一个酚羟基，具有更高的抗氧化活性。此外还具有抗炎、抗血栓、防癌、抗癌、抗高血脂症、抗菌等多方面的活性。氧化白藜芦醇在自然界中含量很少，目前仅发现在桑白皮、菝葜等植物中含量较高，其化学合成工艺复杂且产率很低。专利号为200910104202的专利技术公开了一种从桑白皮中提取氧化白藜芦醇的方法，该方法工艺简单，但所得产物纯度较低，无法应用于许多分析实验和精密配制。且由于该提取方法一开始便扔掉了酶解后有效成分远未提取完全的滤渣，只利用了滤液，所以提取率较低，每吨桑白皮只能提取到15(Γ200克氧化白藜芦醇，成本过于昂贵。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一套从菝葜中提取高纯度抗肿瘤物质氧化白藜芦醇的方法，通过设计筛选成熟的工艺步骤和工艺参数，以得到高产率、高纯度的氧化白藜芦醇。为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案 ，其特征在于，依次通过下列步骤实现 1)取菝葜粉碎成40目粗粉；配置Ph值为6.5，酶浓度为5g/L的纤维素酶酶解液；取菝葜质量数与酶解液体积数之比为I :20，酶解温度为40-45°C，酶解8小时； 2)将酶解后的菝葜滤出，与85%的乙醇混合成悬浮物，加热至50°C，施压30MPa，采用CO2超临界流体以10kg/h的速度进行萃取；控制分离压力5. 5 MPaJ^ CO2流体与萃取物进行减压分离；得总产物； 3)将总产物加入热水至溶解，溶液通过AB-8大孔吸附树脂；先用水洗去杂质，再用6倍柱体积的75%乙醇以6倍柱体积/小时洗脱目标产物；洗脱液采用负压成膜浓缩，干燥，得粗品A ; 4)将粗品A进行硅胶柱层析，工艺条件为采用100目硅胶，粗品A与硅胶质量比150，采用氯仿-甲醇体积比5 1的洗脱剂，洗脱流速为O. 5倍柱体积/小时，洗脱体积为30倍量柱体积；浓缩洗脱液，干燥，得粗品B ； 5)将粗品B进行葡聚糖凝胶SephadexLH-20纯化，纯化条件粗品B与SephadexLH-20质量比为I :100，采用正己烷-二氯甲烷-甲醇体积比为10 15 75的溶剂洗脱体系，洗脱流速O. 3mL / min，洗脱体积为3倍量柱体积；浓缩洗脱液，干燥，得粗品C ； 6)将粗品C进行C18反相娃胶纯化,纯化条件粗品C与C18反相娃胶质量比为I:100,采用甲醇-水体积比为35 65溶剂洗脱体系，洗脱流速15ml/小时，洗脱体积为5倍量柱体积；浓缩，干燥，即得高纯度氧化白藜芦醇。本方明的有益效果 I、本专利技术采用一定参数超临 界萃取酶解后的菝葜，使得氧化白藜芦醇的产率大大提高，平均每吨菝葜药材得终产物达I. 12^2. 35千克。2、本专利技术最终所制得的氧化白藜芦醇纯度可达99.8%，质量更稳定，能够应用于许多分析实验和精密配制。3、本专利技术整套工艺成熟、稳定，适于工业化大生产。具体实施例方式为了更好地理解和实施本专利技术，下面结合具体实施例进一步说明本专利技术。具体实施例I ，依次通过下列步骤实现 1)取菝葜粉碎成40目粗粉；配置Ph值为6.5，酶浓度为5g/L的纤维素酶酶解液；取菝葜质量数与酶解液体积数之比为I :20，酶解温度为40-45°C，酶解8小时； 2)将酶解后的菝葜滤出，与85%的乙醇混合成悬浮物，加热至50°C，施压30MPa，采用CO2超临界流体以10kg/h的速度进行萃取；控制分离压力5. 5 MPaJ^ CO2流体与萃取物进行减压分离；得总产物； 3)将总产物加入热水至溶解，溶液通过AB-8大孔吸附树脂；先用水洗去杂质，再用6倍柱体积的75%乙醇以6倍柱体积/小时洗脱目标产物；洗脱液采用负压成膜浓缩，干燥，得粗品A ; 4)将粗品A进行硅胶柱层析，工艺条件为采用100目硅胶，粗品A与硅胶质量比150，采用氯仿-甲醇体积比5 1的洗脱剂，洗脱流速为O. 5倍柱体积/小时，洗脱体积为30倍量柱体积；浓缩洗脱液，干燥，得粗品B ； 5)将粗品B进行葡聚糖凝胶SephadexLH-20纯化，纯化条件粗品B与SephadexLH-20质量比为I :100，采用正己烷-二氯甲烷-甲醇体积比为10 15 75的溶剂洗脱体系，洗脱流速O. 3mL / min，洗脱体积为3倍量柱体积；浓缩洗脱液，干燥，得粗品C ； 6)将粗品C进行C18反相娃胶纯化,纯化条件粗品C与C18反相娃胶质量比为I:100,采用甲醇-水体积比为35 65溶剂洗脱体系，洗脱流速15ml/小时，洗脱体积为5倍量柱体积；浓缩，干燥，即得高纯度氧化白藜芦醇。权利要求1.，其特征在于，依次通过下列步骤实现 1)取菝葜粉碎成40目粗粉；配置ph值为6.5，酶浓度为5g/L的纤维素酶酶解液；取菝葜质量数与酶解液体积数之比为I :20，酶解温度为40-45°C，酶解8小时； 2)将酶解后的菝葜滤出，与85%的乙醇混合成悬浮物，加热至50°C，施压30MPa，采用CO2超临界流体以10kg/h的速度进行萃取；控制分离压力5. 5 MPaJ^ CO2流体与萃取物进行减压分离；得总产物； 3)将总产物加入热水至溶解，溶液通过AB-8大孔吸附树脂；先用水洗去杂质，再用6倍柱体积的75%乙醇以6倍柱体积/小时洗脱目标产物；洗脱液采用负压成膜浓缩，干燥，得粗品A ; 4)将粗品A进行硅胶柱层析，工艺条件为采用100目硅胶，粗品A与硅胶质量比150，采用氯仿-甲醇体积比5 1的洗脱剂，洗脱流速为0. 5倍柱体积/小时，洗脱体积为30倍量柱体积；浓缩洗脱液，干燥，得粗品B ； 5)将粗品B进行葡聚糖凝胶SephadexLH-20纯化，纯化条件粗品B与SephadexLH-20质量比为I :100，采用正己烷-二氯甲烷-甲醇体积比为10 15 75的溶剂洗脱体系，洗脱流速0. 3mL / min，洗脱体积为3倍量柱体积；浓缩洗脱液，干燥，得粗品C ； 6)将粗品C进行C18反相娃胶纯化,纯化条件粗品C与C18反相娃胶质量比为I:100,采用甲醇-水体积比为35 65溶剂洗脱体系，洗脱流速15ml/小时，洗脱体积为5倍量柱体积；浓缩，干燥，即得高纯度氧化白藜芦醇。全文摘要本专利技术涉及医药领域，特别涉及，本专利技术采用酶解后二氧化碳超临界萃取，粗产物又通过三次柱层析提纯的工艺。整套工艺成熟、稳定、产率高，终产物纯度好，能够应用于许多分析实验和精密配制。文档编号C07C39/21GK102795971SQ201210322859公开日2012年11月28日 申请日期2012年9月4日 优先权日2012年9月4日专利技术者刘永俊, 刘晓娜, 王继鹏 申请人:烟台渤海制药集团有限公司本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种从菝葜中提取高纯度抗肿瘤物质氧化白藜芦醇的方法，其特征在于，依次通过下列步骤实现：1）取菝葜粉碎成40目粗粉；配置ph值为6.5，酶浓度为5g/L的纤维素酶酶解液；取菝葜质量数与酶解液体积数之比为1：20，酶解温度为40？45℃，酶解8小时；2）将酶解后的菝葜滤出，与85%的乙醇混合成悬浮物，加热至50℃，施压30MPa，采用CO2超临界流体以10kg/h的速度进行萃取；控制分离压力5.5？MPa，对CO2流体与萃取物进行减压分离；得总产物；3）将总产物加入热水至溶解，溶液通过AB？8大孔吸附树脂；先用水洗去杂质，再用6倍柱体积的75%乙醇以6倍柱体积/小时洗脱目标产物；洗脱液采用负压成膜浓缩，干燥，得粗品A；4）将粗品A进行硅胶柱层析，工艺条件为：采用100目硅胶，粗品A与硅胶质量比：1：50，采用氯仿？甲醇体积比5：1的洗脱剂，洗脱流速为0.5倍柱体积/小时，洗脱体积为30倍量柱体积；浓缩洗脱液，干燥，得粗品B；5）将粗品B进行葡聚糖凝胶Sephadex？LH？20纯化，纯化条件：粗品B与Sephadex？LH？20质量比为？1：100，采用正己烷？二氯甲烷？甲醇体积比为10：15：75的溶剂洗脱体系，洗脱流速0.3mL／min，洗脱体积为3倍量柱体积；浓缩洗脱液，干燥，得粗品C；6）将粗品C进行C18反相硅胶纯化，纯化条件：粗品C与C18反相硅胶质量比为1：100，采用甲醇？水体积比为35：65溶剂洗脱体系，洗脱流速15ml/小时，洗脱体积为5倍量柱体积；浓缩，干燥，即得高纯度氧化白藜芦醇。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘永俊，刘晓娜，王继鹏，
申请(专利权)人：烟台渤海制药集团有限公司，
类型：发明
国别省市：
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