本发明专利技术公开了一种山大颜提取物及其制备方法与抗肿瘤应用。山大颜提取物由如下方法制备而成：将山大颜经乙醇或甲醇加热回流或渗滤提取，减压浓缩得到浸膏，经大孔树脂富集，甲醇－水洗脱，得到山大颜提取物。本发明专利技术的山大颜提取物可用于制备治疗肿瘤的药物和保健品，其效部位成分明确，毒性小，药理作用强，具有良好的药用前景；制备工艺简单、易于大规模生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及天然药物及化学药物领域，具体涉及山大颜提取物及其主要成分的制备方法和在抗肿瘤方面的应用。
技术介绍
目前，我国共有恶性肿瘤患者约450万人，毎年新增病例200多万，死亡病例约170万。恶性肿瘤已经超越心脑血管疾病，成为威胁人类生命的第一大杀手。因此，研究开发抗癌药物一直是全世界医药界难点和热点。在我国，临床上中草药已被广泛应用于抗肿瘤，具有确切的疗效、较低的毒副作用、不易产生耐药等特点，越来越受到医药工作者的关注。据统计，目前抗肿瘤药物中约有60%来源于天然产物。 山大颜为菌草科植物九节木(Psychotria asiatica L.)的干燥叶及嫩枝,又名大丹叶、暗山公、暗山香、刀伤木、青龙吐雾(台湾)。具有清热燥湿、解毒、杀虫等功效。临床上常用于治疗感冒、上呼吸道感染、急性扁桃体炎、肠炎、细菌性痢疾、高血压等疾病。近年有研究表明，山大颜能具有显著的抗老年痴呆的活性。同时也是国家非物质文化遗产——广东凉茶的常用中药之一，但是尚未见山大颜在抗肿瘤研究方面的报道。本专利首次公开了山大颜总三職阜苷及其7种主要成分Psychotrianosides A^G的抗肿瘤作用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种山大颜提取物及其制备方法和在抗肿瘤方面的应用。本专利技术的目的通过下述技术方案实现一种山大颜提取物，其化学成分主要为三萜皂苷类,其中总三萜皂苷所占质量百分数为2(T90% ;所述总三萜皂苷主要是13-28环氧的乌苏烷型三萜皂苷，主要包括新化合物Psychotrianosides A F(1 6)和从自然界中首次获得的天然产物PsychotrianosidesG(7)(结构如图I所示)的混合物，此7种三萜皂苷占总三萜皂苷质量的2(T80% ;所述具有抗肿瘤作用的山大颜提取物HPLC检测总皂苷含有上述7种三萜皂苷的含量依次为6 10%的1、10 40%的2、2 5%的3、3 8%的4、3 8%的5、3 8%的6、10 15%的7 ;所述百分比为质量百分比；所述具有抗肿瘤作用的山大颜主要成分是指三職阜苷化合物PsychotrianosidesA G。所述Psychotrianosides KX的制备方法包括以下步骤山大颜经こ醇/水加热提取，减压浓缩得浸膏，浸膏加水搅拌，依次用有机溶剂萃取，正丁醇部位大孔树脂富集，こ醇/水洗脱，产物在经反相ODS分离纯化(甲醇/水洗脱)、重结晶后得到。所述山大颜提取物由如下方法制备而成将山大颜经こ醇或甲醇加热回流或渗滤提取，减压浓缩得到浸膏，经大孔树脂富集，甲醇一水洗脱，得到山大颜提取物。所述こ醇或甲醇的体积浓度是65、0%。具体包括如下步骤山大颜(Psychotria sp.)干燥莖经こ醇(或甲醇)80°C回流(或渗滤)提取，减压浓缩得到浸膏，浸膏经大孔树脂富集，甲醇一水(V/V=4(T90%)梯度洗脱，得到山大颜提取物；该提取物经硅胶柱层析分离，用石油醚(PE)-こ酸こ酯(EtOAc) (100:0 - 0:100)梯度洗脱(10个百分点为ー个梯度)，TLC追踪，得至IJ 18个馏分(〇1-(18)，馏分(15经氯仿甲醇(10:1 10:3)梯度洗脱(每1001111为ー个流份)，TLC追踪，得两个馏分Al (10:1)和A2 (10:3) ；A1经反相碳十八(简称ODS) (VMe0H/VH20=85:15)分离纯化，TLC 追踪，依次得 7，I。A2 经 ODS (VMeOH/VH2O=60:40)分离纯化，TLC 追踪，10%硫酸こ醇显色，依次得2和3 ；C18经ODS (VMeOH/VH2o=50:50^60:40)纯化，TLC追踪，10%硫酸こ醇显色，依次得4、5、6。上述山大颜提取物能用于制备治疗肿瘤药物或保健品，所述肿瘤为胃癌、肝癌、肺癌、肠癌、鼻咽癌、乳腺癌、耐药型肝癌或耐药型乳腺癌。肿瘤细胞包括NCI-N87 (人胃癌细胞)、A549 (人非小细胞肺癌细胞)、Lovo (人结肠癌细胞)、CNE-2 (人鼻咽癌细胞)、DU145 (人前列腺癌细胞)、KB (人口腔上皮癌细胞)、MDA-MB-231 (人乳腺癌细胞)、H印G2 (人肝癌细胞)、H印G2/ADM (人肝癌多柔比星耐药株)、MCF-7 (人乳腺癌细胞)、MCF-7/ADR (人乳腺癌阿霉素耐药株)。本专利技术相对于现有技术具有 如下的优点及效果I、山大颜提取物总三萜皂苷用于治疗癌症，有效部位成分明确，毒性小，药理作用强，具有良好的药用前景。2、本专利技术的山大颜提取物(20 100 ii g/ml浓度下)和Psychotrianosides A^G(5^50 u M)即可显著抑制肿瘤细胞敏感株和多药耐药株的生长。3、本专利技术的山大颜提取物在体内可明显抑制移植瘤的生长，灌胃给药200mg/kg的抑制率达43. 63% ；Psychotrianosides B灌胃给药50mg/kg的抑制率达48. 71%。4、本专利技术的山大颜提取物和Psychotrianosides B在体内毒性很低，灌胃给药5g/kg仍未见明显毒性。5、本专利技术的原料山大颜资源广泛、价廉，制备エ艺简单、易于大规模生产，所得提取物中总三萜皂苷含量高达50%以上。6、本专利技术中的含有Psychotrianosides A G七种有效成分的、总含量为f 99%的山大颜提取物总三萜皂苷可与药学上可接受的赋型剂一起，采用本领域的常规方法制备成各种剂型，如片剂、丸剤、胶囊剂、颗粒剂等。给药剂量为50-500mg/人/次，每天广3次。附图说明图I为山大颜中三萜皂苷类成分的化学结构图。具体实施例方式下面结合实施例对本专利技术作进ー步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。实施例I、山大颜提取物的制备干燥的山大颜(Psychotria sp.)莖(产于广东从化)2. Okg,粉碎后过20目筛,用95%こ醇25L渗滤提取，滤出提取液，减压浓缩至浸膏(300g)，然后加入2L的水，进行大孔树脂富集，洗脱剂甲醇一水梯度洗脱(10个百分点为ー个梯度)，TLC追踪，5(T90%段收集，减压浓缩除去溶剂即为山大颜提取物(60g)。经HPLC測定，总三萜皂苷的质量含量为88%。其中7种三萜皂苷的含量依次为:8. 5%的1,22. 8%的2、2. 5%的3、6. 0%的4、2. 5%的5、5. 0%的6、15. 0%的7 ;所述百分比为质量百分比。实施例2、山大颜提取物的制备干燥的山大颜(Psychotria sp.)莖(产于广东从化)2. Okg,粉碎后过20目筛,用甲醇25L渗滤提取，滤出提取液，减压浓缩至浸膏(350g)，然后加入2L的水，进行大孔树脂富集，洗脱剂甲醇-水(10个百分点为ー个梯度)，TLC追踪，65 90%段收集，减压浓缩除去溶剂即为山大颜提取物(70g)。经HPLC測定，总三萜皂苷的质量含量为93%。其中7种三萜皂苷的含量依次为9. 0% 的 1、35. 0% 的 2、2. 5% 的 3、7. 0% 的 4、2. 5% 的 5、5. 5% 的 6、14. 0%的7 ;所述百分比为质量百分比。实施例3、山大颜提取物的制备干燥的山大颜(Psychotria sp.)莖(产于广东从化)2. Okg,粉碎后过20目筛,用60-80%甲醇/水25L加热回本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种山大颜提取物，其特征在于由如下方法制备而成：将山大颜经乙醇或甲醇加热回流或渗滤提取，减压浓缩得到浸膏，经大孔树脂富集，甲醇－水洗脱，得到山大颜提取物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张翠仙，张冬梅，陈敏峰，叶文才，雷玲芳，王志芳，钟莹，
申请(专利权)人：广州中医药大学，暨南大学，
类型：发明
国别省市：
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