本发明专利技术属医药技术领域，具体涉及一种维吾尔药薄荷抗肿瘤提取物及其组合物的医药用途和制备方法以及它在制备预防及治疗乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、脑胶质瘤、肝癌等恶性肿瘤药物中的应用。所述的提取物通过如下方法获得：维吾尔药薄荷经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用体积比为100：12的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，继用体积比为100：17的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，用100：17石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥即为该抗肿瘤提取物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属医药
，具体涉及一种维吾尔药薄荷抗肿瘤提取物及其组合物的制备方法以及它在制备预防及治疗肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、宫颈癌、脑胶质瘤等恶性肿瘤药物中的应用。
技术介绍
薄荷（Mentha haplocalyx）具有疏散风热，清利头目，利咽透疹，疏肝行气。最早期于欧洲地中海地区及西亚洲一带盛产。现时主要产地为美国、西班牙、意大利、法国、英国、巴尔干半岛等，亚洲也有一些地方种植，而中国大部分地方如江苏、浙江、江西等都有出产。本专利技术在深入地研究薄荷的抗癌活性时意外地发现，薄荷具有很好的乳腺癌、宫颈癌、肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、脑胶质瘤等恶性肿瘤的预防及治疗作用，该活性提取物及其组合物有望应用到多种癌症的预防和治疗上。
技术实现思路
本专利技术所解决的技术问题是提供一种薄荷提取物。本专利技术还提供了以薄荷提取物为主要活性成分的组合物。本专利技术同时提供了薄荷提取物及其组合物的制备和在制备抗肿瘤药物中的应用。本专利技术是通过如下技术方案实现的：维吾尔药薄荷经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶（SiO2）柱分离，上样后的硅胶柱，用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱（石油醚：乙酸乙酯，比例见表1），各石油醚：乙酸乙酯比例混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外抗肿瘤活性筛选体系测试其抗肿瘤活性，意外地发现先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:12，体积比）洗脱，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:17，体积比）洗脱，洗脱得到的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:17，体积比）洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为抗肿瘤活性提取物，而其他比例的洗脱组分，不具有抗肿瘤活性。最优为先用100:12的石油醚：乙酸乙酯混合溶剂洗脱10倍柱体积，继用100：17的石油醚：乙酸乙酯混合溶剂洗脱15倍柱体积洗脱液干燥后即得本专利技术抗肿瘤活性的提取物。抗肿瘤活性的提取物可以通过以上方法得到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该抗肿瘤活性提取物从未见文献报道，其薄层谱色谱（TLC）分析表征如图1，TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（3:1:1）显色方法：香草醛-硫酸显色。具体，发现过程如下：1、薄荷经甲醇超声提取物的制备取维吾尔药薄荷20 g，经100 ml甲醇超声提取15 min，提取液浓缩后，得提取物SN0327A 1.610 g，留样0.1796 g，剩余1.4304 g，石油醚-乙酸乙酯系统洗脱。2、石油醚：乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱方法和结果取维吾尔药薄荷20 g，经100 ml甲醇超声提取15 min，提取液浓缩后，得提取物SN0327A 1.610 g，留样0.1796 g，剩余1.4304 g。上柱，甲醇溶解，共用甲醇15 ml。上硅胶柱色谱，拌样硅胶2.5 g，空白硅胶10 g，玻璃柱内径2.0 cm，石油醚：乙酸乙酯系统梯度洗脱（条件见表1），柱体积25 ml，每个梯度洗脱200 ml，得到，各个浓度提取洗脱液的洗脱物，回收溶剂，即得，石油醚：乙酸乙酯梯度洗脱提取物，TLC分析结果见图2，图3，TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（6:1:1），石油醚：乙酸乙酯：丙酮（3:1:1）显色方法：香草醛-硫酸显色。表13、抗肿瘤活性筛选方法和结果1）实验条件a) 细胞株信息人宫颈癌细胞株hela购于中国典型培养物保藏中心细胞库。b) 药品及试剂样品无菌条件下，DMSO 溶解配置成母液浓度为100mg/mL，使用时用RPMI-1640 培养液稀释至所需浓度（DMSO≤1 ‰）。RPMI Medium 1640培养基干粉购于美国GIBCO公司。胎牛血清购于北京元亨圣马生物技术研究所。Trypsin 1:250、二甲基二苯基四氮唑溴盐（MTT）。c) 仪器CO2培养箱（SANYO，日本）垂直层流洁净工作台（上海上净净化设备有限公司）倒置生物显微镜（重庆光电仪器有限公司）低/高速台式离心机（上海安亭科学仪器厂）电子天平（奥豪斯仪器有限公司）酶标仪（伯乐生命医学产品有限公司）立式压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）鼓风干燥箱（上海跃进医疗器械厂）PH计（SARTORIUS，德国）2）实验方法和过程人宫颈癌细胞株hela以4000/孔的密度铺于96孔板，每孔100ul，12h后使用。各组分以DMSO溶解为100mg/mL储存液，保存于-20℃待用。铺板后12h，观察细胞汇合率约为40%，加药，浓度均为100μg/mL，每个组分3 个复孔。每板细胞设立二个对照组(培养基+细胞；含0.1%DMSO培养基+细胞)，3个空白孔(只有培养基)。加入药物24小时后，加入20μl四甲基偶氮唑盐化学名为3-(4,5-二甲基噻唑)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(3-(4,5-dimethyl-2thiazolyl)-2, 5-diphenyl-tetrazolium bromide，MTT)，继续培养4小时。完全弃去上清液，加入100μl DMSO，混匀使MTT完全溶解，去气泡。490nm测定OD值。抑制率 ( IR) =
3）实验结果表2结果发现：本专利技术最优方案为：维吾尔药薄荷经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:12，体积比）洗脱，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:17，体积比）洗脱，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:17，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，得到的高活性提取物，即为该抗肿瘤的提取物。该抗肿瘤活性提取物从未见文献报道，其TLC分析表征如图1。4、抗肿瘤有效提取物的提取方法研究1）提取溶剂的种类研究分别用甲醇、乙醇、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂等有机溶剂提取，并测试提取物对MCF7细胞的抗肿瘤活性，结果如下：表3研究结果表明：提取用有机溶剂可以为甲醇、乙醇、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂。2）提取溶剂的用量研究分别用1、2、5、10、20、30、40、50倍（重量/体积比）有机溶剂提取，并测试提取物对hela细胞的的抗肿瘤活性，结果如下：表4提取物提取用有机溶剂用量为药材重量的2-50倍（重量/体积比）。3）干燥方法的研究分别用真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法等方法，对得到的抗肿瘤活性提取物进行干燥，以含水量、TLC、活性测试为指标，发现真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法适用于对MCF7细胞抗肿瘤活性提取物进行干燥，其中，最优为真空干燥法、冷冻干燥法。表5优选地，薄荷抗肿瘤提取物的制备方法为：维吾尔药薄荷经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:12，体积比）洗脱2-50倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:17，体积比）洗脱2-50倍柱体积，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:17，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，得到的高活性提取物，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种维吾尔药薄荷提取物，其特征为维吾尔药薄荷经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用体积比为100：12的石油醚‑乙酸乙酯混合溶剂洗脱，继用体积比为100：17的石油醚‑乙酸乙酯混合溶剂洗脱，用100：17石油醚‑乙酸乙酯混合溶剂洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥即为该提取物。
【技术特征摘要】
1.一种维吾尔药薄荷提取物，其特征为维吾尔药薄荷经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用体积比为100：12的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，继用体积比为100：17的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，用100：17石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥即为该提取物。2.如权利要求1所述维吾尔药薄荷提取物，其特征为，该提取物的提取用溶剂可以为甲醇、乙醇、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂或乙醇水混合溶剂，最优条件为甲醇或95%乙醇。3.如权利要求1所述维吾尔药薄荷提取物，其特征为维吾尔药薄荷经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:12，体积比）洗脱，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:17，体积比）洗脱，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:17，体积比）洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥，即为该提取物。4.如权利要求1-3所述维的维吾尔药薄荷提取物，其特征为，洗...
【专利技术属性】
技术研发人员：王金辉，李国玉，王航宇，黄健，张珂，逢小博，吴林英，张寒青，
申请(专利权)人：石河子大学，
类型：发明
国别省市：新疆;65
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