本发明专利技术涉及用于递送生物活性剂的幽门螺杆菌菌株，特别的是，本发明专利技术提供幽门螺杆菌的分离的菌株，所述菌株具有：(a)低致病性；(b)天然转化能力；和(c)无需宿主适应而定殖于小鼠胃粘膜的能力。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及对于递送生物活性剂有用的幽门螺杆菌的菌株。
技术介绍
活的细菌，例如益生菌或活的减毒病原体，代表了递送一系列生·物活性剂，如疫苗抗原、生物活性分子或甚至DNA的引人注目的运载体(vehicle)。细菌递送运载体的固有优势包括口服施用，以及化合物在一段延迟的时间内的持续释放消除了重复服药的必要。目前商业上可获得的疫苗和药物主要是胃肠外施用、需要多次服用并依赖于医务人员和冷链的。由于活细菌运载体可以口服递送，可能只需要单一服用并能递送大分子，例如，多个抗原，它们为常规的预防和治疗剂提供了备选方案。此外，细菌运载体非常适合大规模生产和配制，并且冻干时稳定。这些属性使这种递送形式很有吸引力，并可能导致各种疫苗和药物的合规性提高，分配更佳和成本降低。已经推荐了几种基于多种细菌，包括志贺氏菌属菌种(Shigella spp.)(美国专利No. 7，235，234)、沙门氏菌属菌种(Salmonella spp.)(美国专利申请 No. 20090022691)和乳杆菌属菌种(Lactobacillus spp.)(美国专利申请No. 20090074734)的细菌递送系统，但在这些系统中仍存在一些固有问题。一般而言，为了用作递送运载体，要操作细菌以产生具有所要求特性的菌株。重要的是，应确保细菌的安全性概况(profile)。传统的用作递送运载体的细菌已经减毒为低病原性或非致病性；然而，由于致病基因可以重新获得并导致细菌回复为具有致病能力的有毒形式，很难保证这些细菌的安全。此外，操纵细菌菌株使其可进行转化或定殖(colonize)于动物模型，可导致间接的(secondary)不良特性的产生，或最低限度妨碍实验和细菌递送运载体转入临床的延迟。例如，为使实验可以在动物模型，如小鼠中进行，对于菌株的操作可导致此株系不定殖于目标宿主，通常为人。因此，应该尽可能地避免为产生具有所需特点的菌株而操纵细菌。本专利技术的专利技术人先前已经建议在细菌递送系统中使用幽门螺杆菌(美国专利申请号20070134264)，其解决了上述鉴定的许多问题；然而，尽管美国专利申请号2007013464提供了丰富的关于使用幽门螺杆菌作为细菌递送运载体的信息，开发具有特定性质的特定细菌菌株将是有用的。
技术实现思路
在第一个方面，本专利技术提供幽门螺杆菌的分离的菌株，其具有以下特征(a)低致病性；(b)天然转化能力；和(C)无需宿主适应而定殖于小鼠胃粘膜的能力。幽门螺杆菌具有独特的特点，使其适合用作生物活性剂的活细菌递送运载体。本专利技术的幽门螺杆菌菌株分离自无症状并显示最小的病理学的个体，使菌株安全用于人。此夕卜，本专利技术的菌株是天然可转化的并且能够定殖于幽门螺杆菌-小鼠模型而无需事先适应。这促进了临床前试验并意味着最小程度地操纵菌株，允许准确、直接地翻译对人的结果。因此，本专利技术的幽门螺杆菌菌株高度适于用作活细菌递送运载体。在一些实施例中，本专利技术的幽门螺杆菌能够在哺乳动物受试者中形成慢性感染。在一些实施例中，本专利技术的幽门螺杆菌菌株不表达一种或多种功能性致病因子，例如 vacA si 或 cagA。在第二个方面，本专利技术提供幽门螺杆菌的分离的菌株，其或者是(i)vacA si 或 cagA 阴性；或者是(ii)vacA s2 和 cagA 阳性；并且其中所述的幽门螺杆菌菌株具有(a)低致病性，(b)天然转化能力 '及(c)无需宿主适应而定殖于小鼠胃粘膜的能力。在一些实施例中，本专利技术提供幽门螺杆菌菌株，其具有选自下组的菌株的特性以登录号V09/009101保藏于国家计量研究院(National Measurement Institute)的0ND737 ；以登录号V09/009102保藏于国家计量研究院的0ND738 ；以登录号V09/009103保藏于国家计量研究院的0ND739 ；以登录号V10/014059保藏于国家计量研究院的0ND248 ；以登录号V10/014060保藏于国家计量研究院的0ND256 ;和以登录号V09/009104保藏于国家计量研究院的0ND740，或其具有如上述定义的能力的突变体或衍生株。在第三个方面，本专利技术提供幽门螺杆菌菌株0ND737，以登录号V09/009101保藏于国家计量研究院。在第四个方面，本专利技术提供幽门螺杆菌菌株0ND738，以登录号V09/009102保藏于国家计量研究院。 在第五个方面，本专利技术提供幽门螺杆菌菌株0ND739，以登录号V09/009103保藏于国家计量研究院。在第六个方面，本专利技术涉及幽门螺杆菌菌株0ND740，以登录号V09/009104保藏于国家计量研究院。在第七个方面，本专利技术涉及幽门螺杆菌菌株0ND248，以登录号V10/014059保藏于国家计量研究院。在第八个方面，本专利技术涉及幽门螺杆菌菌株0ND256，以登录号V10/014060保藏于国家计量研究院。可转化分离的幽门螺杆菌菌株以产生表达感兴趣的基因的重组菌株。在一些实施例中，感兴趣的基因由核酸编码，其优选是以分离的形式获得的。本领域技术人员应知道，本专利技术的分离的核酸分子可以是cDNA、基因组DNA、RNA、或其杂合分子。优选地，分离的核酸是cDNA。优选地，分离的核酸整合入重组菌株的基因组中。分离的核酸可编码与幽门螺杆菌同源或异源的多肽。在某些方面，分离的核酸编码生物活性剂如抗原、有机分子、药理剂例如治疗剂或预防剂，如基因产物或基因序列(分离的核酸)。幽门螺杆菌感染的天然特征，如特异性、非保护的循环抗体和终身持久性的存在，意味着幽门螺杆菌在递送疫苗抗原中特别有用。因此，在一些实施例中，本专利技术提供通过施用表达感兴趣的抗原的幽门螺杆菌的重组菌株，在个体中诱导抗体应答的方法。在第九个方面，本专利技术提供鉴定适于体内递送生物活性剂的幽门螺杆菌菌株的方法，包括(a)从无幽门螺杆菌感染症状的个体分离幽门螺杆菌菌株；(b)确定所述菌株是否具有天然转化能力 '及(C)确定所述菌株是否具有无需宿主适应而定殖于小鼠胃粘膜的能力，其中具有天然转化能力和无需宿主适应而定殖于小鼠胃粘膜的能力的菌株适于体内递送生物活性剂。在第十一个方面，本专利技术提供一个优化的螺杆菌属感染的动物模型，其中所述动物以富含酪蛋白的食物和/或酸化水饲养， 以使相对于没有以富含酪蛋白的食物和/或酸化水饲养的动物，其幽门螺杆菌的定殖是增强的。在一些实施例中，所述动物以富含酪蛋白的食物和酸性水饲养，其中水是约pH2。在一些实施例中，所述动物是小鼠。在第十二个方面，本专利技术提供随机扩增的多态DNA聚合酶链式反应用于鉴定螺杆菌属菌种的用途。在一些实施例中，使用具有SEQ ID NO : I所示序列的正向引物和具有SEQ ID NO 2所示序列的反向引物通过聚合酶链式反应扩增螺杆菌属DNA。附图简述图I:测试幽门螺杆菌临床分离株的天然转化。基于其抗生素抗性表型，将来自Karolinska(K)研究所的14株和来自SCGH(H)的28株鉴定为可用DNA转化的。通过选择平板上获得的转化菌落数指不可转化的菌株+低(< 20), ++ (20-50), +++ ( > 50), ++++ ( >100)。图2 :测试可转化的幽门螺杆菌菌株在DBA/2小鼠模型的胃部定殖。小鼠(n = 3)感染本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：M本格扎尔，A福卢里加，W卢，HO尼尔森，B马歇尔，
申请(专利权)人：翁德克控股有限公司，
类型：发明
国别省市：
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