人ATP结合盒转运体A1活性调节剂筛选模型及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种以人ATP结合盒转运体A1(ABCA1)为靶点的ABCA1活性调节剂体外高通量筛选模型或试剂盒，本发明专利技术还涉及一种利用所述筛选模型或试剂盒筛选人ATP结合盒转运体A1活性调节剂的方法，以及利用所述模型或试剂盒筛选获得的人ATP结合盒转运体A1活性调节剂，尤其是人ATP结合盒转运体A1激动剂和人ATP结合盒转运体A1拮抗剂。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及以人ATP结合盒转运体Al为靶点的ABCAl活性调节剂体外高通量筛选模型或者试剂盒；本专利技术还涉及利用所述筛选模型或试剂盒筛选人ATP结合盒转运体Al活性调节剂的方法，以及利用所述模型或试剂盒筛选获得的人ATP结合盒转运体Al活性调节剂，尤其是ATP结合盒转运体Al激动剂和ATP结合盒转运体Al拮抗剂。
技术介绍
动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)是缺血性心脑血管疾病(如冠心病、心绞痛、心肌梗塞、脑卒中等)共同的病理生理基础，而外周细胞内胆固醇代谢障碍是动脉粥样硬化的重要发病机制。过量胆固醇从肝外组织中的清除是预防和治疗AS的关键步骤。 ATP 结合盒转运体 Al (ABCA1, ATP-binding cassette, sub-family A(ABCl), member I,Location 9q31. I)是ATP结合盒转运体超家族成员之一,是一种重要的以ATP为能源转运各种离子、脂类等细胞代谢物的膜转运蛋白。ABCAl可介导细胞内磷脂和游离胆固醇转运至贫脂或无脂的载脂蛋白A-I (apolipoprotein A-I, apoA_I),从而促进高密度脂蛋白(highdensity lipoprotein,HDL)生成。此过程被誉为脂质外流的限速步骤,在胆固醇逆转运过程中发挥重要作用。研究发现，ApoA-I与ABCAl是类似于一种受体-配体的相互作用来发挥其功能的。ApoA-I作为HDL中的主要载脂蛋白成分，被认为是ABCAl介导的胆固醇和磷脂外流的主要接受体。Nan Wang 等人(Wang N, Silver DL, Costet P and Tall AR(2000) Specificbinding of ApoA-I, enhanced cholesterol efflux, and altered plasma membranemorphology in cells expressing ABC1.J Biol Chem 275(42) :33053-33058)经实验证明ABCAl转染的细胞中，apoA-I促进胆固醇外流的EC5tl约为2. Oy g/ml。如此低的EC5tl值说明了 ABCAl和apoA-I之间存在着高亲和力。ApoA-I在细胞表面的结合同样需要功能性的ABCAl的存在。已发现的两种化合物格列本脲和BLT-4抑制apoA_I与ABCAl结合，同样也发现二者均能降低细胞胆固醇的外流(Nieland TJ, Chroni A, FitzgeraldML, Maliga Z, Zannis VI, Kirchhausen T and Krieger M(2004)Cross-inhibition ofSR-BI-and ABCAl—mediated cholesterol transport by the small molecules BLT-4 andglyburide. J Lipid Res 45(7) :1256-1265)。cAMP 提高了细胞 ABCAl 蛋白的表达，同样也发现了其增加了 apoA-I 的结合(Oram JF, Lawn RM,Garvin MR and Wade DP (2000)ABCAl isthe cAMP-inducibleapolipoprotein receptor that mediates cholesterol secretionfrom macrophages. J Biol Chem 275(44) :34508-34511)。这提不专利技术人可以通过增加细胞表面apoA-I的结合来增加胆固醇外流。
技术实现思路
鉴于上述研究发现，很有必要从增加胆固醇外流这一原理来建立药物筛选模型，本专利技术人经过尝试，首次成功建立了基于与ABCAl结合的ApoA-I的cell-ELISA-like的高通量筛选模型。具体地，本专利技术所述筛选模型或试剂盒利用ApoA-I为配基，以在中国仓鼠卵巢细胞CHO的细胞膜上成功表达的ABCAl为靶点，建立了 ABCAl的活性调节剂筛选模型或试剂盒，其特点在于与现有的体外配基受体结合模型或试剂盒相比较，作为筛选靶点人ATP结合盒转运体Al在哺乳动物细胞膜上表达，因此，受体与待测化合物的相互作用接近在人体细胞中的真实状态。通过该在细胞水平上建立的筛选模型降低了用纯化的ABCAl蛋白进行筛选的成本，同时采用cell-ELISA方法，适合于高通量筛选。此外，专利技术人利用此模型对400个化合物进行了筛选，成功发现了具有上调ABCAl与ApoA-I结合活性的阳性候选化合物。具体地，本专利技术的一个方面，涉及下式I所示的化合物、含有式I所示化合物的组合物。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.下式I所示的化合物2.含有权利要求I的化合物的组合物。3.上调ATP结合盒转运体Al活性的方法，其包括使权利要求I的化合物或者权利要求2的组合物与需要上调ATP结合盒转运体Al的细胞在合适的条件下接触。4.权利要求I的化合物在制备ATP结合盒转运体Al活性上调剂中的用途。5.用于ATP结合盒转运体Al活性调节剂的体外高通量筛选的试剂盒，其包括 (1)细胞表面高表达ATP结合盒转运体Al的可稳定传代的细胞，和 (2)载脂蛋白A-I，以及使用说明书， (3)任选地，包括阳性对照和阴性对照。6.针对ATP结合盒转运体Al活性调节剂的体外高通量筛选方法，其包括 I:筛选材料的准备 (1)提供细胞表面高表达ATP结合盒转运体Al的可稳定传代的细胞， (2)提供合适浓度的载脂蛋白A-I， (3)提供活性调节剂的候选化合物， II:筛选 将(1)-(3)在适当的条件下接触合理的时间，同时设立空白对照，其中在与前述操作相同的条件下，不加入(3)之后进行洗涤； III:鉴定 ...

【专利技术属性】
技术研发人员：司书毅，张忠兵，刘继开，许艳妮，谢子建，洪斌，姜威，李卓荣，王智敏，来芳芳，刘伟，冯婷婷，
申请(专利权)人：中国医学科学院医药生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：