本发明专利技术涉及来自鱼孵化液的各种多肽、其编码核酸序列、包含所述多肽和核酸分子的药物组合物及其在对于皮肤的各种医疗或美容应用中的用途，尤其是用于保湿皮肤和/或用于剥离皮肤的角质层以治疗或预防动物的皮肤疾病或状况。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】孵化液酶及其用途本专利技术涉及得自鱼孵化液的卵壳溶解素(choriolysin)和强酸性蛋白质(VAP)单独或组合地在针对皮肤的各种美容和医疗应用中的用途。本专利技术还涉及针对这些用途加以描述的强酸性蛋白质。皮肤是人体更脆弱的器官中的一种。尽管很少危及生命，但是皮肤疾病或状况能够让人不舒服并可能造成慢性失能。另外，由于皮肤是清晰可见的，所以皮肤疾病和状况能够导致产生心理压力。因此，一直存在有效治疗皮肤状况和疾病的需求。皮肤形成人体的最大器官，占个人重量的约12 16%。作为外部世界和我们身体内受控环境之间的屏障和调节势力两者执行许多至关重要的作用。皮肤由3层即表皮、真皮和皮下层构成。表皮是皮肤的最外部的上皮层。其充当物理屏障，防止从身体失水，并防止物质和有机体进入身体内。其厚度随身体位置而变化。 表皮由复层鳞状上皮构成，即其由平坦的细胞层构成。皮肤、头发和指甲是角质化的，意思是其具有由称作角蛋白的蛋白质构成的死亡的、硬化的疏水表面。表皮因为其与角化细胞相关的细胞外脂类内容物而不具有渗透性，尤其是在表皮的中层(透明层)中。粘膜(例如食道、口咽腔、生殖器等的粘膜)主要是非角质化的且是潮湿的。表皮具有三种类型的细胞，即角化细胞(皮肤细胞)、黑素细胞(产生色素的细胞)和朗氏细胞(免疫细胞)。梅克尔细胞是第四种，不占优势的表皮细胞。角化细胞随着向外移动而成熟并随角蛋白的累积而分化。其最终脱落或擦落。它们形成四个或五个明显不同的层，从最浅表到最深处为(i)具有无细胞核的死的、干透的硬细胞的角质层；(ii)具有含有嗜碱性颗粒的细胞并通过薄的透明层而与角质层向外隔开的颗粒层；(iii)刺状层(多刺、刺状或棘细胞层)，其中细胞随着向上移动变得越来越扁平jP(iv)具有柱状(长)再生细胞的基底层。紧挨在表皮下面的是基膜，其为位于表皮和真皮之间的特殊结构。真皮是皮肤的纤维连接组织或支持层。主要纤维是交织的胶原纤维和弹性蛋白。下皮层是紧接在真皮和表皮下面的脂肪层。也将其称作皮下组织、真皮或膜。所述下皮层主要由脂肪细胞、神经和血管构成。在皮肤的下层颗粒层中产生新的上皮皮肤细胞。细胞随时间迁移到皮肤表面并变为更酸性。在其30天的迁移期间，其死亡并变得角蛋白饱和。角蛋白和相关的脂类是重要的，因为其保护皮肤防御外部因素。生病、受伤、环境因素、年龄、激素水平、药物治疗、外敷或摄入材料、遗传状况或各种其他因素可导致皮肤的功能异常，导致不规律或异常。这些不规律或异常中的一部分可以单纯是美容性质的，如皮肤干燥、皱纹或色素沉着改变，或可以更严重地导致疼痛或不适，如湿疹和牛皮癣。皮肤干燥是一种最普通的皮肤状况或异常。尽管某些个体更易于受到皮肤干燥的影响，但是所述状况能够影响任何人，而与年龄、性别或皮肤类型无关。当皮肤外层(具有透明层的角质层)的水耗尽时，发生皮肤干燥。当这层被良好保湿时，其通过皮肤的失水最小并有助于抵御刺激物、过敏原和细菌。然而，当角质层干透时，其保护功能下降。这使得失水更多，导致皮肤易于受到环境因素的影响。在正常条件下，角质层具有109^30%的水含量。这种水使得皮肤柔软、平滑并具有柔性质地。所述水来自大气、皮肤的下层和汗。由皮肤腺产生的油和由皮肤细胞产生的脂肪物质充当天然的保湿剂，使得角质层封在水中。身体通过蒸发从皮肤表面连续损失水。在正常条件下，损失速率缓慢，且水可充分更替。当失水超过水的更替且角质层的水含量低于10% 时，发生皮肤干燥的特征性迹象和症状。非常期望改善或消除皮肤干燥的保湿剂。尽管在本领域内已知许多保湿剂，但是仍需要有效且温和的天然产品。另一种普遍的皮肤异常或状况是皮肤的角质层过量。这可能是由角质层蜕皮失败或由过量的角蛋白沉积在角质层中造成的。当皮肤磨蚀的天然过程变得不顺利时会造成前一种状况，使得皮肤具有干燥且粗糙的特性。良性过度增生型疾病包括表皮松懈性角化过度症(或皮肤皲裂)和毛囊角化症。一种普遍的良性过度增生型状况是在伤疤周围的外围过度增生和/或形成瘢痕疙瘩。其他过度增生型状况是鸡眼、老茧、过度角化的疣(尤其是寻常抚(veruca vulgaris))、鱼鳞癖和掌妬角化。当前的治疗涉及剥落或在极端情况下的外科手术。通常通过软化角质层并将增厚的皮肤除去来治疗角化过度症。还可使用剥落来除去损伤的表皮细胞，例如从出现色素沉着紊乱如肝斑的表皮上除去表皮细胞。剥落除去表皮的外层以显示下面更新的皮肤细胞。可以通过物理手段(例如磨皮)或通过化学手段来实现剥落。化学剥落剂包括含有水杨酸、乙醇酸、水果酶、柠檬酸或苹果酸的磨砂剂且可由皮肤病医生以高浓度使用、或在非处方产品中以较低浓度应用。化学剥落可涉及使用含有a-羟基酸(AHA)或￠-羟基酸(BHA)的产品、或使得在细胞连接处将细胞保持在一起的胶状物质松散的酶，使其易于除去。人们治疗痤疮推荐使用这种剥落。剥落的最大劣势是用于实现所述剥落的一些产品和方法的价格高。剥落将导致皮肤开始时有些变红。在接近化学剥落结束时，皮肤将受冻，在皮肤表面上颜色从亮白色变为灰色。因此期望对皮肤更温和的更有效的方法。由此仍需要适用于皮肤保湿和/或用于剥落皮肤角质层的治疗。现在已经意外发现，在鱼孵化液中发现的某些分子是非常有效的保湿剂和剥落齐U，即卵壳溶解素和新鉴定类别的强酸性蛋白质(VAP)。鱼胚的孵化至少部分由所谓的孵化酶卵壳溶解素实现。卵壳溶解素是在鱼孵化液中发现的一种金属蛋白酶并发现通常有两种形式，即高卵壳裂解酶(卵壳溶解素H，HCE)和低卵壳裂解酶(卵壳溶解素L，LCE)，它们在某些结构和催化特性方面类似且属于虾红素族，但具有明显不同的底物偏好。在鲑鱼中，LCE与其他鱼种的已知卵壳溶解素相比相对不平常且可出于在下文描述的目的而加以应用。在下面的SEQ ID No. I中提出了鲑鱼LCE的序列。如上所述，通过在80%丙酮中从其他组分中沉淀并通过对离心的沉淀团进行蒸发以除去丙酮，现在已经在鱼孵化液中鉴定了一类强酸性蛋白质(VAP)，如实施例中所述。在孵化期间通过孵化酶使得聚合和交联的卵壳发生蛋白水解性裂解，可产生这些VAP，且所述VAP是在卵子发生期间并入绒毛膜中的组分的片段如卵壳前体蛋白(choriogenin) H和L,下面进行更详细地说明。本文中称作VAP的卵壳前体蛋白质的这些片段在孵化期间释放入卵周液中，变为孵化液的组分。VAP可以呈现多种形式。当通过等电位聚焦进行分析时(参见实施例)，VAP I、II和III (如下所述)分别出现在至少2、6和3异构体中。我们在此公开了已经鉴定的并具有下面描述的奇特性质的三种VAP。通过如实施例中所述的质谱分析确定了这些VAP的序列并示于SEQ ID Nos. 2 4中。本文中提及的VAP I、II和III分别具有在SEQ ID Nos. 2、3和4中列出的序列。VAP I是117个氨基酸大小并具有约15. 5kDa的分子量和约3. 5的pi。这种VAP是439个氨基酸的57kDa卵壳蛋白质(也称作放射带蛋白质，SEQ ID No. 5)的片段。或者，VAP I可得自包括467氨基酸残基(SEQ ID No. 8)的同源放射带蛋白质。VAP II是261个氨基酸大小并具有约35kDa的分子量和约4.0的pi。这种VAP 是524个氨基酸蛋白质本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.11.30 GB 0921001.41.药物或美容组合物，其包含 i)包括SEQ ID No. I所示氨基酸序列、或者与所述序列至少50%同一的序列、或者任何所述序列中的一部分的多肽； (ii)包括SEQID No. 2所示氨基酸序列、或者与所述序列至少50%同一的序列、或者任何所述序列中的一部分的多肽； (iii)包括SEQID No. 3所示氨基酸序列、或者与所述序列至少50%同一的序列、或者任何所述序列中的一部分的多肽； (iv)包括SEQID No. 4所示氨基酸序列、或者与所述序列至少50%同一的序列、或者任何所述序列中的一部分的多肽； (V)编码以上(i)至(iv)中任一项所示多肽的一种或多种核酸分子或者其互补序列， 和一种或多种药用或美容用赋形剂和/或稀释剂。2.如权利要求I所述的组合物，其中所述(V)的核酸分子包括SEQID Nos. 9-12中任一个所示的核苷酸序列、或者与所述序列至少50%同一的序列、或者在6XSSC/50%甲酰胺和室温的非严紧结合条件下以及在高度严紧的洗涤条件下与所述序列杂交的序列、或者与任何上述序列互补的序列、或者任何所述序列中的一部分。3.如权利要求I或2所述的组合物，其中所述组合物包含一种以上所述多肽和/或其编码序列，优选(ii)至(iv)各项所述的多肽。4.如权利要求I至3中任一项所述的组合物，其中(ii)至(iv)所示的各种所述多肽当存在时由以下构成 (a)SEQ ID Nos. 2-4中任一项所示的氨基酸序列、或者与所述序列至少50%同一的序列、或者任何所述序列中的一部分，和任选 (b)在(i)中氨基酸序列的N和/或C末端的侧翼氨基酸序列，其长度为I至100个氨基酸， 并且其中编码(ii )至(iv)所示多肽的各种所述核酸序列由仅编码所述多肽的核苷酸序列或者其互补序列构成。5.如权利要求1-4中任一项所述的组合物，其用于治疗。6.使动物皮肤剥落和/或保湿的美容或非美容方法，其中向所述动物施用权利要求I至5中任一项所述的多肽、核酸分子或药物组合物。7.如权利要求I至5中任一项所述的多肽、核酸分子或药物组合物，其用于使动物皮肤剥落和/或保湿。8.治疗或预防动物皮肤的状况或疾病的美容或非美容方法，其中所述皮肤异常干燥、皮肤的角质层异常增厚或者皮肤有色素沉着症，其中向所述动物施用权利要求I至5中任一项所所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：汉斯·克里斯蒂安·莱伦，贝恩特·沃瑟尔，
申请(专利权)人：阿克生物科技公司，
类型：发明
国别省市：
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