本发明专利技术公开了一种胶体金层析法抗Cenp-B抗体检测试纸以及制备方法。其胶体金层析法抗Cenp-B抗体检测试纸，包括有样品垫、结合垫、硝酸纤维素包被膜、吸水垫，所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素包被膜、吸水垫由底板的一侧依次向所述底板的另一侧粘贴在所述底板上，其结合垫包被有金标抗体a和金标抗体b；硝酸纤维素包被膜上设置有检测线和质控线，检测线包被有Cenp-B抗原蛋白，质控线包被有金标抗体c。本发明专利技术采用间接免疫测定法，引入Cenp-B抗原蛋白，对结合垫和样品垫进行了工艺优化，来实现抗Cenp-B抗体的高灵敏度、高特异、高准确性的检测性能，为辅助诊断进行性系统硬化症提供参考依据。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医学免疫应用领域，具体涉及到利用胶体金免疫层析技术检测抗Cenp-B抗体的试纸及其制备方法和应用。
技术介绍
1980 年 Moroi 等首次发现抗着丝点抗体(Anti-CentromereAntibody, ACA)。早期研究显示ACA常见于局限于皮肤病变的系统性硬化症(CREST综合症)患者血清中。采用蛋白质印迹法检测染色质提取物，发现其主要靶抗原为CENP-A、CENP-B, CENP-C。但CENP-B为主要的抗原表位。因此本专利技术选择了 Cenp-B的优势表位克隆化表达为检测抗原。(Earnshaw ff,Bordwell B,Marino C,et al. Their human chromosomalauto antigens arerecognized by sera from patients withanticentromere antiboedies. J Clin Invest,1986 ；77 426-430)。抗Cenp-B抗体可用Hep_2细胞系快速法和间接免疫荧光法检测到。其抗原位于着丝点内外层，但不包括DNA。其三个主要抗原为CENP-A蛋白(19KD)，CENP-B蛋白(80KD)和CENP-C蛋白(140KD)。其中CENP-B抗原在诊断中起主要的作用。因为它是所有ACA(着丝点)抗体共有的靶抗原。抗Cenp-B抗体主要出现于一定形式的进行性系统性硬化症(PSS)中，尤其是CREST综合症(皮内钙质沉着，Raynaud现象，食管运动功能混乱，指端硬化，远距离血管扩张)，其检出率为50-70 %。ACAs对PSS的预后较佳，出现此抗体时，在CREST综合症病人中极少观测到心肺肾的病变(Earnshaw ff, Bordwell B, Marino C, etal.Their human chromosomalauto antigens are recognized by sera from patientswithanticentromere antiboedies. J Clin Invest，1986 ;77 :426_430)。抗Cenp-B抗体可在25 %的表现出Raynaud现象的患者中检测到。由于它与胶原病的发生有关，抗Cenp-B抗体的测定对此病的预测极为重要。(Whyte J，SorianoE，Earnshaw WC, et al. Frequency ofautoantibodies to a major epitope on thecarboxyl terminalfragement of CENP-B in patients with autoimmune disease， BritJRheumatol，1995 ；34 :407_412.)。抗Cenp-B抗体也可见于原发性胆汁性肝硬化(10% -20% )。但在单独的肺动脉高压症，SLE和原发性干燥综合症患者中，此抗体极少出现(MahlerM，Mierau R，BluthnerM. Fine-specificity of the anti-CENP-A B~ceIlautoimmune response.J Mol Med,2000 ；78(8) 460-467.)。目前实验室常用的检测抗Cenp-B抗体的方法主要有酶联免疫吸附剂试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)、间接免疫焚光法(indirectimmunoflurescence, IFF)、免疫印迹法(immunoblottingtest，IBT)、线性免疫分析法(Lineimmuno assay, LIA)等。免疫印迹法虽综合了 SDS-PAGE的高分辨力和ELISA法的高特异性和敏感性，但操作相对复杂，完成整个实验过程需三小时左右，亦需要专业免疫学技术人员在实验室中进行实验操作，同时易受各种温度和孵育时间等环境条件因素的影响，对试验带来诸多不便。且试剂具有较强的毒性和污染性。目前市场上商品化抗Cenp-B抗体抗体检测试剂盒主要为免疫印迹法。间接免疫荧光法可作半定量测定，但需要专业人员操作特殊的荧光显微镜观察结果，结果判定有一定的主观人为判断误差，客观性不足；另外易受其他干扰产生假阳性，标准化困难，技术程序比较复杂，检测时间长，也不适合高通量标本的检测。 线性免疫分析法主要用于疾病大类的筛查，针对性相对较差，同时也不适合高通量样本的检测。ELISA法检测可用于高通量标本测定，灵敏度也较高，目前被广泛认可，但操作比较繁琐，需多次加样和洗涤，完成整个实验过程需三小时左右，且易受温度和孵育条件的影响，需酶标仪，亦需要专业免疫学技术人员在专业实验室中进行实验操作，给实验带来诸多不便。胶体金免疫层析法(gold-immunochromatographyassay, GI CA)是应用胶体金标记技术，以胶体金作为示踪物，以条状纤维层析材料为固相，通过毛细效应使样品溶液在层析条上泳动，使样品中的待测物与结合垫上针对待测物的受体(如抗原或抗体)发生免疫反应，并与条状纤维层析材料上的抗原(或抗体)发生免疫反应而被截留，进而形成肉眼可见的紫红色条带，得到直观的实验结果，达到快速检测的目的(Sikowicz Get al. One-step chromatographic immunoassay for qualitativedetermination ofchoricogonadotropin in urine. Clin Chem. 1990 (36) 1579-1586.)。使用时只将样品加样到样品垫上，数分钟就根据检测线上紫红色条带出现情况来判断阴阳性结果。与其他检测方法相比，检测时间短，只需要5 10分钟，操作人员无需培训，操作简便、快速，无需低温保存，储运方便等优势。在自身免疫性疾病方面，目前国外市场上出现了一些检测自身免疫疾病的试纸条产品，但抗Cenp-B抗体的胶体金免疫试纸在国内外市场上仍没有问世。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是为了克服以上方法学的不足，将胶体金层析法应用到抗Cenp-B抗体的检测中，同时首次将Cenp-B抗原蛋白应用到胶体金层析法中，采用间接法来实现血液中的抗Cenp-B抗体检测，实现高特异、高灵敏度、高准确性的检测性能，快速筛选出抗Cenp-B抗体的阳性样本，能快速、便捷地辅助诊断进行性系统硬化症。本专利技术所要解决的技术问题之一在于提供一种胶体金层析法抗Cenp-B抗体检测试纸。本专利技术所要解决的技术问题之二在于提供上述胶体金层析法抗Cenp-B抗体检测试纸的制备方法。作为本专利技术第一方面的一种胶体金层析法抗Cenp-B抗体检测试纸，包括有样品垫、结合垫、硝酸纤维素包被膜、吸水垫，所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素包被膜、吸水垫由底板的一侧依次向所述底板的另一侧粘贴在所述底板上，其特症在于所述的结合垫包被有金标抗体a和金标抗体b ；所述的硝酸纤维素包被膜上设置有检测线和质控线，所述的检测线包被有Cenp-B抗原蛋白，所述的质控线包被有金标抗体C。进一步，所述的金标抗体a中的抗体A为抗人IgG单克隆抗体、抗人IgG多克隆抗体、葡萄球菌A蛋白(SPA)本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：韩永俊，高成秀，张玥，葛文斌，孙宏彬，钱杰，
申请(专利权)人：上海科新生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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