本发明专利技术涉及一种牡丹不定芽诱导方法，以NAA和6-BA为诱导剂，以花托为外植体进行诱导培育。本发明专利技术采用萘乙酸(NAA)和6-苄基嘌呤(6-BA)为诱导，以花托为外植体，花托营养含量丰富，酶类活性高，不定芽再生率较高，可达到100-490.91％，且玻璃化现象不严重，能够模化生产或基因转化。
【技术实现步骤摘要】
牡丹为我国国花，花大色艳，雍容华贵，也为世人普遍喜爱，但牡丹主要靠分株或嫁接繁殖，繁殖系数低，繁殖速度慢，不能满足实际需要。目前，对于牡丹快繁的研究，多数是采用茎尖或休眠芽为外植体，该方法没有通过细胞脱分化和再分化，属于微扦插，繁殖系数低，获得的幼苗主要因生根困难和移栽成活率低，难以在生产中推广应用。已有文献采用不定芽再生的途径，但外植体一般选用成熟胚、种子或幼苗。李玉花 (2005)建立了牡丹‘凤丹白’子叶再生体系；肖晓蓬(2008)以多花野牡丹种子为外植体成功建立了快繁体系；刘磊(2009)建立了牡丹‘凤丹白’成熟胚经愈伤组织途径分化不定芽的完整再生体系，上述方式均来源于种子的再生体系，存在变异，不能保持牡丹原有品种的特性。Beruto, et al (2004)采用牡丹花瓣和花丝为外植体，仅花瓣或花瓣产生的愈伤组织在TDZ诱导下获得了不定芽的再生，此种方式玻璃化现象较严重，难以形成完成的不定芽。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种再生率高的牡丹不定芽诱导方法。为了实现上述目的，本专利技术的技术方案采用了，以NAA 和6-BA为诱导剂，以花托为外植体进行诱导培育。本专利技术的牡丹不定芽诱导方法具体包括以下步骤以牡丹幼嫩花蕾，除去萼片后，用70 %酒精浸泡15-25seC，清洗一次，经浸泡液浸泡8-20min后，无菌水洗3_5次， 每次2-4min ；以花托作为外植体接种，接种到MS培养基添加I. 5-2. 5mg · 1^6-苄基嘌呤 6-BA+0. 1-0. 3mg · L-1 萘乙酸 NAA,蔗糖 25_35g · L_\ 琼脂 7_8g · L-1，pH 调至 5. 8，每天光照 14h，光照强度30001uX，温度25°C，每30天转接入新鲜培养基。所述的新鲜培养基为MS培养基中添加了 I. 5-2. 5mg · L^6-苄基嘌呤 6-BA+0. 1-0. 3mg · L-1 萘乙酸 NAA,鹿糖 25_35g · L—1,琼脂 7_8g · I71。所述的清洗为采用无菌水进行清洗。所述的浸泡液为O. I %的HgCl2或2%的次氯酸钠。本专利技术采用萘乙酸(NAA)和6-苄基嘌呤(6-BA)为诱导，以花托为外植体，花托营养含量丰富，酶类活性高，不定芽再生率较高，可达到100-490. 91%,且玻璃化现象不严重， 能够模化生产或基因转化。具体实施例方式实施例I本实施例的方法具体步骤为选择牡丹幼嫩花蕾，除去萼片后，70%酒精浸泡20sec,然后无菌水洗一次，经O. I %的HgCl2浸泡IOmin后，无菌水洗4次，每次 3min。置吸水纸上把饼状的花托分为4份，作为外植体接种；接种到MS培养基添加2.Omg · L-16-BA+0. 2mg · L-1NAA,鹿糖 30g · L-I,琼脂 7. 5g · L-I, pH 调至 5· 8 ;每天光照 14h，光照强度30001ux，温度25°C ;每30天转接入新鲜培养基，经过7周的诱导培养，部分牡丹品种的不定芽诱导生成率达100%。实施例2本实施例的方法具体步骤为以牡丹幼嫩花蕾，除去萼片后，用70%酒精浸泡 15sec，清洗一次，经O. 1%的HgCl2浸泡15min后，无菌水洗3次，每次2min ;以花托作为外植体接种，接种到MS培养基添加I. 5mg · 1^6-苄基嘌呤6-BA+O. Img · Γ1萘乙酸NAA，蔗糖 25g · ΙΛ琼脂7g · L-1，pH调至5. 8，每天光照14h，光照强度30001ux，温度25。。，每30天转接入新鲜培养基。经过7周的诱导培养，部分牡丹品种的不定芽诱导生成率达330%。实施例3本实施例的方法具体步骤为以牡丹幼嫩花蕾，除去萼片后，用70%酒精浸泡 25sec，清洗一次，经浸泡液浸泡20min后，无菌水洗5次，每次4min ;以花托作为外植体接种，接种到MS培养基添加2. 5mg *^6-苄基嘌呤6-BA+O. 3mg -Γ1萘乙酸NAA，蔗糖35g · Λ 琼脂8g Ι^,ρΗ调至5. 8,每天光照14h,光照强度30001ux,温度25°C,每30天转接入新鲜培养基。经过7周的诱导培养，部分牡丹品种的不定芽诱导生成率达490. 91%。权利要求1.，其特征在于以NAA和6-BA为诱导剂，以花托为外植体进行诱导培育。2.根据权利要求I所述的牡丹不定芽诱导方法，其特征在于包括以下步骤以牡丹幼嫩花蕾，除去萼片后，用70%酒精浸泡15-25seC，清洗一次，经浸泡液浸泡8-20min 后，无菌水洗3-5次，每次2-4min ；以花托作为外植体接种，接种到MS培养基添加I.5-2. 5mg · L—V 苄基嘌呤 6-BA+0. 1-0. 3mg · L—1 萘乙酸 NAA,蔗糖 25_35g · L-1，琼脂 7-8g · L_S pH调至5. 8，每天光照14h，光照强度30001ux，温度25°C，每30天转接入新鲜培养基。3.根据权利要求2所述的牡丹不定芽诱导方法，其特征在于所述的新鲜培养基为 MS培养基中添加了 I. 5-2. 5mg · L-V苄基嘌呤6-BA+O. 1-0. 3mg · L-1萘乙酸NAA，蔗糖 25-35g · ΙΛ 琼脂 7-8g · I/1。4.根据权利要求2所述的牡丹不定芽诱导方法，其特征在于所述的清洗为采用无菌水进行清洗。5.根据权利要求2所述的牡丹不定芽诱导方法，其特征在于所述的浸泡液为O.1%的 HgCl2或2%的次氯酸钠。全文摘要本专利技术涉及，以NAA和6-BA为诱导剂，以花托为外植体进行诱导培育。本专利技术采用萘乙酸(NAA)和6-苄基嘌呤(6-BA)为诱导，以花托为外植体，花托营养含量丰富，酶类活性高，不定芽再生率较高，可达到100-490.91％，且玻璃化现象不严重，能够模化生产或基因转化。文档编号A01H4/00GK102577968SQ20121005676公开日2012年7月18日 申请日期2012年3月6日 优先权日2012年3月6日专利技术者任志敏, 刘亚楠, 吴正景, 吴祖峰, 李冬升, 杜小红, 胡灿丽, 金祥利, 高文 申请人:河南科技大学本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：吴正景，吴祖峰，李冬升，高文，刘亚楠，杜小红，胡灿丽，金祥利，任志敏，
申请(专利权)人：河南科技大学，
类型：发明
国别省市：
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