用于制备微小RNA 的方法及其治疗性应用技术

本发明专利技术涉及包含治疗有效量的miRNA的组合物，其用于治疗受益于用这些组合物进行治疗的医疗病况的用途，以及用于制备包含miRNA的组合物的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及包含治疗有效量的miRNA的组合物，其用于治疗受益于用这些组合物进行治疗的医疗病况的用途。本专利技术还涵盖了用于制备包含miRNA的组合物的方法。
技术介绍
微小RNA(miRNA)是短的(约21- 个核苷酸)非编码RNA，其被认为通过与靶 mRNA的序列特异性碱基配对来调节基因表达。对于潜在的机制仍然知之甚少，但是其似乎涉及抑制翻译起始。微小RNA的许多功能性角色暗示人类疾病中潜在地涉及微小RNA，以及其作为生长和增殖的主要调节因子。由于在原发性人类肿瘤中许多微小RNA失调，暗示了微小RNA 在人类癌症中的作用。因此，已将miRNA的缺乏或过量与许多临床上重要的疾病(从心肌梗死至癌症)相关联。还暗示了微小RNA在免疫系统的发育和调节中的潜在作用。免疫系统的关键组分炎症在防御(生理学的)和病理生理事件中均起作用以维持组织、器官和个体细胞的稳态。急性炎症是以经典的炎症迹象(即肿胀、发红、疼痛、热和丧失功能)为特征的短期过程，所述炎症迹象是由于含有数种经活化的组分(例如白细胞介素、抗体、激素等)和白细胞的血浆渗入组织而产生的。只要有害的刺激物存在其就发生， 并且一旦去除所述刺激物其就停止。慢性炎症是以同时发生的主动型炎症、组织破坏和试图修复为特征的病理状况。慢性发炎的组织的特征在于单核免疫细胞(单核细胞、巨噬细胞、淋巴细胞、树突细胞和其它血浆细胞)的渗入、组织破坏、和试图愈合，这包括血管生成和纤维化。没有炎症时，伤口和感染将不能愈合并且组织的逐渐破坏将威胁生物体的生存。 另一方面，不适当的炎症可导致各种疾病，这包括但不限于下列适应症，例如枯草热、动脉粥样硬化、神经退行性疾病(例如阿尔茨海默症)、癌症和风湿性关节炎。由于这些原因，炎症被身体严密调控。在感染条件下，单核免疫细胞被吸引到感染的位点，试图通过吞噬作用而清除外来病原体。白细胞和树突细胞在此被病原体活化以合成和释放促炎细胞因子，例如IL-I α， IL-I β，IL-3，IL-5，IL-6，IL-8，TNF-α (肿瘤坏死因子- α )，GM-CSF (巨噬细胞集落刺激因子)，NF-kB(活化的B细胞的核因子κ轻链增强子)和MCP-I (单核细胞趋化蛋白-1)。 然后，这些被释放的细胞因子进一步吸引更多的免疫细胞到被感染的位点，这放大免疫系统的应答以使宿主防御外来病原体。树突细胞源自造血骨髓祖细胞。这些祖细胞起初转换为不成熟的树突细胞。这些细胞的特征在于高的内吞活性和低的T细胞活化潜能。不成熟的树突细胞持续地从周围的环境对于外来病原体取样。这是通过模式识别受体(例如toll样受体(TLRs))进行的，其识别在病原体亚群上发现的特定化学标记。一旦它们与可呈递的抗原接触，它们就被活化为成熟的树突细胞并开始向淋巴结迁移。不成熟的树突细胞吞噬病原体并将它们的蛋白降解成为小块，并在成熟之后利用MHC分子在其细胞表面呈递那些片段。同时，它们上调在T细胞活化中作为共同受体的细胞表面受体。一旦位于淋巴结中，它们在活化帮助T细胞和杀伤T细胞以及B细胞中通过呈递源自病原体的抗原以及非抗原特异性共刺激信号而作为抗原呈递细胞。对大多数哺乳动物miRNA的生物学功能和体内功能仍知之甚少，而且关于miRNA 为何失调以及如何失调的潜在机制大部分未知。糖皮质激素(也称作“皮质类固醇”或“甾类药物”)以及非甾体抗炎药物(NSAIDs) 如今代表用于广泛炎性病况(包括急性炎症)的最有效的临床治疗之一。然而，这些药物可具有可能威胁患者的总体健康的副作用。仍存在对于开发安全、有效的治疗自体免疫疾病、炎性病症以及癌症或与异常细胞生长或细胞分裂相关的其它适应症的方法的需求。本专利技术提供了用于治疗此类疾病和病症的组合物和方法。专利技术目的本专利技术的实施方案的目的在于提供适于治疗自体免疫疾病，炎性病症和癌症或与异常细胞生长或细胞分裂相关的其它适应症(包括但不限于不育症、减少的精子产生、习惯性流产和结肠炎)的组合物。专利技术概述本专利技术的专利技术人发现了在活化或刺激体液或其元素中的细胞或细胞组分之后，所述体液或其元素中的特定miRNA被上调，并且包含miRNA的组合物可被用于治疗或缓解疾病、病症或体内功能失调的症状，例如与炎症相关的病况，免疫系统的疾病(例如不希望的免疫系统活化)和/或癌症或与异常细胞生长或细胞分裂相关的其它适应症。本专利技术的第一个方面涉及包含治疗有效量的一种或多种miRNA分子或其功能性变体的组合物，其中在活化体液或其元素之后，所述体液或其元素中的所述miRNA被上调； 用于制备药物。本专利技术的第二个方面涉及包含治疗有效量的一种或多种miRNA分子或其功能性变体的组合物，在活化体液或其元素之后，所述体液或其元素中的所述miRNA被上调；用于治疗选自下列的适应症与炎症相关的疾病或病症，免疫系统的疾病(例如不希望的免疫系统活化)，癌症或与异常细胞生长或细胞分裂相关的其它适应症，例如白血病，慢性炎症， 牙周病，习惯性流产，溃疡性结肠炎，风湿性多肌痛，急性颈部扭伤相关病症，子宫内膜异位症(例如子宫腺肌病)，帕金森氏病，阿尔茨海默病，痴呆，糖尿病(例如I型糖尿病)，AIDS/ HIV,骨质疏松症，银屑病和伤口愈合，生殖系统中的病况，例如精子产生低、配偶子或其衍生物中的炎性或退行性病况、产生单纯支持细胞综合征以及人和动物中的胎儿流产。此外，根据本专利技术的组合物可具有在下列病况中增强卵巢中的原始卵泡发育的作用，所述病况为例如卵巢中的退行性疾病，染色体畸变或腹膜腔中的炎性病况。本专利技术的第三个方面涉及用于制备包含治疗有效量的一种或多种miRNA分子或其功能性变体的组合物的方法，其中在活化体液或其元素之后，所述体液或其元素中的所述miRNA被上调，所述方法包括下列步骤a)从哺乳动物中收集所述体液或其元素；b)与增加的表面区域相接触而孵育所收集的体液或其元素；c)收集在步骤b)之后产生的所述体液并且任选地纯化所述miRNA。9在一些实施方案中，在步骤b)中孵育所述体液或其元素超过M小时，例如超过48 小时，例如超过60小时，72小时，84小时，96小时，120小时或150小时。本专利技术的另一方面涉及用于制备包含治疗有效量的一种或多种miRNA分子或其功能性变体的组合物的方法，其中在活化体液或其元素之后，所述体液或其元素中的所述 miRNA被上调，所述方法包括下列步骤a)从哺乳动物中收集所述体液或其元素；b)与增加的表面区域相接触而孵育所收集的体液或其元素；c)鉴别在所述体液或其元素中被上调的一种或多种miRNA ；d)以分离的形式提供在步骤c)中鉴别的所述一种或多种miRNA分子并将它们加入所述组合物中。本专利技术的另一方面涉及分部试剂盒，其包括a)用于制备包含治疗有效量的一种或多种miRNA分子或其功能性变体的组合物的设备，其中在活化体液或其元素之后，所述体液或其元素中的所述miRNA被上调，所述设备包含任选地具有诱导物的容器；和b)用于根据本专利技术的方法使用的说明书；和c)任选地磁性纳米颗粒制备物，例如包被了聚乙烯亚胺(PEI)的铁磁性纳米颗粒。在一些实施方案中，所述容器具有在内部空间四周连续形成的壁结构和在所述壁的顶端提供的进入点用于向所述内部空间中注射体液或其元素。本专利技术的另一方面涉及用于治疗或缓解本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：弗莱明·韦林，斯文·林登堡，
申请(专利权)人：弗莱明·韦林，斯文·林登堡，
类型：发明
国别省市：