本发明专利技术公开了一种色谱指纹图谱，尤其是一种中药生血宁片的色谱指纹图谱，属于中药领域。该图谱的生成条件是：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以含有20mmol/L四丁基溴化胺的0.2％甲酸溶液为流动相A，以乙腈-甲醇-丙酮混合液为流动相B，梯度洗脱，以二氢卟吩e6为参照，检测波长为392nm。在此条件下获得色谱指纹图谱中具有10个特征峰。该指纹图谱具有较强的专属性和稳定性，本领域技术人员借用该图谱可以对被检产品是否是合格的生血宁制剂做出准确快捷地判定。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种中药生血宁片的高效液相色谱指纹图谱及其建立方法和用途，属于中药领域。
技术介绍
生血宁片是武汉联合药业有限责任公司独家生产的一种中成药，其有效成分来自于中药蚕砂的提取物，该药具有益气补血的功效，可用于治疗缺铁性贫血。生血宁片原有药品标准是通过薄层法进行定性鉴别，但因该方法专属性差，无法对药品质量进行有效监控。指纹图谱技术是色谱技术发展的更高阶段，被越来越多应用于复杂化学成分的鉴定工作中。在中药领域，将中药(或中成药)提取物经色谱分析后能得到一张色谱图，虽然目前尚不能说明图上每个色谱峰的归属，但至少可以证明其对应成分的存在，于是由这些色谱峰就构成了被检中药的内在质量，由于每一种中药的内在成分谱是相对固定的，而不同中药的成分谱又是绝对不同的，因而将被检样品指纹图谱与产品标准指纹图谱进行比对，即可对被检产品的真伪或优劣做出评价。由于中药成分复杂，且其中的大部分成分还是未知的，这给指纹图谱技术在中药鉴别领域的应用造成了一定的困难。加之为产品建立专属指纹图谱需要丰富的经验和创造性劳动，因而除中药注射剂(成分谱相对简单)外，在中成药中使用指纹图谱的成功案例极为少见。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是提供一种生血宁片的高效液相色谱指纹图谱；本专利技术的另一目的是提供使用该指纹图谱鉴定生血宁片的方法。本专利技术目的一所述的指纹图谱是通过以下技术方案得到的A、色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以含有20mmol/L四丁基溴化胺的0.2%甲酸溶液为流动相A，以体积比为50 50 5的乙腈-甲醇-丙酮混合液为流动相B，梯度洗脱；检测波长为392nm ；B、供试品溶液的制备取供试品粉末0. 2 0. 3g，置于50ml量瓶中，加甲醇适量， 密塞，超声处理10分钟，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇勻，滤过，取续滤液5ml，置IOml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇勻，滤过，即得；C、测定法精密吸取供试品溶液10μ 1，注入高效液相色谱仪，获得指纹图谱。上述技术方案中，在进行梯度洗脱时流动相优选按以下方式混合时间(min) 流动相A 流动相B ~~055%45%权利要求1.一种生血宁片的高效液相色谱指纹图谱，其特征在于该图谱是按如下方法生成的A、色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以含有20mmol/L四丁基溴化胺的0.2.甲酸溶液为流动相A，以体积比为50 50 5的乙腈-甲醇-丙酮混合液为流动相 B，梯度洗脱；检测波长为392nm ；B、供试品溶液的制备取供试品粉末0.2 0. 3g，置于50ml量瓶中，加甲醇适量，密塞，超声处理10分钟，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇勻，滤过，取续滤液5ml，置IOml量瓶中， 加甲醇稀释至刻度，摇勻，滤过，即得；C、测定法精密吸取供试品溶液10μ1，注入高效液相色谱仪，获得指纹图谱。2.根据权利要求1所述的指纹图谱，其特征在于进行梯度洗脱时流动相的混合方式为0分钟时，流动相A为55%，流动相B为45 % ；60分钟时，流动相A为5 %，流动相B为 95% ；65分钟时，流动相A为5%，流动相B为95%。3.根据权利要求1或2所述的指纹图谱，其特征在于该图谱中至少有10个特征峰，它们以二氢卟吩e6的吸收峰为参照，得到的相对保留时间依次为1号峰0. 310 0. 380，2 号峰 0. 350 0. 415，3 号峰 0. 480 0. 550，4 号峰 0. 635 0. 715，5 号峰 1. 000，6 号峰1.065 1. 095，7 号峰 1. 225 1. 265，8 号峰 1. 430 1. 505，9 号峰 1. 535 1. 630，10 号峰 1. 610 1. 690。4.根据权利要求3所述的指纹图谱，其特征在于10个特征峰以二氢卟吩e6的吸收峰为参照，得到的相对峰面积依次为1号峰1. M 1. 51，2号峰2. 35 2. 70，3号峰2. 33 2.90，4号峰0. 39 0. 84，5号峰1. 00，6号峰0.洸 0. 43，7号峰0. 77 1. 43，8号峰 0. 37 0. 69，9 号峰 0. 19 0. 36，10 号峰 0. 14 0. 32。5.一种用高效液相色谱指纹图谱鉴定生血宁片的方法，其特征在于该方法为A、色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以含有20mmol/L四丁基溴化胺的 0.2%甲酸溶液为流动相A，以体积比为50 50 5的乙腈-甲醇-丙酮混合液为流动相 B，梯度洗脱；检测波长为392nm ；B、参照物溶液的制备精密称取对照品二氢卟吩e6适量，加甲醇制成每Iml含0.Img 的溶液，即得；C、对照提取物溶液的制备取蚕砂对照提取物50mg，精密称定，置于50ml量瓶中，力口甲醇适量，密塞，超声处理10分钟，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇勻，滤过，取续滤液5ml，置 IOml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇勻，滤过，即得；D、待检品溶液的制备取待检品粉末0.2 0. 3g，置于50ml量瓶中，加甲醇适量，密塞，超声处理10分钟，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇勻，滤过，取续滤液5ml，置IOml量瓶中， 加甲醇稀释至刻度，摇勻，滤过，即得；E、测定法分别精密吸取参照物溶液、对照提取物溶液、待检品溶液各10μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，即得；F、鉴别法以对照提取物的色谱图为标准指纹图谱，将待检品色谱图与其进行比对，计算相似度，即得。6.一种用高效液相色谱指纹图谱鉴定生血宁片的方法，其特征在于该方法为Α、色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以含有20mmol/L四丁基溴化胺的 0.2%甲酸溶液为流动相A，以体积比为50 50 5的乙腈-甲醇-丙酮混合液为流动相B，梯度洗脱；检测波长为392nm ；B、参照物溶液的制备精密称取对照品二氢卟吩e6适量，加甲醇制成每Iml含0. Img 的溶液，即得；D、供试品液的制备取供试品粉末0.2 0. 3g，置于50ml量瓶中，加甲醇适量，密塞， 超声处理10分钟，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇勻，滤过，取续滤液5ml，置IOml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇勻，滤过，即得；E、测定法精密吸取参照物溶液10μ 1，注入高效液相色谱仪，得到参照物色谱图； 取10个批次的生血宁片样品，按照步骤D方法制成样品溶液，分别精密吸取10μ 1，注入液相色谱仪，得到10批生血宁片样品色谱图；取待检品，按照步骤D方法制成待检品溶液，精密吸取10 μ 1，注入液相色谱仪，得到待检品色谱图；F、鉴别法以10批生血宁片样品色谱图的平均图谱为标准指纹图谱，将待检品色谱图与其进行比对，计算相似度，即得。7.根据权利要求5或6所述的鉴定生血宁片的方法，其特征在于进行梯度洗脱时流动相的混合方式为0分钟时，流动相A为55%，流动相B为45% ;60分钟时，流动相A为5%， 流动相B为95 % ；65分钟时，流动相A为5 %，流动相B为95 %。8.权利要求1或2所述指纹图谱的生成方法。9.权利要求1至4中任一所述指纹图谱在鉴定生血宁制剂质量和/或真伪中的应用。全文摘要本专利技术公开了一种色谱指纹图谱，尤其是一种中药生血宁片的色谱指纹图谱，属于中药领域。该图谱的生成条件是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：聂晶，刘朝胜，王根才，罗京，
申请(专利权)人：武汉联合药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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