无抗生素的质粒制造技术
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】无抗生素的质粒纳入参考本申请要求2009年5月22日提交的美国临时申请No.61/180,755的权益。专利
本专利技术涉及不使用抗生素选择压力而在革兰氏阴性细菌中保持和产生质粒的方法。此外，本专利技术涉及所产生的无药物质粒以及含所述无药物质粒的剂型和/或组合物，以及含有用该无药物质粒产生的蛋白质或免疫原的剂型和/或组合物，以及将所述剂型和/或组合物施用于宿主的方法。本专利技术涉及含所述无药物质粒的革兰氏阴性细菌。专利技术背景迄今为止，仍然缺乏被认为安全、强力、高效用于医疗用途的质粒DNA载体。在被递送质粒内抗生素抗性基因的存在是现代基因治疗和DNA疫苗应用的缺陷之一。质粒是与染色体DNA分开的并且能不依赖于染色体DNA而进行复制的染色体外DNA分子(LippsG.(editor).(2008).Plasmids：CurrentResearchandFutureTrends.CaisterAcademicPress.ISBN978-1-904455-35-6)。质粒通常天然存在于细菌中，但有时可以在真核生物中找到。它们被认为是能在合适宿主内自主复制的可转移遗传...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.05.22 US 61/180,7551.包含编码cI阻抑蛋白的多核苷酸的无药物质粒，其中所述多核苷酸编码序列如SEQIDNO：2中所示的cI阻抑蛋白，其中所述cI阻抑蛋白的表达调节宿主中毒性基因产物的表达，并且其中所述质粒进一步包含编码免疫原或蛋白质的异源多核苷酸。2.包含编码cI阻抑蛋白的多核苷酸的无药物质粒，其中所述多核苷酸编码序列如SEQIDNO：44，46，48，50，52，54，56或58中所示的cI阻抑蛋白，其中所述cI阻抑蛋白的表达调节宿主中毒性基因产物的表达，并且其中所述质粒进一步包含编码免疫原或蛋白质的异源多核苷酸。3.权利要求1或2的无药物质粒，其中所述多核苷酸与启动子可操作性连接。4.权利要求3的无药物质粒，其中所述启动子是P1启动子或天然cI启动子。5.权利要求1或2的无药物质粒，其中所述多核苷酸的序列如SEQIDNO：1，45，47，49，51，53，55，57或59中所示。6.权利要求1的无药物质粒，其中所述异源多核苷酸与在真核或原核细胞中有功能的启动子可操作性连接。7.权利要求6的无药物质粒，其中所述启动子是CMV启动子或分离自革兰氏阴性细菌的启动子。8.权利要求4的无药物质粒，其中所述P1启动子由SEQIDNO：29或SEQIDNO：83所示序列组成。9.权利要求4的无药物质粒，其中所述天然cI启动子由SEQIDNO：30所示序列组成。10.包含权利要求1-9中任一项所述无药物质粒的基因工程化革兰氏阴性细菌宿主菌株，其中所述细菌宿主包含在细菌染色体的非必需区内的一个或多个异源多核苷酸，并且其中所述异源多核苷酸编码对宿主有毒的产物，以及所述异源多核苷酸包含sacB基因，并且与由SEQIDNO：5所示序列组成的来自λ噬菌体的启动子可操作性连接。11.权利要求10的细菌宿主菌株，其中所述sacB基因编码由SEQIDNO：4，60，62，64，66，68，70，72，或74中所示序列组成的SacB蛋白。12.权利要求10或11的细菌宿主菌株，其中所述非必需区包含deA基因或purN基因。13.权利要求10或11的细菌宿主菌株，其中所述sacB基因编码由SEQIDNO：4中所示序列组成的SacB蛋白。14.权利要求10或11的细菌宿主菌株，其中所述细菌菌株包含由SEQIDNO：75中所述序列组成的sacB盒的一个或多个拷贝。15.权利要求14的细菌宿主菌株，其中所述细菌菌株包含两拷贝的SEQIDNO：75多核苷酸，其插入在宿主染色体的deA基因和purN基因内。16.权利要求10或11的细菌宿主菌株，其中所述细菌菌株选自禽杆菌属(Avibacterium)，布鲁氏杆菌属(Brucella)，大肠杆菌，嗜血菌属(Haemophilus)，沙门氏菌属(Salmonella)，志贺氏菌属(Shigella)，巴斯德菌属(Pasteurella)和Rimeirella。17.权利要求16的细菌宿主菌株，其中所述细菌菌株选自猪嗜血杆菌(Haemophilussuis)，肠炎沙门氏菌(Salmonellaenteridis)，鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)和婴儿沙门氏菌(Salmonellainfantis)。18.权利要求10的细菌宿主菌株，其中所述革兰氏阴性细菌选自禽杆菌属(Avibacte...
【专利技术属性】
技术研发人员：JC·奥当奈特，E·尤里维特，
申请(专利权)人：梅里亚有限公司，
类型：发明
国别省市：
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