本发明专利技术涉及一种枯草芽孢杆菌，该枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌B7-S(Bacillus?subtilis?B7-S)，其在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCCNO：M?2011162；该枯草芽孢杆菌通过阿魏酸浓度为0.2～2.0g/L的种子培养基诱导获得。本发明专利技术还公开了利用该枯草芽孢杆菌生物转化阿魏酸生产香兰素的方法，该方法以阿魏酸为底物的微生物转化法生产香兰素，转化效率达55％～63％，具有原料丰富易得，生产成本低、生产工艺简单、安全清洁、无污染、环境友好等优点，不但充分保持了香兰素的天然性，而且相比其它生物转化法节省成本30％，有效地解决了化学合成香兰素存在的原料毒性大，生产过程中产生的废弃物对环境污染严重，以及香兰素的纯度、香气单一、安全性低等诸多缺点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种微生物菌株，尤其涉及一种枯草芽孢杆菌及其生物转化阿魏酸生产香兰素的方法。
技术介绍
香兰素(Vanillin)，又名香草醛、香草素、香兰醛或香茅醛、甲基原儿茶醛、凡尼林，其化学名称为4-羟基-3-甲氧基苯甲醛，分子式为C8H8O3,相对分子量为152. 15，其分子结构如下权利要求1.一种枯草芽孢杆菌，其特征在于该枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌B7-S (Bacillus subtilis B7-S)，其在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC NO =M 2011162。2.如权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌的制备方法，包括以下步骤(1)出发菌种的选择出发菌种为枯草芽孢杆菌B7(Bacillus subtilis)，其在中国普通微生物菌种保藏管理中心的保藏编号为CGMCC NO 1. 210 ；(2)制备种子培养基将10.0 20. Og胰蛋白胨、2. 0 6. Og牛肉浸膏、5. 0 20. Og 氯化钠、0. 2 2. Og阿魏酸与1. OL蒸馏水混合均勻后，在压强为1. 05Kg/cm2、温度为121°C 的条件下灭菌20min，即得阿魏酸浓度为0. 2 2. Og/L的种子培养基；(3)诱导将一环生长良好的所述出发菌种枯草芽孢杆菌B7(Bacillus subtilis)斜面培养物，按5 20%的接种量接种至含有50 150ml的所述种子培养基的摇瓶中，按阿魏酸浓度自低浓度至高浓度进行继代培养，并置于恒温振荡器上，在25 45°C的条件下以 50 200r/min的速率进行振荡培养，诱导周期为45 60天，即获得枯草芽孢杆菌B7-S。3.如权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌生物转化阿魏酸生产香兰素的方法，包括以下步骤(1)制备种子培养基将10.0 20. Og胰蛋白胨、2. 0 6. Og牛肉浸膏、5. 0 20. Og 氯化钠、0. 2 2. Og阿魏酸与1. OL蒸馏水混合均勻后，在压强为1. 05Kg/cm2、温度为121°C 的条件下灭菌20min即得阿魏酸浓度为0. 2 2. Og/L的种子培养基；(2)将一环生长良好的所述枯草芽孢杆菌B7-S斜面培养物按5 20%的接种量接种至含有50 200ml所述种子培养基的摇瓶中，并置于恒温振荡器上，在25 45°C的条件下以50 200r/min的速率进行振荡培养30 60h，至菌液OD66tlnm为0. 5 0. 8时即获得枯草芽孢杆菌B7-S转化用菌液；(3)收集菌体细胞取所述枯草芽孢杆菌B7-S转化用菌液在离心机上以1000 4000r/min的转速离心5 20min，收集上清液；对所述上清液以5000 20000r/min的转速离心5 20min，得到菌体细胞沉淀；(4)转化将0.2M且pH值为7. 4的磷酸盐缓冲液加到所述菌体细胞沉淀中，形成菌体浓度为3. OX IO7 8. OX IO7个/ml的菌悬液；然后加入浓度为0. 2 2. Og/L的阿魏酸， 在25 45°C温度下、通气量为0. 5 1. 5L/min,以200 500r/min的转速进行转化，40 60h后，得到转化液；(5)香兰素的分离将所述转化液在离心机上以2000 4000r/min的转速离心5 20min，得到香兰素粗沉淀物；(6)香兰素粗品的制备将所述香兰素粗沉淀物在温度为50 80°C、压力为0.05 0. IOMpa的条件下，真空干燥60 100h，得到干燥的沉淀物，该干燥的沉淀物用研钵研成粒度为200 300目的粉末后，即得香兰素粗品。4.如权利要求3所述的一种枯草芽孢杆菌生物转化阿魏酸生产香兰素的方法，其特征在于所述步骤中0.211且？!1值为7.4的磷酸盐缓冲液(PBS)是指首先将71. 6g Nei2HPO4 ·12Η20溶于 1000ml 水，得到 0. 2Μ Na2HPO4 ；然后将 31. 2g NaH2PO4 ·2Η20 溶于 1000ml 水，得到 0. 2Μ NaH2PO4 ；最后，将 19ml 0. 2M 的 NaH2PO4 和 81ml 0. 2M 的 Na2HPO4 混合均勻后即得。5.如权利要求3所述的一种枯草芽孢杆菌生物转化阿魏酸生产香兰素的方法，其特征在于所述步骤中通气量中的空气是指将空气经活性炭过滤后得到的无菌空气。全文摘要本专利技术涉及一种枯草芽孢杆菌，该枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌B7-S(Bacillus subtilis B7-S)，其在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCCNOM 2011162；该枯草芽孢杆菌通过阿魏酸浓度为0.2～2.0g/L的种子培养基诱导获得。本专利技术还公开了利用该枯草芽孢杆菌生物转化阿魏酸生产香兰素的方法，该方法以阿魏酸为底物的微生物转化法生产香兰素，转化效率达55％～63％，具有原料丰富易得，生产成本低、生产工艺简单、安全清洁、无污染、环境友好等优点，不但充分保持了香兰素的天然性，而且相比其它生物转化法节省成本30％，有效地解决了化学合成香兰素存在的原料毒性大，生产过程中产生的废弃物对环境污染严重，以及香兰素的纯度、香气单一、安全性低等诸多缺点。文档编号C12R1/125GK102443551SQ20111024003公开日2012年5月9日 申请日期2011年8月19日 优先权日2011年8月19日专利技术者严晓娟, 广忠勇, 梁宁, 胡先望, 郭天力, 陈朋 申请人:甘肃省商业科技研究所本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈朋，严晓娟，胡先望，梁宁，广忠勇，郭天力，
申请(专利权)人：甘肃省商业科技研究所，
类型：发明
国别省市：
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