包含具有非经典生物活性的组氨酰-tRNA合成酶剪接变异体的组合物及方法技术

提供了具有非经典生物活性的分离的组氨酰-tRNA合成酶剪接变异体多核苷酸和多肽，及其相关组合物和方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术大体上涉及组氨酰-tRNA合成酶(HRS)剪接变异体多核苷酸和多肽，包含这些多核苷酸和多肽的组合物及其使用方法。相关技术说明催化tRNA分子氨酰化的氨酰-tRNA合成酶(AARQ蛋白质，对翻译过程中解码遗传信息是必不可少的。每个真核tRNA合成酶由与原核tRNA合成酶密切相关的核心酶， 以及添加到氨基末端、羧基末端或插入到核心酶内部的其他结构域组成。例如，人类酪氨酰-tRNA合成酶(TyrRS)具有不属于原核和低等真核生物TyrRS分子部分的羧基末端结构域。已经证实有几个氨酰-tRNA合成酶具有不同于其参与翻译过程的非经典功能。例如，微型酪氨酰-tRNA合成酶(mini-TyrRS)，即对应于第1_364位氨基酸残基、被多形核细胞弹性蛋白酶和纤溶酶切割的TyrRS的N端结构域，是氨酰-tRNA合成酶(AARS)多功能细胞因子样蛋白质和肽的成员。已证明微型-TyrRS在体外刺激中性粒细胞激活和趋化作用，刺激内皮细胞增殖和迁移，并在鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)和小鼠基质胶检测(matrigel assay)中促血管生成。微型-TyrRS具有ELR基序，所述ELR基序和诸如IL-8的CXC-趋化因子类似，可赋予微型-TyrRS趋化因子活性和血管生成活性。和其他含ELR的细胞因子类似，所述基序的突变抑制微型-TyrRS对白细胞的结合和刺激，并抑制血管生成。此外，已证明TrpRS的截短形式具有血管生成性能。在正常人体细胞中，有两种可检测的TrpRS形式由全长分子(第1-471位氨基酸残基)组成的主要形式和次要的截短形式。次要形式是通过前体mRNA(pre-mRNA)的可选剪接而使氨基末端结构域缺失所产生的。已确定微型TrpRS的氨基末端为全长TrpRS分子第48位的蛋氨酸残基。或者，截短 TrpRS可以通过蛋白水解产生。例如，牛TrpRS在胰脏中高表达并分泌到胰液中，从而导致产生截短的TrpRS分子。进一步的研究表明，微型-TrpRS抑制VEGF诱导的细胞增殖和迁移(Wakasugi et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. 99 173-177 (2002)) 具体而言，鸡 CAM 实验表明，微型-TrpRS可阻止VEGF的血管生成活性。相比之下，全长TrpRS不抑制血管生成。因此，去除前48位氨基酸残基可显现出TrpRS抗血管生成活性。因此，与TyrRS—样，某些形式的TrpRS具有除tRNA氨酰化以外的活性。鉴于这些与可变形式TyrRS和TrpRS相关的、非经典的治疗相关活性的观察结果， 需要鉴定其他氨酰-tRNA合成酶蛋白质的生物相关形式和/或活性，以开发该蛋白质家族的全部治疗潜力。因此，本专利技术满足这些需要，并提供其他相关的优点。专利技术概述本专利技术大体上涉及具有非经典活性的分离的HRS剪接变异体多肽；编码HRS剪接变异体多肽的HRS剪接变异体多核苷酸；与HRS多肽结合的结合剂；HRS多肽和多核苷酸的类似物、变异体和片段，以及前述任一物质的组合物和其制备和使用方法。因此，根据一个方面，本专利技术提供具有至少一种非经典生物活性的分离的HRS剪接变异体多肽，及其活性片段和变异体。本文所用的“非经典”活性，一般是指本专利技术HRS 多肽所具有的除氨酰化以外的活性，更具体地说，除了将组氨酸添加到tRNAms分子上以外的活性。如本文所述，在某些实施方案中，本专利技术HRS多肽所显示的非经典生物活性可以包括，但不仅限于，细胞因子产生调节、细胞增殖调节、凋亡调节、细胞信号传导调节、血管生成调节、细胞迁移调节、细胞结合调节、细胞代谢调节等。在一个说明性实施方案中，本专利技术HRS剪接变异体多肽是至少包含HRS的WHEP结构域，如人类全长HRS蛋白质的第3-43位氨基酸残基，的HRS片段。在另一个实施方案中， 本专利技术HRS剪接变异体多肽是至少包含HRS的反密码子结合结构域，如人类全长HRS蛋白质的第406-501位氨基酸残基的HRS片段。在又一个实施方案中，HRS剪接变异体多肽是缺失功能性氨酰化结构域，如人类全长HRS蛋白质的第M-398位氨基酸残基的HRS片段。 在一个更具体的实施方案中，HRS剪接变异体多肽至少包含WHEP结构域和反密码子结合结构域，但缺失功能性氨酰化结构域。在一个更具体的实施方案中，本专利技术HRS多肽包含SEQ ID NO 6、9或11中公布的序列，或者是SEQ ID NO 6、9或11所示序列或是的SEQ ID NO 6、9或11所示多肽的连续片段。需要说明的是，所述片段实质上可以基本上是任意长度的，只要其保留至少一种感兴趣的非经典生物活性。例如，如本文进一步所述，这样的片段可以包含SEQ ID NO 6、9或11 的至少约5、10、15、20、25、50、75、80或更多个连续氨基酸残基。在本专利技术的其他实施方案中，HRS多肽包含SEQ ID NOs :6、9或11所示序列的活性变异体(即保留至少一个感兴趣的非经典生物活性)。在一个更具体的实施方案中，活性变异体是一种沿着其长度与SEQ ID NO 6、9或11所示序列具有至少70%、80%、90%、95% 或99%同一性的多肽。在另一个具体实施方案中，本专利技术HRS多肽不是由全长人类HRS蛋白第1_48位残基组成的多肽。根据本专利技术的另一个方面，提供了至少包含至少一个本文所述的HRS多肽和一个异源融合伴侣的融合蛋白。根据本专利技术的另一个方面，提供了编码本文所述多肽和融合蛋白的分离的多核苷酸，以及包含这种多核苷酸的表达载体和包含这种表达载体的宿主细胞。此外，还包括与 HRS多核苷酸特异性杂交的寡核苷酸，如SEQ ID N0:5、8或10的多核苷酸。在某些实施方案中，寡核苷酸为引物、探针或反义寡核苷酸。其他实施方案涉及靶向HRS多核苷酸的RNAi剂(RNAi agents) 0在某些实施方案中，寡核苷酸或RNAi剂与HRS剪接变异体特有的剪接点特异性地杂交，或靶向所述剪接点。根据本专利技术的另一个方面，提供了对本专利技术HRS剪接变异体多肽(例如，SEQ ID N0:6、9或11)具有结合特异性的结合剂(例如，抗体和其抗原结合片段)，或其细胞结合伴侣之一。在某些实施方案中，所述结合剂为抗体、所述抗体的抗原结合片段、肽、肽模拟物、 小分子或适体。在一些实施方案中，所述结合剂拮抗HRS多肽的非经典活性。在其他实施方案中，所述结合剂促进HRS多肽的非经典活性。根据本专利技术的又一个方面，提供了包含生理上可接受的载体和至少一个本文所述的本专利技术的分离的多肽、融合蛋白、抗体、分离的多核苷酸、表达载体、宿主细胞等的组合物，如药物组合物。此外，还包括确定样品中HRS剪接变异体的多核苷酸序列的存在或水平的方法， 所述方法包括使样品接触与SEQ ID NO :5、8或10所示的HRS剪接变异体特异性杂交的一种或更多种寡核苷酸，检测样品中寡核苷酸存在与否，并由此确定HRS剪接变异体的多核苷酸序列的存在或水平。还提供了确定样品中HRS剪接变异体的多核苷酸序列存在或水平的方法，包括使样品与至少两种特异性扩增SEQ ID NOs :5、8或10所示的HRS剪接变异体的寡核苷酸接触，进行扩增反应，检测扩增产物存在与否，并由此确定HRS剪接变异体的多核苷酸序列的存在或水本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.03.16 US 61/160,630;2009.09.03 US 61/239,7471.具有非经典生物活性的分离的组氨酰-tRNA合成酶(HRS)剪接变异体多肽，或其活性片段或变异体。2.根据权利要求1所述的分离的组氨酰-tRNA合成酶多肽，其中所述多肽包含至少 HRS的WHEP结构域。3.根据权利要求1所述的分离的组氨酰-tRNA合成酶多肽，其中所述多肽包含至少 HRS的反密码子结合结构域。4.根据权利要求1所述的分离的组氨酰-tRNA合成酶多肽，其中所述多肽缺少功能性氨酰化结构域。5.根据权利要求1所述的分离的组氨酰-tRNA合成酶多肽，其中所述多肽包含至少 HRS的WHEP结构域和HRS的反密码子结合结构域，但是缺少功能性氨酰化结构域。6.根据权利要求1所述的分离的组氨酰-tRNA合成酶多肽，其中所述多肽包含SEQID NO :6、9或11所示的序列。7.根据权利要求1所述的分离的组氨酰-tRNA合成酶多肽，其所述其活性变异体是与 SEQ ID NO :6、9或11所示的序列具有至少90%同一性的多肽。8.根据权利要求1所述的分离的组氨酰-tRNA合成酶多肽，其所述其活性片段包含SEQ ID NO :6、9或11所示序列的至少20个连续氨基酸残基。9.根据权利要求1所述的分离的组氨酰-tRNA合成酶多肽，其中所述非经典生物活性选自RNA结合、氨基酸结合、细胞增殖调节、细胞迁移调节、细胞分化调节、凋亡或细胞死亡调节、细胞信号传导调节、血管生成调节、细胞结合调节、细胞代谢调节、细胞因子产生或细胞因子活性调节、细胞因子受体活性调节和炎症调节。10.融合多肽，其包含如权利要求1-9中任一权利要求所述的多肽和异源融合伴侣。11.二聚或多聚复合物，其包含至少一种权利要求1所述的分离的多肽。12.分离的多核苷酸，其编码权利要求1-10中任一权利要求所述的多肽。13.根据权利要求12所述的分离的多核苷酸，其中所述多核苷酸包含SEQID NO :5、8 或10所示的序列，或其补体。14.表达载体，其包含权利要求13所述的分离的多核苷酸。15.宿主细胞，其包含权利要求14所述的表达载体。16.与SEQID NO :5、8或10的多核苷酸特异性杂交的寡核苷酸。17.根据权利要求16所述的寡核苷酸，其选自引物、探针和反义寡核苷酸。18.结合剂，其对于权利要求1所述的分离的HRS多肽、所述HRS多肽的细胞结合伴侣或两者都表现出结合特异性。19.根据权利要求18所述的结合剂，其选自抗体、所述抗体的抗原结合片段、肽、肽模拟物、小分子和适体。20.根据权利要求18所述的结合剂，其中所述结合剂拮抗所述HRS多肽的非经典活性。21.根据权利要求18所述的结合剂，其中所述结合剂促进所述HRS多肽的非经典活性。22.确定样品中组氨酰-tRNA合成酶(HRQ剪接变异体的多核苷酸序列的存在或水平的方法，包括使所述样品接触与SEQ ID NO :5、8或10所示的HRS剪接变异体特异性杂交的一种或更多种寡核苷酸，检测样品中寡核苷酸存在与否，并由此确定所述HRS剪接变异体的多核苷酸序列的存在或水平。23.确定样品中组氨酰-tRNA合成酶(HRQ剪接变异体的多核苷酸序列的存在或水平的方法，包括使所述样品与至少两种特异性扩增SEQ ID NO :5、8或10所示的HRS剪接变异体的寡核苷酸接触，进行扩增反应，检测扩增产物存在与否，并由此确定所述HRS剪接变异体的多核苷酸序列的存在或水平。24.根据权利要求22或23所述的方法，其中所述寡核苷酸与所述HRS剪接变异体特有的剪接点特异性杂交或者特异性扩增所述剪接点。25.根据权利要求22或23所述的方法，包括将所述HRS剪接变异体的存在或水平与对照样品或预定值比较。26.根据权利要求25所述的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：周洁，刘静芬，许志雯，罗咏诗，克瑞斯蒂·海伦·派尔，莱斯利·安·格林，
申请(专利权)人：盘古生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：