本发明专利技术涉及一种J亚群禽白血病病毒快速检测试纸卡，包括有衬板，其上设置有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其特征在于金标垫上包被有胶体金标记的鼠抗J亚群禽白血病病毒gp85蛋白的单克隆抗体；硝酸纤维素膜上包被有兔抗J亚群禽白血病病毒多克隆抗体构成的检测线和兔抗鼠IgG多克隆抗体构成的质控线。本发明专利技术的优点在于：本发明专利技术中J亚群禽白血病病毒快速检测试纸卡检测方法，可快速检测鸡体是否感染或携带J亚群禽白血病病毒，具有反应快速、敏感性高、特异性强、操作简单、适合“栏圈边”检测、经济实惠等优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种J亚群禽白血病病毒快速检测试纸卡，主要用来诊断J亚群禽白血病感染的禽类，或用来监测鸡群是否携带J亚群禽白血病病毒。
技术介绍
J亚群禽白血病是由J亚群禽白血病病毒(ALV-J)感染引起的一种肿瘤性传染病。 呈全球性爆发，对世界肉种鸡业造成了毁灭性打击。近年来禽白血病的10个亚群中，J亚群禽白血病对养禽业的危害最为严重，相对之前对蛋鸡等危害较重的A、B亚群禽白血病对养禽业的危害更为突出。该病以垂直传播为主，通过引种和种苗的销售等方式造成大面积扩散。我国白羽肉种鸡均从国外引进，且未对新出现的ALV-J采取任何防范措施，加之我国的养殖条件相对落后，使ALV-J在我国造成的损失高于其它任何国家。2000年，J亚群禽白血病在我国白羽肉种鸡中全面爆发，造成了巨大的经济损失；2002 — 2005年间，ALV-J病毒突破种间屏障，造成广东、广西三黄鸡、中国麻鸡鸡群中爆发J亚群禽白血病，使许多养殖场倒闭；2007年和J亚群禽白血病密切相关的血管瘤病在蛋鸡群及商品蛋鸡群中爆发，并很快席卷全国。由于ALV-J病毒自身的特殊性以及引起疾病的复杂性，世界兽医技术研究人员对 ALV-J的防治研究未见显著成就，至今无法控制ALV-J的有效方法和防治ALV-J感染的药物和疫苗。对ALV-J的防控，发达国家主要采取净化淘汰，这不仅需要有一套行之有效的的净化方案，而且必须要有灵敏、方便、快捷的净化工具——ALV-J诊断试剂。ALV-J的检测方法较多，如琼脂扩散、ELISA、PCR、LAMP等技术，但它们使用起来存在操作不变、成本较高、设备要求高、对人员技术要求高等这样那样的缺点，胶体金试纸卡具有方便、快捷、灵敏、经济实惠、适合基层快速检测等特点。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对上述现有技术而提供了一种J亚群禽白血病病毒快速检测试纸卡，以鸡组织、血液、拭纸等为检测样品，可简便、快速地检测鸡群是否感染、携带ALV-J，为鸡群特别是种鸡的ALV-J净化提供快捷工具，降低了净化成本，节约人力物力。本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案是J亚群禽白血病病毒快速检测试纸卡，包括有衬板，其上设置有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其特征在于金标垫上包被有胶体金标记的鼠抗J亚群禽白血病病毒gp85蛋白的单克隆抗体；硝酸纤维素膜上包被有兔抗J亚群禽白血病病毒多克隆抗体构成的检测线和兔抗鼠IgG多克隆抗体构成的质控线。按上述方案，所述的胶体金垫上附着有的1. 8mg/ml鼠抗J亚群禽白血病病毒gp85 蛋白的单克隆抗体计25μ1，可与鸡J亚群禽白血病病毒特异性结合。满足试纸卡检测的灵敏度要求，同时也可满足与兔抗鼠多抗结合的要求。金标垫的制备方法如下取胶体直径为20 士 5nm的胶体金溶液，用碳酸钠调整至PH8. 0，加入鼠抗J亚群禽白血病病毒gp85蛋白的单克隆抗体，室温搅拌，BSA封闭，离心，弃沉淀；上清液离心，弃上清，将沉淀以与原体积相同的PBS溶解，如上重复离心2次，所得沉淀物用40%原体积的PBS重悬，将重悬的混合液均勻分散在玻璃纤维上，使其干燥备用。按上述方案，所述的检测线中兔抗J亚群禽白血病病毒多克隆抗体含量为 0. 3^0. 5 μ g/ml ；质控线中兔抗鼠IgG含量为1. 2 2. 2 μ g/ml。按上述方案，所述的检测线包被方法如下取所述浓度0. 3、. 5 μ g/ml兔抗J亚群禽白血病病毒多克隆抗体10μ 1，在预定的检测线位置划线，干燥后即为检测线。按上述方案，所述的质控线包被方法如下取所述浓度为1. 2^2. 2 μ g/ml的兔抗鼠IgG多克隆抗体5μ 1，在预定的质控线位置划线，干燥后即为质控线。本专利技术还提供了上述鸡J亚群禽白血病抗体快速检测试纸卡的检测方法，其特征在于包括有以下步骤将试纸卡平放，取研磨冻融离心后的待检组织、血液或肛门拭纸样品 100 μ 1滴在样品垫上，根据检测线和质控线的显色状态，判断检测结果如果质控线、检测线均出现，判定为阳性；质控线出现，检测线不出现，判定为阴性；质控线、检测线均不出现或质控线不出现而检测线出现，均判定检测结果无效。本专利技术所述的禽白血病分Α、B、C、D、E、F、G、H、I和J等10个亚群，其中A、B、C、D、Ε、J亚群均可感染鸡，J亚群禽白血病是由J亚群禽白血病病毒(ALV-J)感染引起的一种肿瘤性传染病，其囊膜蛋白gp85具有亚群特异性，感染过的鸡可产生亚群特异性抗体。 gp85蛋白上有多个抗原决定簇，可与相应的单克隆抗体特异性结合。本专利技术设计了针对ALV-J gp85蛋白的单克隆抗体、兔抗J亚群禽白血病多克隆抗体(兔抗ALV-J的多克隆抗体)及兔抗鼠多克隆抗体，用胶体金标记鼠抗ALV-J gp85蛋白的单克隆抗体3A1，捕获鸡组织、血液、肛门拭纸中的ALV-J病毒粒子，若样品阳性，金标鼠抗 ALV-J gp85蛋白的单克隆抗体在检测线富集，则会形成肉眼可见的检测线(T线)，越过检测线的金标鼠抗ALV-J gp85蛋白的单克隆抗体与兔抗鼠的多抗结合形成肉眼可见的质控线 (C 线)。本专利技术的优点在于本专利技术中J亚群禽白血病病毒快速检测试纸卡检测方法，可快速检测鸡体是否感染或携带J亚群禽白血病病毒，具有反应快速、敏感性高、特异性强、 操作简单、适合“栏圈边”检测、经济实惠等优点。附图说明图1为本专利技术的结构示意其中，1 一吸水垫；2 —衬板；3 —硝酸纤维素膜；4 一金标垫；5 —样品垫；6 —质控线； 7一检测线；图2为检测结果判定，其中，A:C、T均出现红色线判为阳性；B 仅C出现红色线而T没出现红色线判为阴性；C、D 只要C不出现红色线结果均判为无效检测。具体实施例方式下面结合实施例对本专利技术做进一步详细的说明。实施例1 J亚群禽白血病亚群特异性gp85抗原蛋白的制备用基因工程技术高效表达J亚群禽白血病亚群特异性gp85抗原蛋白。参考GENBANK 上已经发表的J亚群原型毒株HPRS-103的gp85基因序列，设计一对扩增gp85基因的引物，上游引物 Pl :5，-TCCGAATTCGGAGTTCATCTATTGCAACAA-3 ‘，下游引物 P2 :5 ‘-GTACTCGAGTTAGCGCCTGCTACGGTGG TG-3'。P1 和 P2 的 5'端分别引入EcoR I 和 Xho I 酶切位点。扩增长度为921bP，反应条件为95°C预变性5min后，按94°C 30s, 57°C 45s, 72°C Imin进行33个循环，最后72°C延伸lOmin，PCR产物连接到pMD_18T载体上，将连接产物转化到DH5a感受态中，涂布于含IOOg / mL氨卞青霉素(Amp)的LB平板，37°C培养16小时， 挑单菌落，碱裂解法抽提重组质粒，以PCR和双酶切鉴定阳性克隆，并序列测定验证。阳性克隆的酶切产物与pET-28a表达质粒链接，构建重组表达质粒pETj8a-gp85，并转化表达菌BL21，挑单菌落接入5mL含100g/mL卡那霉素(Kan)的LB培养基中，37°C、250r/min震荡培养10h，然后按1 100转接500mL LB (100g/mL Kan)的培养基，37°C、250r/min震荡培养汕，加入终止浓度为lmmol/ 本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：罗青平，张蓉蓉，温国元，邵华斌，艾地云，王红琳，杨峻，罗玲，刘丽娜，
申请(专利权)人：湖北省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：
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