一种老鼠瓜苷A的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种老鼠瓜苷A的制备方法，以刺山柑为原料，经提取、脱色、柱层析、高速逆流色谱分离等步骤纯化制备老鼠瓜苷A。本方法制备的老鼠瓜苷A纯度高于96%，且具有简便、快速、制备量大、样品损失少等优点，易于推广使用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于中药领域，涉及一种老鼠瓜苷A的制备方法，特别是涉及一种应用高速逆流色谱法纯化老鼠瓜苷A的制备方法。
技术介绍
刺山柑C^TAari1S spinosa L.为白花菜科山柑属植物，又名老鼠瓜、野西瓜，主要分布于亚洲西部、欧洲、北美和大洋洲，我国主产西北干旱地区，新疆各沙漠区分布较多。其味辛苦，性温，具有祛风散寒、除湿、止痛、调经、消肿的作用，主要用于治疗风湿性关节炎和痛风。现代药理研究表明，老鼠瓜水提物具有保肝、降糖、降血脂、抗菌和清除自由基等作用。其抗菌消炎主要成分为糖苷类化合物，有corchoionoside C, spionoside A、 spionoside B、老鼠瓜苷A等。目前，对刺山柑的研究仍在起步阶段，尚未见老鼠瓜苷A工业生产方法的相关专利报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种老鼠瓜苷A的制备方法，应用高速逆流色谱分离纯化老鼠瓜苷A，操作简单、产品纯度高。为了实现上述目的，本专利技术的技术方案如下一种老鼠瓜苷A的制备方法，提取、脱色、柱层析、高速逆流色谱分离等步骤，具体步骤如下(1)提取以刺山柑地上部分为原料，以乙醇溶液为提取溶媒，回流提取2-3次，过滤得到提取液；(2)脱色提取液中加入活性炭，在70°C下保温脱色30-60min，滤除活性炭，减压浓缩， 回收乙醇，得到浓缩液；(3)柱层析浓缩液通过大孔吸附树脂柱，用水和40-60%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液， 浓缩干燥得到老鼠瓜苷A粗品；(4)高速逆流色谱分离采用高速逆流色谱法对所得粗品进行分离纯化，制备得到老鼠瓜苷A。所述步骤(1)中乙醇溶液浓度为60-75%。所述步骤(2)中活性炭为药用活性炭，用量为药材质量的2-5%。所述步骤(3)中的大孔吸附树脂为AB-8、HPD100或ADS-7型。所述步骤(4)中高速逆流色谱法分离溶剂系统选用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水， 体积比为(10-12): (4-6) (5-8) (4-8)，溶剂系统配制后静置分层，以上相为固定相， 下相为流动相，流动相流速控制在1. 5-3ml/min，主机转速控制在800-950r/min。本专利技术的有益效果是采用大孔吸附树脂和高速逆流色谱法分离纯化，工艺简单、 成本低、产品含量高。3下面将结合具体实施方式进一步说明本专利技术，但本专利技术要求保护的范围并不局限于下列实施例。具体实施例方式实施例1 以刺山柑地上部分为原料，粉碎，取3kg，加入8L75%乙醇溶液，回流提取2次，过滤得到提取液，提取液中加入洲药材质量的药用活性炭，在70°C下保温脱色30min，滤除活性炭， 减压浓缩，回收乙醇，得到浓缩液，通过AB-8型大孔吸附树脂柱，吸附完成后，先用水洗脱至无色，再用50%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得到老鼠瓜苷A粗品，采用高速逆流色谱法对所得粗品进行分离纯化，按体积比为11 4 7 7配制正己烷-乙酸乙酯-甲醇-7K 溶剂系统，溶剂系统混勻后静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，将固定相充满高速逆流色谱柱，开启主机转速调至800r/min，泵入下相作流动相，动态平衡后，流动相流速控制在1.5ml/min，将粗品溶于下相由进样阀进样，HPLC检测，收集目标成分，减压浓缩干燥流分，得到老鼠瓜苷A6. 3g，含量97. 8%。实施例2:以刺山柑地上部分为原料，粉碎，取3kg，加入7L60%乙醇溶液，回流提取3次，过滤得到提取液，提取液中加入5%药材质量的药用活性炭，在70°C下保温脱色60min，滤除活性炭，减压浓缩，回收乙醇，得到浓缩液，通过HPD100型大孔吸附树脂柱，吸附完成后，先用水洗脱至无色，再用40%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得到老鼠瓜苷A粗品，采用高速逆流色谱法对所得粗品进行分离纯化，按体积比为10:4:7:5配制正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统，溶剂系统混勻后静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，将固定相充满高速逆流色谱柱，开启主机转速调至850r/min，泵入下相作流动相，动态平衡后，流动相流速控制在3ml/min，将粗品溶于下相由进样阀进样，HPLC检测，收集目标成分，减压浓缩干燥流分，得到老鼠瓜苷A5. 2g，含量98. 5%。实施例3:以刺山柑地上部分为原料，粉碎，取3kg，加入8L65%乙醇溶液，回流提取2次，过滤得到提取液，提取液中加入2、药材质量的药用活性炭，在70°C下保温脱色40min，滤除活性炭， 减压浓缩，回收乙醇，得到浓缩液，通过ADS-7型大孔吸附树脂柱，吸附完成后，先用水洗脱至无色，再用50%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得到老鼠瓜苷A粗品，采用高速逆流色谱法对所得粗品进行分离纯化，按体积比为10 5 7 8配制正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统，溶剂系统混勻后静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，将固定相充满高速逆流色谱柱，开启主机转速调至950r/min，泵入下相作流动相，动态平衡后，流动相流速控制在2. 5ml/min,将粗品溶于下相由进样阀进样，HPLC检测，收集目标成分，减压浓缩干燥流分，得到老鼠瓜苷A5. 4g，含量98. 6%。实施例4:以刺山柑地上部分为原料，粉碎，取3kg，加入5L60%乙醇溶液，回流提取3次，过滤得到提取液，提取液中加入5%药材质量的药用活性炭，在70°C下保温脱色60min，滤除活性炭， 减压浓缩，回收乙醇，得到浓缩液，通过AB-8型大孔吸附树脂柱，吸附完成后，先用水洗脱至无色，再用40%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得到老鼠瓜苷A粗品，采用高速逆流4色谱法对所得粗品进行分离纯化，按体积比为11 5 5 8配制正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统，溶剂系统混勻后静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，将固定相充满高速逆流色谱柱，开启主机转速调至800r/min，泵入下相作流动相，动态平衡后，流动相流速控制在2ml/min，将粗品溶于下相由进样阀进样，HPLC检测，收集目标成分，减压浓缩干燥流分，得到老鼠瓜苷A8. 7g，含量98. 1%。实施例5:以刺山柑地上部分为原料，粉碎，取3kg，加入8L60%乙醇溶液，回流提取2次，过滤得到提取液，提取液中加入3%药材质量的药用活性炭，在70°C下保温脱色40min，滤除活性炭， 减压浓缩，回收乙醇，得到浓缩液，通过ADS-7型大孔吸附树脂柱，吸附完成后，先用水洗脱至无色，再用40%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得到老鼠瓜苷A粗品，采用高速逆流色谱法对所得粗品进行分离纯化，按体积比为12 6 5 8配制正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统，溶剂系统混勻后静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，将固定相充满高速逆流色谱柱，开启主机转速调至800r/min，泵入下相作流动相，动态平衡后，流动相流速控制在2ml/min，将粗品溶于下相由进样阀进样，HPLC检测，收集目标成分，减压浓缩干燥流分，得到老鼠瓜苷A9. 0g，含量97. 2%。实施例6:以刺山柑地上部分为原料，粉碎，取3kg，加入5L75%乙醇溶液，回流提取3次，过滤得到提取液，提取液中加入5%药材质量的药用活性炭，在70°C下保温脱色50min，滤除活性炭，减压浓缩，回收乙醇，得到浓缩液，通过HPD1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘东锋，万冬梅，
申请(专利权)人：南京泽朗医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：