一种维持鱼类肠细胞增殖分化的原代培养方法技术

本发明专利技术公开了维持鱼类肠细胞增殖分化的原代培养方法，包括以下步骤：1)、按常规方法将鱼体表消毒，无菌取出整个内脏，去除肠道表面的系膜组织，洗净肠道内容物；2)、将肠道剪切成2～3mm的组织小块；3)、用混合液消化分离肠细胞，得到鱼肠细胞和细胞团；4)、用离心方法分离纯化得到鱼肠细胞团；5)、将分离纯化的鱼肠细胞团计数接种于胶原蛋白涂抹的培养板中进行培养；6)、接种的鱼肠细胞团在24～26℃条件下原代培养，细胞贴壁生长，增殖分化。本发明专利技术根据鱼类肠道组织结构特点，摸索了最佳的鱼肠细胞分离酶的种类、使用浓度和肠细胞团的纯化方法。采用商品胶原蛋白涂抹方便涂抹细胞培养器皿，摸索了最佳的鱼肠细胞接种和密闭培养条件。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种动物肠细胞分离和培养方法，具体涉及一种鱼肠细胞分离、纯化和原代培养方法。
技术介绍
鱼类肠细胞为肠道主要功能性细胞，参与肠道营养物质的消化吸收、免疫屏障和应激反应等多种重要生理过程。同时，肠细胞还是增殖分化最快的一类细胞，对维持肠道黏膜上皮功能正常非常重要。由于神经、体液和许多类群细胞与肠细胞间存在广泛的相互作用，使体内试验研究肠细胞非常困难。而肠细胞体外培养研究模型为研究肠细胞增殖、分化凋亡，营养物质吸收利用及转化提供了准确的手段，是探讨营养物质对肠细胞营养作用机制、重金属及其它有毒有害物质对肠道损伤与肠道修复机制、筛选有益鱼类肠道健康的功能性饲料的理想模型。因此，依据肠细胞的生物学特点，建立体外鱼肠细胞培养研究模型， 对于各相关领域的研究非常重要。目前鱼类肠细胞原代培养已有研究。其方法是采用单一的胶原蛋白酶分离鱼肠细胞，利用鱼皮胶原蛋白为肠细胞贴壁支持物，在二氧化碳培养箱中培养。由于现有培养方法条件要求高，在科学试验研究中应用很少。主要问题表现在以下几个方面(1)现有的鱼肠细胞分离单一使用胶原蛋白酶，需要酶量较大，细胞损伤严重，产率低。肠细胞团比例小，肠细胞贴本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周小秋，姜俊，冯琳，刘扬，胡凯，姜维丹，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：