本发明专利技术涉及体外评价目标化合物的免疫原性的方法，包括如下步骤：ａ）提供全血样品，其中所述血液暴露于所述目标化合物，ｂ）在所述样品中测量五聚环蛋白－３的水平，和ｃ）将五聚环蛋白－３的测量水平与对照进行比较。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用五聚环蛋白-3(PTX-(3)的药物安全性试验过去，在临床研究期间施用治疗性抗体导致了涉及所述抗体的第一次注入的严重 的副反应。已经描述了在循环中特定的促炎细胞因子的过量的急性释放，且认为是在引起 复杂的症状中关键的，表示为细胞因子释放综合征(CRS)。通常CRS在注入后20-90分钟开 始，且是抗体靶向的细胞释放细胞因子的结果，以及是抗体与Fc受体结合而引起的免疫效 应细胞释放细胞因子的结果。当细胞因子释放入循环时，全身性症状如发热、恶心、寒战、低 血压、心动过速、无力、头痛、皮疹、嗓子发痒和呼吸困难可产生。在大多数患者中，症状在严 重性上是温和到中等的且易于处理。然而，一些患者可能经历严重的，威胁生命的反应，这 些反应源自细胞因子的大量释放。由于CRS是种特异性事件，该特异性事件在常规的药物试验的动物模型中不能观 察到，因此需要基于人类血液来源的细胞的体外模型以评价新医药产品的细胞因子释放风 险。已知的是测量血清或血浆中细胞因子水平的测试法。然而，经典的细胞因子如TNF-α、 IFN-Y或白介素的增加不是总是可预测CRS的发生。而且用可获得的测试法，血液样品中 细胞因子的释放仅仅在潜在的不利事件后的相当长时间后是可检测的。因此，需要提供可 靠的和更快速的方法用于确定化合物诱导CRS的风险。这一问题通过本专利技术解决，尤其通 过使用五聚环蛋白-3用于确定化合物在诱导急性细胞因子释放相关的注入反应方面的免 疫原性。因此，本专利技术提供ΡΤΧ-3用于确定目标化合物在人类中诱导细胞因子释放综合征 的风险的用途。另外，本专利技术提供用于确定目标化合物的免疫原性的新方法。尤其是该方法允许 在个体中评价目标化合物诱导CRS的风险。所述的方法包括如下步骤a)提供全血样品，其中所述的血液样品暴露于所述化合物，b)测量所述的样品中五聚环蛋白-3(ΡΤΧ_3)的水平，和c)将五聚环蛋白-3的测量水平与对照进行比较。优选地测量血浆中ΡΤΧ-3的水平，所述的血浆通过从全血样品中除去血细胞得 到。备选地，也可测量从全血样品获得的血清中的ΡΤΧ-3水平。术语“免疫原性”指物质引起免疫应答的能力。免疫应答是由B-细胞、T-细胞和 先天免疫系统的细胞，如单核细胞、巨噬细胞或中性白细胞介导的免疫系统对物质的反应。 B-细胞反应涉及抗原特异性抗体的产生和释放。T-细胞、单核细胞或粒细胞的应答可涉及 促炎性和/或抗炎性细胞因子的释放。在机体循环中过量的特定促炎性细胞因子的急性释 放表示为“细胞因子释放综合征”(CRS)。细胞因子是在细胞间起信使作用的可溶性蛋白质，其刺激或者抑制免疫系统的多 种细胞的活性。细胞因子包括淋巴因子、单核因子、白介素和干扰素。本文中使用的术语“目标化合物”指生物分子或化学分子。生物分子可以特别是 多肽或多核苷酸。所述的多肽和多核苷酸可以有修饰，例如甲基化、聚乙二醇化、磷酸化和糖基化。本文中使用的术语“多肽”指通过肽键连接的氨基酸链。术语“多肽”还包括蛋白 质和肽。优选地，多肽是抗体，更优选地，多肽是治疗性抗体。治疗性抗体可是人抗体或人源化抗体。本文中使用的术语“多核苷酸”涉及包含核苷酸A、C、G和T (或U)的核苷酸的聚 合物。多核苷酸是例如寡核苷酸、miRNA, siRNA、反义RNA、mRNA或cDNA。优选地，目标化合物是治疗性化合物。治疗性化合物是在治疗方法中使用的化合 物，包括缓和、消除或减轻症状，或预防或减少感染任何疾病或者人或动物机体机能失常的 可能性。治疗性化合物可以是生物分子或化学分子。生物的治疗性化合物优选地是抗体或 SiRNA0五聚环蛋白-3(ΡΤΧ_3)，也已知为Pentaxin-3，属于已知为“长五聚环蛋白”的 蛋白质家族，其具有羧基端五聚环蛋白结构域的特征(Basile等，J Biol Chem. 1997, 272(13) :8172-8)。编码 381 个氨基酸(SEQ. ID NO 1)的这一蛋白质的 cDNA 已由 Breviario 等克隆(J Biol Chem.，1992，267 (31) :22190-22197)且鉴定为其表达在人类脐静脉内皮细 胞中通过IL-I β诱导的基因。多种细胞类型产生和分泌五聚环蛋白_3。人类外周血单核细胞应答细菌脂多糖、 IL-I β 和 TNF-α 产生该蛋白质，但不应答 IL-6、MCP-U M-CSF, GM-CSF 或 IFN-y (Alles 等，Blood. 1994,84(10) :3483-93)。五聚环蛋白在受刺激的单核细胞、内皮细胞和成 纤维细胞中表达(Alles等，1994)，在树突细胞中表达(Doni等，Eur J Immunol. 2003, 33(10) :2886-93),在未分化的和分化的成肌细胞中表达(Introna等，血液.1996，87 (5) 1862-72)，在类风湿性关节炎滑膜细胞中表达(Luchetti等，Clin Exp Immunol. 2000, 119(1) :196-202.),在神经胶质细胞中表达(Polentarutti 等，J Neuroimmunol. 2000 年7月1日；106 (1-2) :87-94)，在卡波西肉瘤细胞(可通过病毒IL-6诱导)中表达 (Klouche等，AIDS. 2002年5 ^ 24 H ；16(8) :F9_18)，在巨噬细胞、内皮细胞中表达和不 常发生地由平滑肌细胞在晚期的粥样硬化斑块中表达(Rolph等，Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2002 ；22 (5) :el0_4)，在肾小球系膜和内皮细胞中表达(Bussolati等，J Immunol. 2003 年 2 月 1 日；170 (3) 1466-72)，在前脂肪细胞表达(Abderrahim-Ferkoune 等，J Lipid Res. 2003 ；44(5) :994-1000)，在人类和鼠类卵丘细胞表达(Salustri等， Development. 2004 ； 131 (7) :1577-86)和在中性白细胞中表达(Jaillon 等 JEM. 2007， 204(4) :793-804 ；Imamura 等，Cell Immunol 2007,248(2) :86-94)。本文中使用的术语“全血”指包含悬浮在称为血浆的液体中的红细胞、白细胞和血 小板的液体。全血样品可以从任何动物采集。优选地，全血样品从人类患者采集(人全血 样品)。有一些方法用于使全血暴露于目标化合物方法1) 一种可能性是将化合物加到全血样品。在采集样品后尽快加化合物，优选 地在采集后4小时内加，更优选地在采集后0. 5-3小时内加。最优选地在采集后30至60 分钟内加化合物。在加化合物到全血样品和处理样品之间有孵育期。孵育优选地在采集血样后4小 时内开始。全血样品优选地和目标化合物孵育至少30分钟。更优选地，孵育期至少为1小 时，甚至更优选的是将全血样品和目标化合物孵育至少2小时。优选地，全血样品与目标化合物孵育不超过48小时，更优选地，不超过M小时。优选的孵育期是30分钟至M小时。 进一步优选的孵育期是2小时至M小时。更优选地，孵育期是30分钟至4小时。孵育在本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于评价目标化合物的免疫原性的体外方法，包括以下步骤： ａ）提供全血样品，其中所述血液暴露于所述化合物， ｂ）测量所述样品中五聚环蛋白－３的水平，和 ｃ）将五聚环蛋白－３的测量水平与对照进行比较。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：H·克劳勃绍佛，
申请(专利权)人：弗·哈夫曼拉罗切有限公司，
类型：发明
国别省市：CH
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