一种新的多肽——人alpha-连环蛋白相关蛋白9和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人ａｌｐｈａ－连环蛋白相关蛋白９，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如各种肿瘤，胚胎发育紊乱症，炎症，免疫性疾病，血液病，ＨＩＶ感染等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人ａｌｐｈａ－连环蛋白相关蛋白９的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——人alpha-连环蛋白相关蛋白9，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。癌症的侵袭与转移是涉及细胞粘附特征中变化的一种复杂过程，它使得转化的细胞通过胞外基质(ECM)侵入并迁移，从而获得无贴壁依赖性生长特征(Liotta,L.A.,et al.,Cell 64:327-336(1991))。其中有些变化发生于粘着斑，后者是含有细胞膜相关的，细胞骨架及胞内信号分子的细胞/ECM接触点。钙粘蛋白是跨膜的细胞与细胞间的粘附受体，它对于脊椎动物的形态发生是至关重要的。它们与皮层肌动蛋白维管束及在细胞与细胞边界上的其他细胞骨架蛋白协同定位，并由这些胞质蛋白调控作用。这类蛋白包括属于粘着斑蛋白家族的连环蛋白，它直接与钙粘蛋白的胞质域连接。连环蛋白结合位点缺失的钙粘蛋白无法作为细胞与细胞粘附分子作用，尽管这些缺失的钙粘蛋白能在细胞表面表达。因而，连环蛋白在钙粘蛋白的功能中起到关键性作用。连环蛋白根据其电泳迁移率可分为alpha,beta，以及gamma三类。Alpha-连环蛋白与E-钙粘蛋白有关。该蛋白还与钙粘蛋白家族的其他成员相互作用，例如N-钙粘蛋白及P-钙粘蛋白。Alpha连环蛋白在各种表达不同钙粘蛋白的胚胎组织中表达。在这些组织中，胚胎脑中的alpha-连环蛋白表达相对较低。alpha-连环蛋白的序列与粘着斑蛋白五个区域中的三个显著相似含有踝蛋白(膜下的一种细胞骨架蛋白)结合位点域，肌动蛋白结合域，以及粘着斑蛋白自我结合域。现有研究发现一种新的与alpha-连环蛋白相关的蛋白，它们在序列上有80％的同一性，新蛋白也与细胞骨架相互作用。与alpha-连环蛋白不同的是，该蛋白有48个残基的插入序列，与组织特异性交替剪切外显子有关，这一插入序列与Ⅰ型神经纤维瘤基因产物的片断相似，参与类似的细胞骨架作用。这种alpha-连环蛋白相关蛋白是粘着斑家族的新成员。含有alpha-连环蛋白相关蛋白的多肽及其激动剂，抑制剂，拮抗剂可被用于注射治疗由细胞与细胞粘附过程介导的疾病，例如原发性癌症，转移性癌症，自身免疫病，感染，皮肤疾病或是动脉粥样硬化还可治疗神经纤维瘤等疾病。通过基因芯片的分析发现，在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株、砷刺激6小时的L02细胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小肠、胎大肠、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎肾、胎脾、胎脑、胎肺以及胎心中，本专利技术的多肽的表达谱与人alpha-连环蛋白相关蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为人alpha-连环蛋白相关蛋白9。由于如上所述人alpha-连环蛋白相关蛋白9蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人alpha-连环蛋白相关蛋白9蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人alpha-连环蛋白相关蛋白9蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人alpha-连环蛋白相关蛋白9以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人alpha-连环蛋白相关蛋白9的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人alpha-连环蛋白相关蛋白9的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人alpha-连环蛋白相关蛋白9的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人alpha-连环蛋白相关蛋白9的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——人alpha-连环蛋白相关蛋白9的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人alpha-连环蛋白相关蛋白9异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO:1中344-598位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-1323位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人alpha-连环蛋白相关蛋白9蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人alpha-连环蛋白相关蛋白9蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗各种肿瘤，胚胎发育紊乱症，炎症，免疫性疾病，血液病，HIV感染或其它由于人alpha-连环蛋白相关蛋白9表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。“替换”是指由不同的氨基酸或核苷酸替换一个或多个氨基酸或核苷本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人ａｌｐｈａ－连环蛋白相关蛋白９，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]