用于多肽生产的细胞培养组合物和方法技术

本发明专利技术提供细胞培养基，例如化学确定的细胞培养基，还提供使用该培养基生长细胞(即，培养细胞)和生产多肽(例如抗体)的方法。本发明专利技术还提供含有通过这些方法产生的多肽的组合物。

【技术实现步骤摘要】
用于多肽生产的细胞培养组合物和方法本申请为2013年4月24日提交的，专利技术名称为“用于多肽生产的细胞培养组合物和方法”的申请号为201380032959.7的分案申请。相关专利申请的交叉引用本申请要求2012年4月24日递交的美国临时申请系列号61/637,778、2012年4月24日递交的美国临时申请系列号61/637,780、和2013年3月15日递交的美国临时申请系列号13/841,864的优先权，这些美国临时申请之每一个的内容特此完整地并入此处作为参考。
技术介绍
使用重组细胞培养物体外生产蛋白质的方法是熟知的，其用于工业规模生产基于蛋白质的药物产品。然而，对于从重组细胞培养物有效地制备蛋白质而言，仍然存在显著的挑战。例如，基于蛋白质的药物产品有某些品质属性，例如大小分布、序列完整性、和产品颜色，可能受蛋白质生产方法的影响。蛋白质药物产品的颜色是尤其令人关注的一个品质属性。此外，也必须符合对蛋白质基药物产品的可接受颜色水平的监管要求。因此，生产具有可接受的颜色(例如，以满足产品市场化的监管要求)的蛋白质产品是药物生产的一个重要方面。建立与早先临床材料的产品质量可比性也可能是关键的。最近在单克隆抗体皮下递送方面的趋势伴随着制剂中药物物质的浓度增加(例如,达到≥150mg/mL)。在这些浓度，药物产品的颜色可能更强，使得更难于生产具有可接受颜色的蛋白质基药物产品。细胞培养条件可能影响蛋白质基药物产品的品质属性。用于培养细胞的培养基对蛋白质生产可能具有尤其显著的影响。用于体外生产蛋白质的重组DNA技术在历史上使用培养在培养基中的细胞系，其中培养基中补充有变化的、化学不确定的培养基组分例如动物血清和蛋白胨。化学不确定的营养物可能导致批与批之间的变异，并且动物来源的产品可能造成不期望成分对培养基的污染。化学成分确定的细胞培养基(CDM)，其组成已知且在批次间一致，已被开发用于解决这些问题。由于与使用CDM生产蛋白质相关的各种优点，工业广泛的趋势是从含血清和含蛋白胨的方法转变为利用CDM的方法。各种CDM已经描述在专利文献中，例如美国专利号4,767,704；5,691,202；6,048,728；6,900,056；和7,601,535,以及U.S.专利申请公布号20030087372和20110039330。然而，化学不确定的培养基仍继续用于蛋白质生产中。持续需要提供改善的、成本有效的蛋白质(例如抗体)体外生产方法，其中所述蛋白质具有可接受的产品品质属性。调节一种或多种产品品质属性的细胞培养基是期望的。具有如下成分的细胞培养基，无论是化学不确定的还是化学确定的，将可以用于开发蛋白产品，例如抗体(例如用于皮下注射)，其中所述成分可以一贯地生产较低颜色强度的蛋白质产品，同时保持期望的蛋白质浓度(例如≥150mg/mL)。专利技术概述本专利技术描述可以提供具有可接受颜色的药物产品的细胞培养基、以及将该培养基用于细胞生长(即，细胞培养)和/或蛋白质生产的方法。本专利技术还提供这样的培养基，所述培养基可以提供具有可接受颜色的蛋白质基药物产品并同时保持期望的蛋白质基药物产品浓度(例如≥100mg/mL或≥150mg/mL)，该培养基可以用于蛋白质生产方法，例如用于生产皮下注射用抗体。本文描述的细胞培养基可以是化学不确定的或是CDM。本专利技术还考虑组合物，所述组合物含有本文描述的培养基和多肽(例如由宿主细胞分泌至培养基的多肽)和/或含有编码多肽的分离核酸的细胞。本专利技术提供通过本文描述的方法制备的多肽、以及含有该多肽和载体(例如可药用载体)的制剂。该多肽制剂一方面具有可接受的颜色，同时保持至少100mg/mL或150mg/mL的蛋白质基药物产品浓度。本文描述的细胞培养基一般以实现蛋白质产品品质属性例如颜色的量含有一种或多种下述成分：(a)胱氨酸或半胱氨酸；(b)维生素B2,(c)维生素B6(吡哆醇和/或吡哆醛,其可以以HCl盐的形式提供),(d)维生素B9,(e)维生素B12,(f)铁源例如硝酸铁、柠檬酸铁或硫酸亚铁和(g)氢化可的松。在一个变体方案中，细胞培养基含有成分(a),(b),(c),(d),(e),(f)和(g)中的2种或3种或4种或5种或6种或每一种。可以理解，本文提供的细胞培养基可以含有成分(a),(b),(c),(d),(e),(f)和(g)的任何组合，就如同具体且单独地列出了每一种组合一样。一方面，细胞培养基是CDM。另一方面，细胞培养基是化学不确定的。在一个特定的变体方案中，本文描述的细胞培养基包含：(a)大约300mg/L(在一些实施方案中,200mg/L)至约1200mg/L胱氨酸；(b)约0.05mg/L至约1.0mg/L维生素B2；(c)约0.05mg/L至约10.0mg/L维生素B6；(d)约0.05mg/L至约12.0mg/L维生素B9；和(e)约0.05mg/L至约2.5mg/L维生素B12，其中细胞培养基(a)可以在一个变体方案中是CDM和/或(b)可以进一步包含一种或多种下述成分:(1)铁源，例如柠檬酸铁或硫酸亚铁(其在一方面以约2μM至约80μM的浓度存在)和(2)氢化可的松(其在一方面以约0.05μM至约0.25μM的浓度存在)。在另一变体方案中，本文描述的细胞培养基包含:(a)约300mg/L(在一些实施方案中,200mg/L)至约1200mg/L胱氨酸；(b)约2μM至约80μM柠檬酸铁；和(c)约0.05μM至约0.5μM氢化可的松,其中所述细胞培养基(1)可以在一个变体方案中是CDM和/或(2)可以进一步包含一种或多种下述成分：(A)维生素B2(其在一方面以约0.05mg/L至约1.0mg/L的浓度存在)；(B)维生素B6(其在一方面以约0.05mg/L至约10.0mg/L的浓度存在)；(C)维生素B9(其在一方面以约0.05mg/L至约12.0mg/L的浓度存在)；和(D)维生素B12(其在一方面以约0.05mg/L至约2.5mg/L的浓度存在)。对于本文提供的任何培养基，在一个变体方案中，当该培养基用于生产多肽的方法中时，相比于在不同细胞培养基(例如含有不同培养基成分或以不同量含有相同培养基成分的培养基)中生产多肽时获得的电荷变体(在一方面是酸性电荷变体)，本文提供的培养基减少电荷变体(在一方面是酸性电荷变体)的存在。在本文提供的组合物和方法的一个变体方案中，电荷变体(在一方面是酸性电荷变体)构成多肽产品的不到25％或20％或18％或15％或10％。在本文提供的组合物和方法的另一变体方案中，多肽产品的至少75％或80％或85％或90％或95％或更多是主要种类的蛋白质。在一些变体方案中，主要种类的蛋白质是量上占优势的蛋白质，如通过蛋白质的氨基酸序列、二级结构和/或三级结构所鉴定的。在一些变体方案中，主要种类的蛋白质是量上占优势的蛋白质，其可以通过一种或多种翻译后修饰鉴定。在一些变体方案中，翻译后修饰是糖基化。可以理解，本文描述的多肽产品的百分数可以在纯化多肽产品之前、在纯化多肽产品之后、或在多肽纯化过程中的任何步骤进行确定。酸性变体可以通过各种方法评价，但本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.培养细胞的方法,包括步骤：使细胞与细胞培养基接触，所述细胞培养基包含:/n从大约200mg/L至大约1200mg/L胱氨酸；/n从大约0.05mg/L至大约1.0mg/L维生素B2；/n从大约0.05mg/L至大约10.0mg/L维生素B6；/n从大约0.05mg/L至大约12.0mg/L维生素B9；和/n从大约0.05mg/L至大约2.5mg/L维生素B12。/n

【技术特征摘要】
20120424 US 61/637,778;20120424 US 61/637,780;20131.培养细胞的方法,包括步骤：使细胞与细胞培养基接触，所述细胞培养基包含:
从大约200mg/L至大约1200mg/L胱氨酸；
从大约0.05mg/L至大约1.0mg/L维生素B2；
从大约0.05mg/L至大约10.0mg/L维生素B6；
从大约0.05mg/L至大约12.0mg/L维生素B9；和
从大约0.05mg/L至大约2.5mg/L维生素B12。


2.生产多肽的方法，包括步骤：在细胞培养基中培养包含编码多肽的分离核酸的细胞，其中:
(a)细胞培养基包含:
从大约200mg/L至大约1200mg/L胱氨酸；
从大约0.05mg/L至大约1.0mg/L维生素B2；
从大约0.05mg/L至大约10.0mg/L维生素B6；
从大约0.05mg/L至大约12.0mg/L维生素B9；
从大约0.05mg/L至大约2.5mg/L维生素B12；和
(b)细胞表达多肽。


3.通过权利要求2的方法产生的多肽。


4.包含权利要求3的多肽和可药用载体的药物组合物。


5.用于向细胞培养基补充化学确定的组分的试剂盒，所述试剂盒包含：
胱氨酸，其量在细胞培养基中提供从大约200mg/L至大约1200mg/L胱氨酸；
维生素B2，其量在细胞培养基中提供从大约0.05mg/L至大约1.0mg/L维生素B2；
维生素B6，其量在细胞培养基中提供从大约0.05mg/L至大约10.0mg/L维生素B6；
维生素B9，其量在细胞培养基中提供从大约0.05mg/L至大约12.0mg/L维生素B9；和
维生素B12，其量在细胞培养基中提供从大约0.05mg/L至大约2.5mg/L维生素B12。


6.细胞培养基，包含:...

【专利技术属性】
技术研发人员：S·J·迈耶，M·S·蒙，N·维贾亚桑克兰，S·瓦尔马，杨奕，B·张，S·R·阿雷瓦罗，M·加夫利特泽克，V·卡尔瓦拉尔，
申请(专利权)人：弗·哈夫曼拉罗切有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH