本发明专利技术提供一种使用多个拟化合物，并且不需要制作校准曲线就能够准确校正的技术。此外，还提供一种对于多成分的测定对象物质混在一起的样品，不使用各自的稳定同位素标记物质作为内部标准物质也能够校正的技术。一种分析装置，其具有包含固相提取机构的前处理装置，以及在将用该前处理装置前处理后的样品离子化后进行质量分析的质量分析装置，并且该分析装置还具有存储前述样品中阻碍离子化的物质的浓度、测定对象物质和内部标准物质的信号强度依存性、以及回收率相关数据的存储部，和基于前述存储部中存储的前述数据对前述样品以及前述内部标准物质的测定结果进行校正的校正部。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种利用质量分析来分析血液等生物体样品的分析装置，并特别涉及一种具有进行固相提取等前处理的前处理装置的分析装置。
技术介绍
在临床检查中普及的检查方法之一是免疫法。免疫法，应用可特异性识别样品中测定对象成分的抗体(抗原)，例如，使用抗体(第一抗体)捕捉液体中的测定对象成分， 然后利用选择性捕捉该第一抗体的第二抗体进行检测。此时的检测，为了实现高感度化，对第二抗体添加标记物。标记物，例如有时为荧光物质，有时为酶化学发光所需的物质等。由于免疫法是能够简便地以高感度进行检测的技术，因此适合于检测物中微量成分的定量测定。另一方面，在免疫法中，交叉反应性很成问题。交叉反应性是第一抗体不仅捕捉了原本所要识别的测定对象成分，而且还捕捉了例如测定对象成分代谢物这种具有类似结构的分子的现象。这种情况意味着定量结果高于真实值，无法准确地定量测定对象成分。特别是在低分子化合物时，存在有交叉反应性显著增加的倾向，其原因之一是由于在制作抗体时， 需要通过对测定对象成分添加载体蛋白质而使其高分子化，因此只能在该添加位置以外的部位上可以形成表位，从而导致无法根据位置来识别与代谢物的结构差异。为了抑制该交叉反应，要求制作一种可以识别各种类似结构分子差异的第一抗体，然而制作是困难的，同时还需要耗费成本和人力，因此效率不高。相对于免疫法，质量分析法是基于测定对象成分的质量来进行测定的，因此它是一种能够识别例如代谢物等类似结构分子的测定技术。特别是MS/MS分析和MSn分析方法， 是通过将测定对象成分进行片段信号化，从而能够对类似结构成分彼此进行高精度识别的技术。这种质量分析法与免疫法相比，其选择性和准确性优异，因此将其应用于临床的趋势不断扩大。例如，在专利文献1中，以滤纸血为检测物，通过液/液提取来提取测定对象成分， 然后用质谱仪测定，由此定量丙氨酸或缬氨酸的氨基酸或酰基肉碱类，进行检查生物体内对象物质的代谢反应程度的代谢异常筛选。MS方式是使用选择性高的三重四极杆质谱仪的 MRM(Multiple Reaction Monitoring，多反应监测)方式。MRM是在第一段的四重极中仅通过前体信号，并使该信号在接下来的碰撞室中分裂，然后在第二段的四重极中仅对生成的化合物监控特异性产品信号的方法。该方法能够由化合物的特异性质量信息进行鉴定。此外，利用该质量信息，还能够通过质量数从实际试料的混杂成分中分离测定对象成分。定量方法，如以往所述，首先以几种浓度分析标准物质。然后，相对于来自该标准物质的m/z (质量/电荷)的信号，取得信号强度的时间变化(质量色谱图)，并求出质量色谱图的峰面积。 由该面积与标准物质浓度的关系，制作校准曲线。接着，分析浓度不明确的同一物质，求出质量色谱图的峰面积。然后，基于制作出的校准曲线，确定对应于质量色谱图的峰面积的物质浓度。测定整体的校正使用内部标准物质，内部标准物质对于每种测定对象成分采用稳定同位素标记物质。该内部标准物质，添加至对滤纸血进行液/液提取时的溶出溶液中。在非专利文献1中，向试样检测物中添加有机溶剂，进行蛋白质沉淀后，一边使用液相色谱 /质量分析装置(LC/MQ进行分离，一边将其导入质谱仪，同时检测在生物体中仅以低浓度含有的雌二醇和睾酮等12种激素类。内部标准物质使用每个测定对象成分的稳定同位素标记物质。该内部标准物质，添加在进行蛋白质沉淀时的缓冲溶液中。在专利文献2中，用 96孔的固相提取板处理血清或尿等生物体试料，并用质量分析仪进行测定，由此对氨基酸、 肉碱类、糖和免疫抑制剂等进行定量。内部标准物质，除了稳定同位素标记物质以外，还使用化学结构相似的拟化合物。该内部标准物质，添加在进行蛋白质沉淀时的缓冲溶液中。但是，质量分析法进行临床应用时，质量分析法所固有的离子抑制很成问题。质量分析法，需要将成分信号化，由于该信号化效率阻碍(离子抑制)控制定量的精度，因此通常使用可以产生相同离子抑制的稳定同位素标记物质。此外，质量分析法，能够对每个测定对象成分以几ms的间隔进行测定，因此其能够以高产率进行多成分的定量，但是其需要与该成分数相同数量的稳定同位素标记物质。然而，稳定同位素标记物质的合成不仅要花费成本，而且对于无法合成的成分来说，存在有无法制作稳定同位素标记物质的问题。如专利文献2所述，虽然有时也使用拟化合物作为内部标准物质，但这时，基质成分(杂质)的影响，在测定对象物质和内部标准物质间是不等价的，即使进行校正，也无法保证获得准确的数值。因此，在使用拟化合物作为内部标准物质时，为了分离基质成分和测定对象物质，进行例如LC或固相提取处理的前处理，以减轻基质的影响。此外，在非专利文献2中，通过柱后灌流向质谱仪中导入基质，同时通过灌流由其它通路输送测定对象成分，从而事先取得在哪一时间段基质效果大的数据，进而找出在该时间段不将测定对象成分导入质量分析的 LC条件。但是，这些方法，增加了时间、成本，并且操作也很复杂。此外，在将质量分析法应用于临床时，每个设备以及使用者的数据不能有变动。换句话说，提供一种使用尽可能简便的良好的质谱仪是很重要的。也就是说，希望一种在前处理工序、MS测定以及数据分析的各工序中，尽可能地排除手工操作，而进行全自动检查的质谱仪。这时，和离子抑制一样，前处理工序的稳定性以及回收率也对数据精度产生较大的影响。专利文献1 :US2006/0008922A1专利文献2 :US2007/0004044A1非专禾Ij文 ^ 1 :T. Guo, R. L. Taylor, R. J. Singh, S. J. Soldin, Simultaneous determination of 12 steroids by isotope dilution liquid chromatography-photospray ionization tandem mass spectrometry,Clinica. Chemica. Acta.(临床化学学报)，372，76-82，2006非专利文献 2 :Τ· Μ· Annesley, Ion Suppression in Mass Spectrometry, Clin. Chem. 49 :7，1041-1044，200
技术实现思路
专利技术要解决的课题在使用这种质谱仪进行定量分析时，使用内部标准法。内部标准物质，理想的是使用物性与测定对象物质相同的稳定同位素物质进行校正。在和分光光度计或UV检测器不同，使用质谱仪时，由基质中的杂质引起的离子抑制显著地对数据精度产生影响。因此，在没有使用稳定同位素物质，而是使用拟化合物作为内部标准物质时，用LC或GC等进行充分分离、精制，以使不会因基质中的杂质而产生离子抑制。此外，由于杂质的影响，除了离子抑制，试料的前处理也对数据精度产生影响，因此数据重现性比其它测定体系低。所以，在使用质谱仪进行定量分析时，以往的方法是对每次测定制作校准曲线，并使用内部标准法算出试料中的测定对象物质的浓度。因此，当测定对象物质使用稳定同位素物质时，成本方面存在问题。另一方面，当测定对象物质使用拟化合物时，需要耗费人力和时间进行分离、 精制，并且在分离溶剂的成本和产率方面存在问题。此外，由于每次测定都需要制作校准曲线，因此在本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种分析装置，其特征在于，具有包含固相提取机构的前处理装置，以及在将用该前处理装置前处理后的样品离子化后进行质量分析的质量分析装置，并且该分析装置还具有存储前述样品中阻碍离子化的物质的浓度、和测定对象物质和内部标准物质的信号强度依存性、及回收率的相关数据的存储部，并且该分析装置还具有基于前述存储部中存储的前述数据对前述样品以及前述内部标准物质的测定结果进行校正的校正部。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：野上真，
申请(专利权)人：株式会社日立高新技术，
类型：发明
国别省市：JP
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