抗‑Siglec‑15抗体制造技术

公开了用于治疗和/或预防骨代谢异常的药物组合物，其靶向由在破骨细胞中强烈表达的基因编码的蛋白。具体地，公开了含有抗体等的药物组合物，所述抗体特异性地识别人Siglec‑15且具有抑制破骨细胞形成的活性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗-Siglec-15抗体
本专利技术涉及可用作骨代谢异常的治疗剂和/或预防剂的物质以及治疗和/或预防骨代谢异常的方法。
技术介绍
已知骨骼为动态性器官，其通过重复形成和吸收，进行持续重建，从而改变其本身的形态并维持血钙水平。健康的骨骼维持由成骨细胞进行的骨形成和由破骨细胞进行的骨吸收之间的平衡关系，从而骨量保持恒定。然而，当骨形成和骨吸收之间的平衡被破坏时，则产生诸如骨质疏松症等骨代谢异常(WO07/093042和EndocrinologicalReview,(1992)13,第66-80页)。作为调节骨代谢的因子，报道了很多全身性激素以及局部性细胞因子，且这些因子互相合作以形成和维持骨(WO07/093042和EndocrinologicalReview,(1996)17,第308-332页)。作为因老龄化导致的骨组织的变化，骨质疏松症的发病众所周知，但是其发病机理包含各种因素，如性激素的分泌降低以及该激素受体异常、骨局部细胞因子表达变动、老化基因的表达、破骨细胞或成骨细胞的分化衰退或功能不全，因此，难以将它理解为单纯的年龄相关的生理现象。原发性骨质疏松症主要分为由雌激素分泌降低导致的绝经后骨质疏松症和由老龄化导致的老年性骨质疏松症，为了阐明其发病机理和开发针对它的治疗剂，在骨形成和骨吸收的调节机制方面的基础研究的进展很重要。破骨细胞是源自造血干细胞的多核细胞，通过在破骨细胞粘附的骨表面上释放氯离子和氢离子，破骨细胞使骨表面与破骨细胞之间的间隙成为酸性，并且还分泌作为酸性蛋白酶的组织蛋白酶K等(AmericanJournalofPhysiology,(1991)260,C1315-C1324)。这引发磷酸钙的降解、酸性蛋白酶的活化以及骨基质蛋白的降解，导致骨吸收。业已发现破骨细胞前体细胞通过存在于骨表面上的成骨细胞/基质细胞的细胞膜上表达的RNAKL（NF-κB配体的受体活化因子）的刺激，分化为破骨细胞（ProceedingsoftheNationalAcademyofScienceoftheUnitedStatesofAmerica,（1998）95,第3597-3602页,和Cell,（1998）93,第165-176页）。已发现RNAKL是成骨细胞/基质细胞所产生的膜蛋白，其表达受骨吸收因子的调节，RNAKL诱导破骨细胞前体细胞向成熟的多核破骨细胞的分化等（ProceedingsoftheNationalAcademyofScienceoftheUnitedStatesofAmerica,（1998）95,第3597-3602页,和JournalofBoneandMineralResearch,（1998）23,S222）。此外，已经发现敲除RNAKL的小鼠发生（develop）骨硬化病样疾病，因此，已经证明RNAKL是生理性的破骨细胞分化诱导因子（Nature,（1999）397,第315-323页）。使用二膦酸盐、活性维生素D3、降钙素及其衍生物、激素例如雌二醇、SERM（选择性雌激素受体调节剂）、依普黄酮、维生素K2（四烯甲萘醌）、PTH和钙制剂等作为治疗骨代谢疾病或缩短治疗时间的药物制剂。但是，这些药物不会总是表现出令人满意的治疗效果，已经需要开发具有更有效的治疗效果的药物。免疫细胞的细胞膜上被多种聚糖（诸如唾液酸化的聚糖）高度覆盖，所述聚糖被各种聚糖结合蛋白识别。结合唾液酸的免疫球蛋白样凝集素（在下文中称为“Siglecs”）为识别并结合唾液酸化的聚糖的I型膜蛋白家族。许多siglecs在免疫细胞的细胞膜上表达，并识别类似地存在于免疫细胞的细胞膜上的唾液酸，调节细胞相互作用或细胞功能，并被认为参与免疫应答（NatureReviewsImmunology,（2007）7,第255-266页）。然而，也有很多尚未阐明其生理功能的siglec分子。最近报道Siglec-15（结合唾液酸的免疫球蛋白样凝集素15）为属于Siglecs的分子(参见，例如，非专利文件10)，其与被称为CD33L3（CD33分子样3）的分子相同。该分子从鱼类到人类是进化高度保守的，业已发现在人脾和淋巴结的树突细胞和/或巨噬细胞中强表达。此外，使用唾液酸探针的结合测试的结果是：已经发现人Siglec-15结合Neu5Acα2-6GalNAc，小鼠Siglec-15进一步结合Neu5Acα2-3Galβ1-4Glc等(参见，例如，Glycobiology,(2007)17,第838-846页)。直至最近，还未揭示Siglec-15的生理作用，但业已报道，随着破骨细胞的分化和成熟，Siglec-15的表达增加，通过用RNA干扰使Siglec-15的表达下降，可以抑制破骨细胞的分化(参见，例如，WO07/093042)。此外，在WO09/48072(2009年4月16日公开)中已经首次披露了抗-Siglec-15抗体对破骨细胞分化的作用，但是，尚未阐明可以施用给人类的抗体序列。
技术实现思路
专利技术所要解决的问题本专利技术的目的在于提供：在各种形式的骨代谢异常（可见为骨质疏松症、类风湿性关节炎、癌的骨转移等）中特异表达的基因；抑制破骨细胞的分化和成熟及其活性的物质；以及骨代谢异常的治疗剂和/或预防剂。解决问题的手段为了找到对骨代谢异常具有治疗和/或预防效果的物质，本专利技术人以阐明破骨细胞的分化、成熟和活化机制为目标进行了研究。结果本专利技术人发现随着破骨细胞的分化和成熟，Siglec-15基因的表达增加，还发现特异性地结合Siglec-15的抗体可以抑制破骨细胞的分化。此外，专利技术人人源化了得到的大鼠抗-小鼠Siglec-15抗体从而完成了本专利技术。即，本专利技术包括以下专利技术。(1)一种抗体或所述抗体的功能片段，所述抗体结合包含由SEQIDNO:2表示的氨基酸序列的氨基酸残基39-165的多肽，并抑制破骨细胞形成和/或破骨性骨吸收。(2)根据(1)所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于：重链序列含有具有CDRH1、CDRH2和CDRH3的可变区，且所述CDRH1包含由SEQIDNO:44表示的氨基酸序列，所述CDRH2包含由SEQIDNO:45和SEQIDNO:97表示的任一个氨基酸序列，所述CDRH3包含由SEQIDNO:46表示的氨基酸序列；且轻链序列含有具有CDRL1、CDRL2和CDRL3的可变区，且所述CDRL1包含由SEQIDNO:47表示的氨基酸序列，所述CDRL2包含由SEQIDNO:48表示的氨基酸序列，且所述CDRL3包含由SEQIDNO:49表示的氨基酸序列。(3)根据(2)所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有：包含由SEQIDNO:41表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140的重链可变区序列和包含由SEQIDNO:43表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-132的轻链可变区序列。(4)根据(1)至(3)中任一项所述的抗体功能片段，其选自：Fab、F(ab’)2、Fab’和Fv。(5)根据(1)至(3)中任一项所述的抗体，其特征在于是scFv。(6)根据(1)至(4)中任一项所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于所述抗体是嵌合抗体。(7)根据(6)所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种抗体或所述抗体的功能片段，所述抗体结合包含由ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：　２表示的氨基酸序列的氨基酸残基３９－１６５的多肽，并抑制破骨细胞形成和／或破骨性骨吸收。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】JP2009-0946132009年4月9日1.一种抗体或所述抗体的抗原结合片段，所述抗体结合由SEQIDNO:2表示的氨基酸序列的氨基酸残基39-165组成的多肽，并抑制破骨细胞形成和/或破骨性骨吸收，所述抗体的抗原结合片段选自Fab、F(ab’)2、Fab’和Fv，其特征在于含有：由SEQIDNO:41表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140组成的重链可变区序列和由SEQIDNO:43表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-132组成的轻链可变区序列。2.根据权利要求1所述的抗体或所述抗体的抗原结合片段，其特征在于它是scFv。3.根据权利要求1所述的抗体或所述抗体的抗原结合片段，其特征在于所述抗体是嵌合抗体。4.根据权利要求3所述的抗体或所述抗体的抗原结合片段，其特征在于由重链序列和轻链序列组成，所述重链序列由SEQIDNO:41表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-470组成，且所述轻链序列由SEQIDNO:43表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-237组成。5.根据权利要求1所述的抗体或所述抗体的抗原结合片段，其特征在于所述抗体是人源化的。6.根据权利要求4所述的抗体或所述抗体的抗原结合片段，其中所述重链具有人免疫球蛋白G2重链的恒定区，且所述轻链具有人免疫球蛋白κ轻链的恒定区。7.一种抑制破骨细胞形成和/或破骨性骨吸收的抗体或所述抗体的抗原结合片段，其中所述抗体含有：(a)选自下述氨基酸序列的重链可变区：a1)一种氨基酸序列，其由SEQIDNO:51表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140组成；a2)一种氨基酸序列，其由SEQIDNO:53表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140组成；a3)一种氨基酸序列，其由SEQIDNO:55表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140组成；a4)一种氨基酸序列，其由SEQIDNO:57表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140组成；a5)一种氨基酸序列，其由SEQIDNO:59表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140组成；a6)一种氨基酸序列，其由SEQIDNO:99表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140组成；a7)一种氨基酸序列，其由SEQIDNO:101表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140组成；a8)一种氨基酸序列，其与选自a1)至a7)的任一个氨基酸序列具有至少95%同源性；和a9)一种氨基酸序列，其包含在选自a1)至a7)的任一个氨基酸序列中的一个氨基酸残基的置换、删除或添加；和(b)选自下述氨基酸序列的轻链可变区：b1)一种氨基酸序列，其由SEQIDNO:61表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133组成；b2)一种氨基酸序列，其由SEQIDNO:63表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133组成；b3)一种氨基酸序列，其由SEQIDNO:65表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133组成；b4)一种氨基酸序列，其由SEQIDNO:67表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-132组成；b5)一种氨基酸序列，其由SEQIDNO:69表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133组成；b6)一种氨基酸序列，其由SEQIDNO:71表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133组成；b7)一种氨基酸序列，其由SEQIDNO:103表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133组成；b8)一种氨基酸序列，其由SEQIDNO:105表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133组成；b9)一种氨基酸序列，其与选自b1)至b8)的任一个氨基酸序列具有至少95%同源性；和b10)一种氨基酸序列，其包含在选自b1)至b8)的任一个氨基酸序列中的一个氨基酸残基的置换、删除或添加，其中所述重链可变区具有CDRH1、CDRH2和CDRH3，所述CDRH1由SEQIDNO:44表示的氨基酸序列组成，所述CDRH2由SEQIDNO:45和SEQIDNO:97表示的任一个氨基酸序列组成，且所述CDRH3由SEQIDNO:46表示的氨基酸序列组成；且所述轻链可变区具有CDRL1、CDRL2和CDRL3，所述CDRL1由SEQIDNO:47表示的氨基酸序列组成，所述CDRL2由SEQIDNO:48表示的氨基酸序列组成，且所述CDRL3由SEQIDNO:49表示的氨基酸序列组成；且其中所述抗原结合片段选自Fab、F(ab’)2、Fab’和Fv。8.根据权利要求7所述的抗体或所述抗体的抗原结合片段，其特征在于含有：(a)与选自权利要求7的a1)至a7)的任一个氨基酸序列具有至少99%同源性的氨基酸序列；和(b)与选自权利要求7的b1)至b8)的任一个氨基酸序列具有至少99%同源性的氨基酸序列。9.根据权利要求7所述的抗体或所述抗体的抗原结合片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列含有重链可变区，所述重链可变区由这样的氨基酸序列组成，其由SEQIDNO:51表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140组成，且所述轻链序列含有轻链可变区，所述轻链可变区由这样的氨基酸序列组成，其由SEQIDNO:61表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133组成。10.根据权利要求7所述的抗体或所述抗体的抗原结合片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列含有重链可变区，所述重链可变区由这样的氨基酸序列组成，其由SEQIDNO:53表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140组成，且所述轻链序列含有轻链可变区，所述轻链可变区由这样的氨基酸序列组成，其由SEQIDNO:63表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133组成。11.根据权利要求7所述的抗体或所述抗体的抗原结合片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列含有重链可变区，所述重链可变区由这样的氨基酸序列组成，其由SEQIDNO:55表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140组成，且所述轻链序列含有轻链可变区，所述轻链可变区由这样的氨基酸序列组成，其由SEQIDNO:65表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133组成。12.根据权利要求7所述的抗体或所述抗体的抗原结合片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列含有重链可变区，所述重链可变区由这样的氨基酸序列组成，其由SEQIDNO:55表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140组成，且所述轻链序列含有轻链可变区，所述轻链可变区由这样的氨基酸序列组成，其由SEQIDNO:67表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-132组成。13.根据权利要求7所述的抗体或所述抗体的抗原结合片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列含有重链可变区，所述重链可变区由这样的氨基酸序列组成，其由SEQIDNO:57表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140组成，且所述轻链序列含有轻链可变区，所述轻链可变区由这样的氨基酸序列组成，其由SEQIDNO:69表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133组成。14.根据权利要求7所述的抗体或所述抗体的抗原结合片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列含有重链可变区，所述重链可变区由这样的氨基酸序列组成，其由SEQIDNO:59表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140组成，且所述轻链序列含有轻链可变区，所述轻链可变区由这样的氨基酸序列组成，其由SEQIDNO:71表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133组成。15.根据权利要求7所述的抗体或所述抗体的抗原结合片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列含有重链可变区，所述重链可变区由这样的氨基酸序列组成，其由SEQIDNO:99表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140组成，且所述轻链序列含有轻链可变区，所述轻链可变区由这样的氨基酸序列组成，其由SEQIDNO:69表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133组成。16.根据权利要求7所述的抗体或所述抗体的抗原结合片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列含有重链可变区，所述重链可变区由这样的氨基酸序列组成，其由SEQIDNO:101表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140组成，且所述轻链序列含有轻链可变区，所述轻链可变区由这样的氨基酸序列组成，其由SEQIDNO:69表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133组成。17.根据权利要求7所述的抗体或所述抗体的抗原结合片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列含有重链可变区，所述重链可变区由这样的氨基酸序列组成，其由SEQIDNO:99表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140组成，且所述轻链序列含有轻链可变区，所述轻链可变区由这样的氨基酸序列组成，其由SEQIDNO:103表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133组成。18.根据权利要求7所述的抗体或所述抗体的抗原结合片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列含有重链可变区，所述重链可变区由这样的氨基酸序列组成，其由SEQIDNO:99表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140组成，且所述轻链序列含有轻链可变区，所述轻链可变区由这样的氨基酸序列组成，其由SEQIDNO:105表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133组成。19.根据权利要求7所述的抗体或所述抗体的抗原结合片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列由SEQIDNO:51表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-470组成，且所述轻链序列由SEQIDNO:61表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-238组成。20.根据权利要求7所述的抗体或所述抗体的抗原结合片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列由SEQIDNO:53表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-470组成，且所述轻链序列由SEQIDNO:63表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-238组成。21.根据权利要求7所述的抗体或所述抗体的抗原结合片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列由SEQIDNO:55表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-470组成，且所述轻链序列由SEQIDNO:65表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-238组成。22.根据权利要求7所述的抗体或所述抗体的抗原结合片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列由SEQIDNO:55表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-470组成，且所述轻链序列由SEQIDNO:67表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-237组成。23.根据权利要求7所述的抗体或所述抗体的抗原结合片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列由SEQIDNO:57表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-470组成，且所述轻链序列由SEQIDNO:69表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-238组成。24.根据权利要求7所述的抗体或所述抗体的抗原结合片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列由SEQIDNO:59表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-470组成，且所述轻链序列由SEQIDNO:71表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-238组成。25.根据权利要求7所述的抗体或所述抗体的抗原结合片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列由SEQIDNO:99表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-466组成，且所述轻链序列由SEQIDNO:69表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-238组成。26.根据权利要求7所述的抗体或所述抗体的抗原结合片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列由SEQIDNO:101表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-466组成，且所述轻链序列由SEQIDNO:69表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-238组成。27.根据权利要求7所述的抗体或所述抗体的抗原结合片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列由SEQIDNO:99表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-466组成，且所述轻链序列由SEQIDNO:103表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-238组成。28.根据权利要求7所述的抗体或所述抗体的抗原结合片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列由SEQIDNO:99表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-466组成，且所述轻链序列由SEQIDNO:105表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-238组成。29.一种药物组合物，其特征在于包含至少一种根据权利要求1-28所述的抗体或所述抗体的抗原结合片段。30.根据权利要求29所述的药物组合物，其特征在于是骨代谢异常的治疗剂和/或预防剂。31.一种包含至少一种根据权利要求1-28所述的抗体或所述抗体的抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：昼间由晴，
申请(专利权)人：第一三共株式会社，
类型：发明
国别省市：JP