本发明专利技术公开了一株乙硫氨酸抗性产朊假丝酵母及其应用，所述产朊假丝酵母(Candida??utilis)SUGS-01于2009年12月9日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏号为CCTCC??M??209298。应用上述产朊假丝酵母(Candidautilis)SUGS-01联产发酵生产SAM和GSH，具体包括以下步骤：以产朊假丝酵母(Candida??utilis)SUGS-01为出发菌株，经斜面培养和种子培养后，发酵至少24小时；每1升所述发酵培养基含有：蔗糖35～36g，硫酸铵10～12g，磷酸二氢钾12～13g，硫酸镁0.05～0.06g，L-蛋氨酸4～5g；所述发酵培养基pH??5.5～6.0。由于本发明专利技术采用了紫外诱变和γ-射线诱变联合作用，得到了能够联产SAM和GSH的产朊假丝酵母突变株，所得产朊假丝酵母作为生产菌株，具有生长营养谱宽泛，发酵过程中乙醇产生量少，合成蛋白能力强等优点，具有良好的工业化应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物发酵技术，具体涉及一株乙硫氨酸抗性产朊假丝酵母及其在 S-腺苷蛋氨酸和谷胱甘肽联产发酵中的应用。
技术介绍
S-腺苷蛋氨酸(SAM)是一种生物细胞内广泛存在的重要小分子物质，由Cantoni 于1953年发现。研究发现SAM作为基团提供者和酶的诱导剂参与许多关键的生化反应，如脂类、蛋白质、核酸的甲基化，转硫反应及聚胺的合成等。SAM在细胞内的生理功能涉及甲基反应中的甲基供体；生成甲硫腺苷和高丝氨酸；是tRNA的氨基丁基的供体；维生素H的合成中氨基酸链的供体；腺苷部分的供体；溶细胞素-2，3-氨基变构酶、苏氨酸合成酶、丙酮酸甲酸裂解酶、N5-甲基四氢叶酸-高半胱氨酸甲基转移酶的抑制剂；SAM也是细菌和白细胞趋药性所必须的物质，在原核和真核生物的DNA限制和修饰体系中起着重要作用；它的脱羧产物还是合成聚胺的丙基供体。在医药方面，SAM可以控制衰老和一些疾病如癌症的恶化，对荷尔蒙、神经递质、DNA、RNA和蛋白质的合成和代谢以及保持质膜的流动性等具有重要作用，是合成细胞内另一重要小分子化合物谷胱甘肽的前体。尤为重要的是，由于SAM 在治疗抑郁症方面显现了卓越的功效，其自1999年作为保健食品在美国大规模上市以来， 销量稳居保健品类销量的首位。此外，SAM还被广泛地用作关节炎、各类肝病的临床用药， 并可显著改善帕金森病的失运和僵硬不调，改善血液流动，对动脉硬化和脑血栓具有疗效; 还能够诱导入睡、改善睡眠，促进皮肤再生延缓皮肤衰老等。SAM的制备方法主要有化学合成法、发酵法、酶促转化法3种。发酵法是在含有碳、 氮源的基本培养基上添加前体L-蛋氨酸，通过培养微生物细胞可以获得大量的SAM。这是目前工业生产SAM的主要途径。其中用来发酵的微生物可以由筛选或重组构建的方法得到，这在国内外有很多文章和专利的记载。Siiozaki通过筛选300多株不同的菌株，分离得到一株&iccharomyces sake k_6菌，该菌在IOL发酵罐中培养7天后的SAM产量达10. 8g/ L (参见Shiozaki Set al. , Agric Biol Chem, 1984,48 (9) :2293-2300 ；Shiozaki S et al.，Jouranl ofBiotechnology, 1986，4 :345-354)。海南国栋药物研究所有限公司构建了一株含有两个表达载体的SAM高产菌株，1000L发酵罐中S-腺苷蛋氨酸产量达14-16g/L发酵液(参见公开号为CN18M768A的中国专利技术申请公开说明书)。酶促转化法是利用哺乳动物或微生物(酵母、大肠杆菌)来源的SAM合成酶催化腺苷三磷酸酶(ATP) 和L-蛋氨酸(L-Met)来合成SAM。由于其反应产物纯度高、分离提纯容易、反应周期短、无污染等特点越来越受到研究者的关注。但是添加外源ATP代价高昂以及生物细胞中SAM合成酶含量较低、分离纯化困难等原因，成为酶法大规模生产SAM的限制因素。谷胱甘肽(GSH)作为一种重要的生理活性物质，在抗辐射、肿瘤、癌症、氧中毒、衰老和协调内分泌的治疗中效果明显且无副作用。临床上主要用于(1)保护蛋白质或酶的巯基免遭氧化性破坏，防止红细胞溶血，促进高铁血红蛋白的还原，抑制白内障以及角膜与视网膜疾病的发展；( 清除体内自由基，恢复细胞功能，防止机体衰老，防止肿瘤或动脉硬化的产生；C3)抗辐射，对放射线照射、放射性药物及抗肿瘤药物所引起的白血球减少、 放射线引起的骨髓组织炎与口腔粘膜炎均有保护或减轻症状作用；(4)解除丙烯腈、氟化物、一氧化碳、重金属、农药、药物和有机溶剂造成的中毒症状；( 维持并促进肝细胞正常功能，减轻脂肪肝与感染性肝炎症状；(6)纠正乙酰胆碱及脂碱酯酶之间的不平衡，解除过敏症状；(7)促进胆酸代谢，促进消化道对脂溶性维生素的吸收，从而促进肝脏合成凝血因子，减轻出血倾向；(8)作为多种酶的辅酶和辅基，参与TCA循环和糖代谢；(9)通过Y-谷氨酰循环参与众多氨基酸向胞内转运，促进蛋白质的合成。此外，由于GSH能够提高体内血红蛋白的含量，并保护红细胞免遭氧化性破坏，因此，GSH在体育领域内，无论是在运动性贫血机理的探讨，还是训练过度的预防、运动性疲劳机理的探讨，以及运动营养的补充方面都倍受人们的关注。自1938年发表的用酵母制造GSH的最早专利以来，国外学者围绕GSH的生产开展了大量的研究，概括来说，谷胱甘肽的生产方法主要有溶剂萃取法、化学合成法、酶转化法和发酵法。萃取法主要是通过萃取和沉淀的方法从含有GSH的动植物组织中进行GSH的分离提取，由于原料不易获得且GSH的含量极低，因此该法的实际应用价值不大。化学合成法生产GSH，即将L-谷氨酸、L-半胱氨酸和甘氨酸缩合成GSH。该法较早应用于GSH生产，但操作过程复杂、耗时且得到的GSH是左旋体和右旋体的混合物，分离十分困难，造成产品纯度不高，且生物效价很难保持一致。GSH的酶法合成是利用GSH合成酶系，在ATP的存在下将三种组成氨基酸催化形成GSH。该法首先需要获得GSH合成的相关酶系，其次需要加入价格昂贵的前体氨基酸和ATP，目前还处于实验室研究阶段。发酵法就是采用廉价的糖类原料，利用细菌或酵母体内物质的代谢途径来进行GSH生物合成的方法。综合比较，发酵法生产SAM或GSH最具有竞争力，由于微生物容易培养，因此该法将具有极大的应用潜力。但是，发酵法生产的最关键问题在于提高微生物体内的目标产物含量，通常是通过菌种选育来实现。主要有两种方法一是采用常规诱变育种选育高产菌株，二是利用遗传工程技术构建具有目的产物合成活性的基因工程菌。此外，对发酵过程进行控制和优化也可以提高目的产物的产量。近年来，对于SAM和GSH的研究也大都是围绕这一思路来展开。目前国内外的研究主要集中在SAM或GSH这样的单一目的产物的发酵法制备上， 到目前为止，还没有选育产朊假丝酵母用于SAM和GSH的联产发酵中。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一株乙硫氨酸抗性产朊假丝酵母。为达到上述目的，本专利技术具体技术方案是，一株乙硫氨酸抗性产朊假丝酵母，所述产朊假丝酵母SUGS-Ol (Candida utilis SUGS-01)于2009年12月9日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏号为CCTCC M 20拟98;保藏单位中国典型培养物保藏中心， 地址中国武汉武汉大学。上述产朊假丝酵母(Candida utilis) SUGS-Ol的筛选方法，包括以下步骤以产朊假丝酵母(Candida utilis) SZU 07-01为出发菌株，经斜面培养和种子培养，诱变和筛选得到能够联产SAM和GSH的产朊假丝酵母突变株；具体地，所述诱变和筛选过程包括以下步骤⑴紫外诱变吸取经培养20h后的种子培养液lmL，10000r/min下离心2min，弃上清，加入灭菌的生理盐水洗涤离心三次，以ImL生理盐水重新悬浮，倒入盛有9mL无菌生理盐水的培养皿 (直径9cm)中混勻，并依次稀释，得到稀释106倍的菌液，将该梯度培养皿先暂时放入恒温箱中备用；将磁力搅拌器(包括转子)放入无菌操作台，调整高度使位于最佳辐照距离处，随后打开紫外灯，照射20min后，将培养箱中存放的培养皿迅速放至磁力搅拌器上本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株乙硫氨酸抗性产朊假丝酵母，所述产朊假丝酵母ＳＵＧＳ－０１（Ｃａｎｄｉｄａ ｕｔｉｌｉｓ ＳＵＧＳ－０１）保藏于中国典型培养物保藏中心（ＣＣＴＣＣ），保藏号为ＣＣＴＣＣ Ｍ ２０９２９８。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王大慧，邵娜，卫功元，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：32
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