一种产朊假丝酵母表达载体及其构建方法技术

技术编号:4224712 阅读:257 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术公开了一种工业微生物-产朊假丝酵母的表达载体,本发明专利技术还同时提供了产朊假丝酵母表达载体的构建方法。本发明专利技术通过以pBR322载体作为基本骨架,以产朊假丝酵母基因组DNA为模板,采用定点突变法获得放线菌酮抗性基因,同样以产朊假丝酵母基因组DNA为模板,采用PCR方法获得其rDNA片段和GAP启动子-终止子片段,构建以18S rDNA介导的具有放线菌酮抗性的产朊假丝酵母整合型表达载体,用于产朊假丝酵母表达外源蛋白,广泛应用于饲料添加剂、食品工业及制药业等领域。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学领域,具体涉及产朊假丝酵母一种转化系统的建立, 用于表达外源蛋白的

技术介绍
大肠杆菌f.C0//表达系统是目前为止最为有效和方便的表达系统,但外源蛋白在Aco//中的大量表达是以不溶性的包涵体的形式存在于细胞内。£"7/ 作为表达宿主,无法进行特定的翻译后修饰,特别是对真核基因的表达,可能 导致产物失去生物活性。为了克服大肠杆菌表达系统的不足,需要发展新的真 核表达系统。酵母表达系统拥有转录后加工修饰功能,操作筒便,成本低廉, 适合于稳定表达有功能的外源蛋白质,而且可大规模发酵,是最理想的重组真 核蛋白质生产制备工具。产朊假丝酵母是一种极重要的工业微生物,常被用于生产多种有用的生物 物质,如谷胱甘肽及一些氨基酸和酶类。它和啤酒酵母、克鲁维酵母被美国食 品与药品安全管理局(Food and Drug Administration, FDA )认证为可作为食 品添加剂的酵母,能运用于食品、制药业以及畜禽的饲料中。目前使用较多的 酿酒酵母和曱醇酵母与产肽假丝酵母相比均存在着不同的缺陷,如大量表达时 酿酒酵母常常会发生质粒丢失的现象,且重组蛋白常发生超本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种产朊假丝酵母整合型表达载体,其特征在于,以pBR322为基本骨架,以放线菌酮(CYH)为抗性基因,以18S rDNA片段为介导序列,以GAP启动子-终止子为启动子-终止子,携带外源基因在产朊假丝酵母中进行表达中获得。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:王炜包慧芳崔卫东詹发强杨红兰
申请(专利权)人:新疆农业科学院微生物应用研究所
类型:发明
国别省市:65[中国|新疆]

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