一种溶菌酶的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种溶菌酶的制备方法，具体步骤为：(1)配置溶液：取100ml的水溶液，用醋酸调节其pH值为2～5；再加入碱金属氯化物，碱金属氯化物在水溶液中的质量百分数为1～6％；(2)将步骤(1)得到的溶液加热至80～100℃；(3)再加入蛋清进行搅拌，然后离心，离心速度为1～50转/min，离心时间为1～10min，得到上清液；(4)将上清液进行真空干燥或者冷冻干燥，得到溶菌酶。本发明专利技术的优点：缩短生产风期、简化工艺流程、大幅度提高生产率、降低成本，用途广泛。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及溶菌酶制备
，具体地说，是。
技术介绍
溶菌酶(lysozyme)是一种专门作用于微生物细胞壁的水解酶，又称胞壁质酶 (murami2dase)。人们对溶菌酶的研究始于上世纪初，英国细菌学家Flem2ing在发现青霉 素的前6年(1922年)发现人的唾液、眼泪中存在有溶解细菌细胞壁的酶，因其具有溶菌作 用，故命名为溶菌酶。此后人们在人和动物的多种组织、分泌物、某些植物、微生物中也发现 了溶菌酶的存在；其中鸡蛋清溶菌酶的研究和应用已相当深入和广泛。另外随着基因工程 技术的发展，通过人工合成基因，用微生物发酵生产人溶菌酶的研究也正在深入进行之中。六十年代以后，随着生物化学和技术的发展，促进了溶菌酶生产应用的研究，近年 来，溶菌酶已广泛应用于人类生产的各个领域，其中包括医药、生物和食品工业。目前，工业 生产溶菌酶，主要是从鸡蛋清中提取，另外蛋壳也可作为溶菌酶的来源。从蛋清中提取溶菌 酶的方法有直接结晶法、离子交换法和亲和层析法；用这几种方法生产的产品纯度较高，但 存在着工艺复杂，成本较高等的缺点，不能满足各个领域的需要。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供；以达到缩 短生产风期、简化工艺流程、大幅度提高生产率、降低成本的目的。本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的，其具体步骤为(1)配置溶液取IOOml的水溶液，用醋酸调节其pH值为2 5，pH值优选为3 4 ；再加入碱金属氯化物，碱金属氯化物在水溶液中的质量百分数为1 6%，碱金属氯化物 的质量百分数优选为3 4% ；所述的碱金属氯化物选自氯化钠或者氯化钾，优选为氯化钠；(2)将步骤(1)得到的溶液加热至80 100°C，溶液温度优选为85 95°C ；(3)再加入蛋清进行搅拌，然后离心，离心速度为1 50转/min，离心速度优选为 10 50转/min，离心时间为1 lOmin，离心时间优选为3 7min ；得到上清液； (4)将上清液进行真空干燥或者冷冻干燥，优选为真空干燥，得到溶菌酶。本专利技术制备的溶菌酶的应用医学上应用作为一种具有杀菌作用的天然抗感染物质。有抗菌、抗病毒、止血、消 肿止痛及加快组织恢复功能等作用；临床用于慢性鼻炎、急慢性咽喉炎、口腔溃疡、水痘、带 状疱疹和扁平疣等；也可与抗菌药物合用治疗各种细菌和病毒感染；口服和肌注均有效； 口服，3 5片/次(肠溶片含10mg)，3次/日；口含，1片/次(口含片含20mg)，4 6次 /日；外用以 2%溶液滴注、涂擦或直接喷粉；肌注，50mg IOOmg/次，1 2次/ 日；滴眼用2%溶液；副作用，偶有较轻的过敏反应；氯化溶菌酶医疗效果更广，有浓痰分散、出血抑制、组织修复、消炎镇痛、抗过滤性病毒等作用，因而用氯化溶菌酶的制药有消炎 消痔、治感冒、皮肤病及眼、鼻、喉等用药。食品保藏应用可作为防腐剂，它的主要功用是水解细菌细胞壁，在细胞内，则对 吞噬后的病原菌起破坏作用，该酶对革兰氏阳性菌中的枯草杆菌、耐辐射微球菌有分解作 用；对大肠杆菌、普通变形菌和副溶血性弧菌等革兰氏阴性菌也有一定程度溶解作用，其最 有效浓度为0. 05% ；与植酸、聚合磷酸盐、甘氨酸等配合使用，可提高其防腐效果。与现有技术相比，本专利技术的积极效果是(1)本专利技术加入酸，降低体系PH值，就可破坏上述络合物的形成，使得溶菌酶与酸 作用生成相应的盐，这样有利于溶菌酶的制备；(2)本专利技术加入了碱金属氯化物，这对提高溶菌酶活性、破坏悬浊体的稳定性，以 及改善溶菌酶的提取率，均有一定的促进作用；(3)本专利技术的反应体系温度提高到80°C以上，可使鸡蛋白中大量的其他蛋白质凝 聚，而溶菌酶由于其耐热性较高则不会凝聚仍在上清液中，这样也可以促进溶菌酶与其他 蛋白质分开；(4)本专利技术用途广泛，可用于医疗和食品等相关领域。具体实施方式以下提供本专利技术的具体实施方式。实施例1，其具体步骤为(1)配置溶液取IOOml的水溶液，用醋酸调节其pH值为2 ；再加入碱金属氯化物， 碱金属氯化物在水溶液中的质量百分数为；所述的碱金属氯化物选自氯化钠；(2)将步骤(1)得到的溶液加热至80°C ；(3)再加入蛋清进行搅拌，然后离心，离心速度为2转/min，离心时间为Imin ；得 到上清液；(4)将上清液进行真空干燥，得到溶菌酶。实施例2，其具体步骤为(1)配置溶液取IOOml的水溶液，用醋酸调节其pH值为3 ；再加入碱金属氯化物， 碱金属氯化物在水溶液中的质量百分数为2% ；所述的碱金属氯化物选自氯化钠；(2)将步骤(1)得到的溶液加热至85°C ；(3)再加入蛋清进行搅拌，然后离心，离心速度为10转/min，离心时间为!Min ；得 到上清液；(4)将上清液进行真空干燥，得到溶菌酶。实施例3，其具体步骤为(1)配置溶液取IOOml的水溶液，用醋酸调节其pH值为3 ；再加入碱金属氯化物，4碱金属氯化物在水溶液中的质量百分数为3% ；所述的碱金属氯化物选自氯化钠；(2)将步骤(1)得到的溶液加热至90°C ；(3)再加入蛋清进行搅拌，然后离心，离心速度为30转/min，离心时间为5min，得 到上清液；(4)将上清液进行冷冻干燥，得到溶菌酶。实施例4，其具体步骤为(1)配置溶液取IOOml的水溶液，用醋酸调节其pH值为4，再加入碱金属氯化物， 碱金属氯化物在水溶液中的质量百分数为5% ；所述的碱金属氯化物选自氯化钾；(2)将步骤(1)得到的溶液加热至95°C ；(3)再加入蛋清进行搅拌，然后离心，离心速度为40转/min，离心时间为8min，得 到上清液；(4)将上清液进行冷冻干燥，得到溶菌酶。实施例5，其具体步骤为(1)配置溶液取IOOml的水溶液，用醋酸调节其pH值为5 ；再加入碱金属氯化物， 碱金属氯化物在水溶液中的质量百分数为6% ；所述的碱金属氯化物选自氯化钾；(2)将步骤(1)得到的溶液加热至100°C ；(3)再加入蛋清进行搅拌，然后离心，离心速度为50转/min，离心时间为lOmin，得 到上清液；(4)将上清液进行冷冻干燥，得到溶菌酶。本专利技术加入酸，降低体系PH值，就可破坏上述络合物的形成，使得溶菌酶与酸作 用生成相应的盐，这样有利于溶菌酶的制备。本专利技术加入了碱金属氯化物，这对提高溶菌酶活性、破坏悬浊体的稳定性，以及改 善溶菌酶的提取率，均有一定的促进作用。本专利技术的反应体系温度提高到80°C以上，可使鸡蛋白中大量的其他蛋白质凝聚， 而溶菌酶由于其耐热性较高则不会凝聚仍在上清液中，这样也可以促进溶菌酶与其他蛋白 质分开。以上所述仅是本专利技术的优选实施方式，应当指出，对于本
的普通技术人 员，在不脱离本专利技术构思的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为 本专利技术的保护范围内。权利要求1.，其特征在于，具体步骤为(1)配置溶液取IOOml的水溶液，用醋酸调节其PH值为2 5；再加入碱金属氯化物， 碱金属氯化物在水溶液中的质量百分数为1 6% ；(2)将步骤(1)得到的溶液加热至80 IOO0C；(3)再加入蛋清进行搅拌，然后离心，离心速度为1 50转/min，离心时间为1 lOmin，得到上清液；(4)将上清液进行真空干燥或者冷冻干燥，得到溶菌酶。2.如权利要求1所述的，其特征在于，在所述的步骤本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种溶菌酶的制备方法，其特征在于，具体步骤为：（１）配置溶液：取１００ｍｌ的水溶液，用醋酸调节其ｐＨ值为２～５；再加入碱金属氯化物，碱金属氯化物在水溶液中的质量百分数为１～６％；（２）将步骤（１）得到的溶液加热至８０～１００℃；（３）再加入蛋清进行搅拌，然后离心，离心速度为１～５０转／ｍｉｎ，离心时间为１～１０ｍｉｎ，得到上清液；（４）将上清液进行真空干燥或者冷冻干燥，得到溶菌酶。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：羌利民，
申请(专利权)人：南通远大生物科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：32