顶体蛋白的用途及提取方法技术

本发明专利技术提供的顶体蛋白的用途及提取方法，主要解决了现有应用动物精液制备治疗肿瘤、抑郁症等多种疾病中的药物纯度低、需服用的剂量大及精液中的非特异性蛋白、脂肪和糖类化合物等杂质对治疗效果的干扰的问题；本发明专利技术提供的顶体蛋白的用途及提取方法，极大地提高了药物的纯度和药效，突破了现有技术的局限性。获取了顶体蛋白在治疗子宫肌瘤、乳房瘤、胃癌、肺癌、肝癌、白血病、大肠癌、卵巢癌、乳腺癌、宫颈癌、恶性淋巴瘤及治疗抑郁症等疾病的药物中的应用；极大地提高了该类药物的纯度，并降低了患者的服用剂量和动物精液冻干粉中含有的其他物质可能造成的影响。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及顶体蛋白的用途及制备方法。
技术介绍
众所周知，肿瘤是当前严重影响人类健康，威胁人类生命的主要疾病之一，已成为人类致死的首要原因。据统计，中国每年有160万人死于癌症，世界上每年有740万人死于癌症。虽然目前治疗癌症的药物和治疗手段不断在更新，但癌症发病率和死亡率仍在不断增加，预计2030年全世界将有超过1200万人死于癌症。癌是机体正常细胞快速产生异常细胞，并发生转移，扩散到其他器官，同时异常细胞增生过程中，吸收营养，破坏人体免疫力和抵抗力，导致机体功能紊乱，失去平衡，最终导致人死亡。目前国际上对癌症病因及发病机理尚未完全认识，对于癌症的治疗，常规疗法无外乎手术治疗、药物化疗、放射性治疗和以毒攻毒等。他们对癌症的治疗虽能起一定作用， 使部分患者病情暂时好转，但容易再次复发和转移，同时正常的组织细胞及机体免疫力不可避免地在治疗过程中受损，给患者带来难以忍受的痛苦和食欲不振、呕吐、发烧、大小便失禁、抑郁、失眠等症状，患者生活质量严重降低。经过传统的化学治疗后，患者会头发脱落、骨瘦如柴，不能饮食吞咽。致使许多患者未死于癌症而死于放化疗和手术。当这些弊端日益显现时，一些人进而转向基因和免疫学等途径，但迄今未取得实质性的进展。专利CN200710017785. 3已描述了动物精液药材在治疗肿瘤、抑郁症等多种疾病中的药物应用，专利申请201010219062. 3描述了动物精液冻干粉的制备方法。但精液的主要成分为水，约占90%以上，在有形成分中，除成熟精子外，尚有1 %的其他细胞，如未成熟的精原细胞、精母细胞以及生殖管道脱落的上皮细胞和少量白细胞，除细胞外，精液内还含有脂肪及蛋白质颗粒、色素颗粒、前列腺液的磷脂小体，无机盐、酶类、乳酸及果糖等；现有技术并未确定动物精液中何种物质起到治疗肿瘤、抑郁症等疾病的作用，直接应用动物精液制备的药物纯度也较低，因此效用较差，患者的服用剂量大。
技术实现思路
本专利技术提供的，主要解决了现有应用动物精液制备治疗肿瘤、抑郁症等多种疾病中的药物纯度低、需服用的剂量大及精液中的非特异性蛋白、脂肪和糖类化合物等杂质对治疗效果的干扰的问题；本专利技术提供的，极大地提高了药物的纯度和药效，突破了现有技术的局限性。本专利技术的具体技术解决方案如下顶体蛋白可以用于抑制癌细胞的扩散，尤其是用于抑制MCF-7、Bel7402、BGC823、 A2780、A549或HCT-8细胞的扩散。顶体蛋白在制备治疗癌症、抑郁症的药物中的应用。癌症包括妇科肿瘤、消化道肿瘤、肺癌、肝癌、白血病和恶性淋巴瘤；妇科肿瘤包括子宫肌瘤、卵巢癌、乳房瘤、乳腺癌和宫3颈癌；消化道肿瘤包括食道癌、胃癌、大肠癌。顶体蛋白可以用于制备胶囊、颗粒、片剂、滴丸、中西药复方制剂、口服液或注射液。本专利技术顶体蛋白提纯通过下述方法得到1]取动物精液或复溶的动物精液冻干粉，动物精液一般选择健康驴、牛、羊或马的精液，其中优选为驴精液；向其中加入浓度为1 % 5%的稀酸溶液，再加入无机酸将PH调节至2 5，以2000r/min 8000r/min的转速离心15 30min后弃去沉淀物，较佳范围为离心转速2500r/min 6000r/min，离心时间7 20min ；然后将得到的上清液合并，浓缩； 其中， 5%的稀酸溶液可选醋酸溶液、甲酸溶液、丙酸溶液、丁酸溶液、盐酸溶液、氢溴酸溶液、硫酸溶液、磷酸溶液等，其中优选为醋酸溶液，稀酸溶液浓度为 5%，较佳范围为1. 7% 4. 5%，优选为2% ；调节pH的无机酸为lmol/L的硫酸、盐酸、氢溴酸或磷酸， 其中优选为盐酸；无机酸调节PH范围为2 5，优选为2. 8 4. 6，最佳pH为3 ；其中动物精液与稀酸的质量比为1 1 1 20，较佳范围为1 2 1 15，最优比为1 4 ；动物精液冻干粉与复溶溶剂水的质量比为1 1 1 20，较佳范围为1 5 1 15，最优比为1 10，其中动物精液冻干粉复溶溶液与稀酸的质量比为1 1 1 16，较佳范围为1 2 1 12，最优比为1 5. 5 ；2]向步骤1处理所得的上清液中加入无机铵盐，调节饱和度至0. 2-0. 5后在4°C 环境中放置3-5小时，饱和度的调节的较佳范围为0. 25-0. 48，优选为0. 3 ；再以2000r/ min 8000r/min离心15 30min，较佳范围为离心转速2500r/min 6000r/min，离心时间7 20min ；然后弃去上清液，沉淀用醋酸缓冲溶液溶解后，得到顶体蛋白粗提物；无机铵盐包括硫酸铵、硫酸氢铵、碳酸铵、碳酸氢铵、磷酸铵等，其中优选的为硫酸铵；醋酸缓冲溶液为0. lmol/L, pH为1. 8 4，较佳范围为2 3. 5，优选pH为2 ；3]将经步骤3处理所得的蛋白粗提物进行柱层析，用醋酸缓冲溶液平衡洗脱，处理完成后收集洗脱液；一般是用葡聚糖凝胶柱、羟丙基葡聚糖凝胶柱、丙烯酰胺凝胶柱或琼脂糖凝胶柱进行柱层析，其中优选的为葡聚糖凝胶柱和羟丙基葡聚糖凝胶柱；醋酸缓冲溶液是PH = 2,0. lmol/L的醋酸缓冲溶液，醋酸缓冲溶液平衡洗脱的流速为0. 5ml/min，处理完成后收集在680nm处有最大吸收的洗脱液；4]将洗脱液以2000r/min 8000r/min离心5 lOmin，弃去上清液，所得沉淀洗涤后以2000r/min 8000r/min继续离心1 3次，每次离心5 lOmin，收集沉淀，即得到顶体蛋白。本专利技术的优点在于本专利技术通过大量的实验研究，突破现有技术应用上的局限性，获取了顶体蛋白在治疗子宫肌瘤、乳房瘤、胃癌、肺癌、肝癌、白血病、大肠癌、卵巢癌、乳腺癌、宫颈癌、恶性淋巴瘤及治疗抑郁症等疾病的药物中的应用；极大地提高了该类药物的纯度，并降低了患者的服用剂量和动物精液冻干粉中含有的其他物质可能造成的影响。经检测，动物精液中顶体蛋白含量约为0. 0.4%。经提纯后，顶体蛋白含量大于90%，与动物精液或其冻干粉相比，药物浓度得到了很大提高，并且剔除了精液中的非特异性蛋白、脂肪和糖类化合物，从药效上提高抗肿瘤活性，并且降低了服用剂量，更方便临床应用。4可制成可制成胶囊、颗粒、片剂、滴丸、口服液、注射液等各种制剂应用于临床，优选为胶囊。本品也可与其他药物制成中西药复方制剂应用。具体实施例方式顶体蛋白是卵子与精子受精过程中所不可缺少的生物活性物质。其化学成分为丝氨酸蛋白溶解类物质，可溶解卵膜。当卵子和精子都成功地被输送到受精部位时，精子的头部一旦接触到卵子表面时，位于其头部顶端的细胞器之一的顶体就随之发生顶体反应，由顶体部分伸长为顶体丝，并分泌出多种酶蛋白，即顶体蛋白，顶体蛋白溶解卵膜，使精子头部穿透卵的放射冠和透明带，而进入卵子，完成受精过程。因此，顶体蛋白活性临床上常成为精液分析评价精子功能的定量指标。顶体蛋白可通过对冷冻保存的精子使用去垢剂，声处理和低PH等方法提取，并用凝胶过滤，离子交换层析，等电聚集，亲和层析和电泳等生化技术，可获得纯顶体蛋白。但不同哺乳动物和采用的不同分离方法所得到的顶体蛋白分子量差异较大，如人顶体素为 30KD 70KD，而猪的约为41KD 56KD。顶体素分子是由酶原区、催化区、尾区三部分组成，其中酶原区、催化区氨基酸序列无本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．顶体蛋白用于抑制癌细胞的扩散。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李偃，程辉，
申请(专利权)人：陕西精健新星生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：87