本发明专利技术涉及病虫害防治领域，具体地，本发明专利技术涉及一种生物活性物质及其防治大豆胞囊线虫4号小种的应用。根据本发明专利技术的生物活性物质可以通过包括以下步骤的方法提取，1)将灰包科药材粉碎后过筛，得到药材粉末；2)向药材粉末中加入提取缓冲液，搅拌，低温放置过夜，然后离心，合并上清液；3)向上清液中加入硫酸铵，盐析；4)取出盐析液，离心得到沉淀；5)透析，得到粗蛋白。根据本发明专利技术的生物活性物质可作为绿色农药，对环境无污染，与61.44％甲氨基阿维菌素苯甲酸盐原药1.0550mg/kg对大豆胞囊线虫4号小种的致死效果相近，线虫死亡率为50％左右。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及病虫害防治领域，具体地，本专利技术涉及一种生物活性物质及其防治大 豆胞囊线虫4号小种的应用。
技术介绍
大豆胞囊线虫(Heterodera glycines Ichinohe,英语名为 Soybean Cyst Nematode简称SCN)是存在于土壤中的一种土传性定居型内寄生线虫。SCN寄主范围广(该 线虫寄生豆科、玄参科170余种植物)、传播途径多、传播速度快、存活时间久、危害严重，是 一种极难防治的土传病害。由SCN引起的大豆胞囊线虫病是世界性的大豆病害，世界各主 要大豆生产国美国(大豆胞囊线虫病危害美国观个大豆生产州)、巴西、中国、阿根廷、日本 等均大面积遭受大豆胞囊线虫病的危害，严重影响世界大豆的生产。每年由SCN而造成的 经济损失可达数十亿美元，是世界大豆生产上的毁灭性病害之一。目前，我国大豆胞囊线虫 病的危害面积130余万hm2，一般导致大豆减产10-30%，严重时达到50%以上，甚至颗粒无 收。从世界范围来看，大豆胞囊线虫病害的为害和蔓延有日趋加重的趋势，有关抗大豆胞囊 线虫的研究也越来越受到各国的重视。化学农药对人、畜有毒、容易污染环境，在农产品中有残留而影响人体健康等。化 学农药的长期大量不合理使用，引起了一系列的环境和社会问题。随着人们环保意识的日 益增强，化学农药将被逐步淘汰，取而代之的是生物农药。由于生物农药选择性强，对有害 生物高效，病原菌和害虫难以产生抗药性，对人畜及非靶标生物安全，不污染环境，在有害 生物防治中起着非常重要的作用。因此，生物农药受到世界各国的高度重视，被誉为“绿色 农药”，是今后农药发展的必然选择。
技术实现思路
本专利技术的专利技术人为了提供一种防治大豆胞囊线虫的生物农药提出并完成了本发 明。本专利技术的目的是提供一种生物活性物质。本专利技术的再一目的是提供上述生物活性物质防治大豆胞囊线虫4号小种。本专利技术的再一目的是提供包含上述防治大豆胞囊线虫的生物农药。根据本专利技术的生物活性物质可以通过包括以下步骤的方法提取，1)将灰包科药材粉碎后过筛，得到药材粉末；2)向药材粉末中加入提取缓冲液，搅拌，低温放置过夜，然后离心，合并上清液；3)向上清液中加入硫酸铵，盐析；4)取出盐析液，离心得到沉淀；5)透析，得到粗蛋白。本专利技术的专利技术人从灰包科(Carpophorum)药材提取得到了一种生物活性物质，经 检测该生物活性物质具有抗大豆胞囊线虫病活性，所述灰包科药材包括马勃。根据本专利技术的具体实施例的提取上述生物活性物质的步骤如下1、将灰包科药材粉碎后过40目筛，得到药材粉末，称重。2、将5倍量的0. 01mol/L PBS缓冲液pH7. 2加入药材粉末中，搅拌并用保鲜膜封 口后放入冰箱保鲜层G°C)，不时搅拌，放置过夜。3、4°C下，12000rpm，离心 30min，合并上清液。4、盐析4°C下向上清液中加入(NH4)2SO4达80%饱和度。使之完全溶解后用保鲜 膜封口放入冰箱，放置过夜。5、取出盐析液，在4°C下，12000rpm，离心lOmin，取出沉淀，最后用少量上清液冲洗离心管，合并入沉淀，称重。6、透析将所得沉淀用5倍量O.Olmol/L PBS缓冲液溶解后倒入透析袋，并将透析 袋浸入装有大量缓冲液的容器中，放入冰箱。7、4小时后，更换容器内缓冲液，放入冰箱，过夜。8、次日倒掉容器内缓冲液，加入蒸馏水，放入冰箱4小时后再换蒸馏水，放置过夜。9、次日取透析袋中内容物放入冷冻干燥机，冻成干粉，得到粗蛋白。根据本专利技术的菌类生物活性物质对大豆胞囊线虫4号小种的毒力作用生物测定 试验中，使用的对照药剂甲氨基阿维菌素苯甲酸盐是目前生产上应用十分广泛的一种高效 抗生素类杀虫、杀螨剂，有研究表明它对环境生物具有较大的风险，特别是对水生生物具有 高毒性。实验表明，根据本专利技术的菌类物质1492. 5825mg/kg与对照药剂61. 44%甲氨基阿 维菌素苯甲酸盐原药1. 0550mg/kg对大豆胞囊线虫4号小种的致死效果相近，线虫死亡率 为50%左右。具体实施例方式实施例1以马勃为原料提取生物活性物质1、将马勃粉碎后过40目筛，得到药材粉末，称重。2、将5倍量的0. 01mol/L PBS缓冲液PH7. 2加入药材粉末中，搅拌并用保鲜膜封 口后放入冰箱保鲜层G°C)，不时搅拌，放置过夜。3、4°C下，12000rpm，离心 30min，合并上清液。4、盐析4°C下向上清液中加入(NH4)2SO4达80%饱和度。使之完全溶解后用保鲜 膜封口放入冰箱，放置过夜。5、取出盐析液，在4°C下，12000rpm，离心lOmin，取出沉淀，最后用少量上清液冲洗离心管，合并入沉淀，称重。6、透析将所得沉淀用5倍量0. 01mol/L PBS缓冲液溶解后倒入透析袋，并将透析 袋浸入装有大量缓冲液的容器中，放入冰箱。7、4小时后，更换容器内缓冲液，放入冰箱，过夜。8、次日倒掉容器内缓冲液，加入蒸馏水，放入冰箱4小时后再换蒸馏水，放置过夜。9、次日取透析袋中内容物放入冷冻干燥机，冻成干粉，得到粗蛋白。实施例2对大豆胞囊线虫4号生理小种的毒力测定1、供试材料试验药剂测试组实施例1制备的生物活性物质，对照药剂61. 44%甲氨基阿维 菌素苯甲酸盐原药。2、试验对象大豆胞囊线虫(Heterodera glycine)4号生理小种，从病土中分离大豆胞囊，在室 内孵化幼虫备用。3、试验方法药剂配制将实施例1制备的生物活性物质用水溶解，配制成10倍母液，将母液再 稀释100倍、200倍、400倍、800倍、1600倍，配制成五个浓度梯度10000，5000，2500，1250， 625ppm。将61. 44%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐原药0. Ig用99. 9ml丙酮和0. Iml吐温稀释 1000倍母液，然后再用水分别稀释成64000倍、U8000倍、256000、512000倍、1024000倍 液,配制成五个不同浓度梯度 15. 6ppm、7. 8ppm、3. 9ppm、l. 95ppm、0. 975ppm。大豆胞囊线虫悬浮液制备从大豆胞囊线虫发病较重的土壤中用漂浮法分离胞 囊，将胞囊置于0. 1 %的&1S04溶液中浸泡Mh，待胞囊线虫幼虫在常温下孵化后，稀释至镜 检每Iml悬浮液中约含有100-150头左右二龄幼虫，备用。试验每处理设五个浓度梯度、四次重复，利用浸渍法进行生物活性测定。计算各处 理线虫死亡率、校正死亡率。用SAS软件计算出药剂的毒力回归方程、LD 50, LD 95和95% 置信限。4、生物测定方法采用浸渍法进行生物测定。实施例1制备的生物活性物质设置5个浓度处理、设 置1个空白对照，每个处理均设置4个重复。取M孔生化测试板，各取1毫升供试药液 置于小孔中，加入等体积的线虫悬浮液，空白处理加入等量的清水，分别得到5000、2500、 1250,625,312. 5ppm的实施例1-3制备的生物活性物质处理液和7. 8,3. 9,1. 95,0. 975、 0. 4875ppm的甲氨基阿维菌素苯甲酸盐处理液。处理M小时后检查大豆胞囊线虫二龄幼虫 的存活数量和死亡数量，计算死亡率和校正死亡率。并用SAS软件计算出药剂的毒力回归 方程、LD5Q、LD95和95%置信限。死亡线虫数死亡率本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种生物活性物质，其特征在于，所述生物活性物质通过包括以下步骤的方法提取， １）将灰包科药材粉碎后过筛，得到药材粉末； ２）向药材粉末中加入提取缓冲液，搅拌，低温放置过夜，然后离心，合并上清液； ３）向上清液中加入硫酸铵，盐析； ４）取出盐析液，离心得到沉淀； ５）透析，得到粗蛋白。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：黄其满，都晓伟，王岚，王连铮，
申请(专利权)人：中国农业科学院生物技术研究所，黄其满，
类型：发明
国别省市：11
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