本发明专利技术涉及一种银染增强技术胶体金免疫层析试纸盒，其特征在于主要由胶体金免疫层析试纸条；包被有银盐的底膜及含有参与银盐还原反应的还原剂的顶膜构成。具有操作简单，灵敏度高、稳定性好、检测快速、结果清楚，易于判断和保存，且无需任何仪器设备等优点，尤其适合于临床和突发事件的现场检测，适合流行病学调查大规模应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术提供一种银染增强技术胶体金免疫层析试纸盒，用于提高胶体金免疫层析试纸 条的检测性能，本专利技术还公开了上述试纸盒的制备方法及在试纸条检测中的应用，属于生 物检测领域。
技术介绍
胶体金探针是20世纪70年代发展起来的一门新技术。特别引人注目的是以膜为 固相载体的胶体金快速诊断技术，该技术是20世纪80年代在酶联免疫吸附试验、乳胶凝集 试验、单克隆抗体技术、胶体金免疫技术和新材料技术基础上发展起来的一项新型体外诊 断技术。近年来该技术已越来越受到人们的重视，其技术发展迅速，在生物医学领域特别是 人类医学、兽医学检验中得到了广泛应用。胶体金免疫层析测试条是结合免疫胶体金与对应抗原(抗体)的反应特异性和层 析技术而制成的。一个胶体金免疫层析测试条通常由加样区、反应区和吸附区三部分组成。 加样区含有免疫胶体金颗粒，通常由玻璃纤维将免疫胶体金颗粒吸附在该区；反应区则喷 涂或点加两条反应线，一条为检测线，一条为质控线。检测线用以检测此处(抗原)物质与免 疫胶体金颗粒的包被抗原(抗体或抗体携带的抗原)的反应性；质控线则用以检测免疫胶体 金颗粒上的包被蛋白质的活性及程度，免疫胶体金颗粒由加样区释放后，经反应区，部分继 续到吸附区，完成层析，从而达到快速检测的目的。银染增强技术主要成分是还原剂和银盐溶液。在还原剂的作用下，银离子容易以 纳米金颗粒为核心，聚集在纳米金颗粒的表面还原成银原子，这样，纳米级大小的颗粒通过 银离子的聚集和还原就可以变成毫米级的颗粒，因此，纳米金颗粒的信号得到放大。经检索未见有本银染增强技术应用于胶体金免疫层析试纸条，以增强其检测性能 公开的文献报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是公开一种银染增强技术胶体金免疫层析试纸盒，适合现场快速检 测，具有特异性强，灵敏度高，操作简便特点。本专利技术还提供了上述免疫层析试纸盒的制备方法，适用于批量生产。本专利技术的银染增强技术胶体金免疫层析试纸盒，包含一个胶体金免疫层析试纸 条；两片底膜，其中含有银盐溶液；两片顶膜，其中含有参与银盐还原反应的还原剂；一个 塑料滴管和一个塑料镊子。本专利技术免疫层析试纸盒的胶体金免疫层析试纸条可为所有胶体金免疫层析试纸 条，其结构为样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水滤纸按从上到下依次固定于PVC膜板上， 其中结合垫包被有胶体金标记物，其结果的判定为硝酸纤维素膜上的检测线和质控线是否 结合胶体金标记物为依据。本专利技术免疫层析试纸盒的底膜是将未处理过的玻璃纤维素膜于硝酸银溶液中浸泡1分钟，取出后避光干燥处理，干燥后的底膜裁成适当大小密封避光保存。本专利技术疫层析试纸盒的顶膜是将未处理过的玻璃纤维素膜于对苯二酚溶液中浸 泡1分钟，取出后避光干燥处理，干燥后的顶膜裁成适当大小密封避光保存。本专利技术银染增强技术胶体金免疫层析试纸盒的制备方法，包括以下主要步骤 1)免疫层析试纸条的制备将样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水滤纸按从上到下依次固定于PVC膜板上制备免 疫层析试纸条，其中结合垫包被有胶体金标记物，硝酸纤维素膜上包被检测线和质控线。)底膜和顶膜的制备将底膜于硝酸银溶液中浸泡1分钟，60°c避光干燥，将处理好的底膜装于不透明的密 封袋内保存。将顶膜于对苯二酚溶液中浸泡1分钟，60°C避光干燥，将处理好的顶膜装于不透 明的密封袋内保存。)银染增强胶体金免疫层析试纸盒的组装将装有底膜的不透明的密封袋；装有底膜的不透明的密封袋；免疫层析试纸条；加样 滴管和镊子装于试纸盒内。本专利技术的积极效果在于利用胶体金免疫层析技术和银染技术制备免疫层析试 纸盒，既增强了胶体金免疫层析试纸条的检测灵敏度，也保留了其特异性强的特点。本专利技术 免疫层析试纸盒其中银染增强技术可适用于所有胶体金免疫层析试纸条，本专利技术免疫层析 试纸盒适合于临床和突发事件的现场检测，适合流行病学调查，具有操作简单，灵敏度高、 稳定性好、检测快速、结果清楚，易于判断和保存，且无需任何仪器设备等优点，尤其适合于 临床和突发事件的现场检测，适合流行病学调查大规模应用。附图说明图1为胶体金试纸盒的检测结果其中，l、lng/mL毒素样品检测结果；2、100 pg/mL毒素样品检测结果；3、阴性结果。具体实施例方式下列实施例旨在进一步举例说明，而不是限制本专利技术。本领域技术人员可以理解 到，在不背离本专利技术的精神和原则的前提下，对本专利技术的任何平行改变和改动都将落入本 专利技术的待批权利要求范围内。实施例1 胶体金探针的制备 1、胶体金颗粒的制备取硅化过的250mL三角瓶一个，加IOOmL去离子水及ImL 1%氯金酸，加热沸腾；搅动下 准确加入1. 5mLl%柠檬酸三钠，继续煮沸15min，冷却后用去离子水恢复到原体积即可得到 粒径25 nm的胶体金颗粒。通过调节加入1 2mLl%柠檬酸三钠的量可制备出粒径15 40nm的胶体金颗粒。2、胶体金标记鼠抗相思子毒素单克隆抗体的制备取硅化过的250mL三角瓶一个，加入IOOmL粒径25 nm或30nm胶体金；加入适量0.2mol/L K2COjfpH为8.0 9.0，最优选8. 7，逐滴加单克隆抗体至抗体终浓度为1 1.5mg/mL，最优选1. lmg/mL，室温摇床上放置15 25min ；加入10% BSA至终浓度为5%，防 止抗体蛋白和胶体金聚合和沉淀。3、金标垫的制备把玻璃纤维素膜在生物安全柜内剪成0. 8X 30cm/条，4°C真空抽干后待用。将纯化好 的胶体金探针按4mL/条的量均勻涂布在玻璃纤维素膜上，在生物安全柜内通风干燥过夜， 干燥条件下保存备用。检测相思子毒素的免疫层析试纸条组装 1、硝酸纤维素膜上检测线和质控线的制备将纯化好的兔抗相思子毒素多克隆抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体用PBS(0. Olmol/mL. pH7. 5)溶液分别稀释至终浓度为lmg/mL和1. 5mg/mL。将稀释好的相思子毒素多克隆抗体 溶液装入BIODOT划膜机喷头2，固定在距硝酸纤维素膜下边缘1. Icm的位置上，稀释好的羊 抗鼠IgG多克隆抗体装入BIODOT划膜机喷头1，固定在距硝酸纤维素膜下边缘1. 6cm的位 置上。参数均为l.OPL/cm喷在硝酸纤维膜上。2、免疫层析试纸条的组装免疫层析试纸的组装方法一切操作均在无灰尘、无菌、无大颗粒的情况下进行，取 大小为30cmX 80mm的PVC底板，将包被抗体的硝酸纤维素膜(30cmX 25mm)组装到粘 性PVC底板上，要求其下边缘一定要对齐模具上的黑色标记线，并小心抹平膜面。将吸 水垫(30cmX35mm)紧靠模具上边缘组装到粘性底板上，并小心抹平。将包被有金标抗体 玻璃纤维素膜(30cmX8mm)紧靠标尺下边缘组装到粘性底板上，并小心抹平。将样品垫 (30cmX25mm)紧靠模具下边缘组装到粘性底板上，并小心抹平。用切条机切成4. 5mm宽的 试纸，在装配区将切好的试纸条分装于适当大小的密封袋内，每袋可装1-2个试纸条，也可 将切好的试纸条装于免疫层析用塑料卡内。相思子毒素的免疫层析试纸盒的组装 1、底膜的处理将未处理过的玻璃纤维素膜于硝酸银溶液中浸泡1分钟，取出后避光干燥处理，干燥 后的底膜裁成适当大小如试纸条为裸条底膜的宽度应与试纸条宽度相同，长度以能良好 的同时覆盖检测线和质控线为宜；如试纸条装于塑料卡内本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种银染增强技术胶体金免疫层析试纸盒，其特征在于主要由胶体金免疫层析试纸条；包被有银盐的底膜及含有参与银盐还原反应的还原剂的顶膜构成。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李小兵，刘国文，杨威，张燚，孔涛，张志刚，张冰冰，唐佳佳，李冬娜，王哲，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：82
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