用于亲合分析的结合性表面制造技术

本发明专利技术提供了不饱和的、或者不饱和的并且被定向的结合性表面，并且提供了用于制备不饱和的、或者不饱和的并且被定向的结合性表面的方法和组合物。提供了制备结合性表面的方法以用于制备亲合分析用支持物表面，该方法包括使用顺磁性微粒上不饱和的、或者不饱和的并且被定向的结合性表面。该方法包括制造基于配体：支持物连接物的复合物的方法，包括下述工艺：任选地使用低的配体对支持物连接物的投入比率，稀释，使用嵌段共聚物进行分散和／或涂敷。提供了使用生物素－ＢＳＡ和生物素－卵清蛋白结合性表面、以及涂敷链霉抗生物素蛋白的微粒、和涂敷有捕获部分比如生物素化免疫球蛋白或其片段的微粒的具体实施例。提供了将配体偶联于固体表面的其他实施例。提供了这些方法和与多种分析物和捕获部分相连的组合物的应用。提供了用于免疫测定的不饱和的、或者不饱和的并且被定向的结合性表面。另外，提供了分散的微粒和它们的制造方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及具有不饱和的或者不饱和的并且被定向的结合性表面的支持物，包括具有用于亲合分析的包含配体的结合性表面的支持物。本专利技术的方面尤其涉及包含生物素、或生物素以及生物素特异性的配体结合剂比如链霉抗生物素蛋白(SA)的结合性表面。提供了用于免疫测定的结合性表面，包括包含抗原或抗体或它们的片段的结合性表面。本专利技术进一步的实施方式涉及封闭的固体支持物表面和分散的微粒。提供了用于制备并使用这些支持物的方法。
技术介绍
结合性表面在多种应用，例如，亲合分析中被广泛使用。典型地，通过最大化每单位固相支持物表面的表面面积上的配体结合剂量而制备出普通的结合性表面。尽管常规方法可以得到具有高密度配体结合剂的支持物表面，但简单地最大化支持物表面上的配体结合剂的数量不会一成不变地提高结合性表面的性能。 一些在亲合分析中使用的普通结合性表面可以通过将配体结合剂直接涂敷到固相上、并且用牛血清白蛋白(BSA)或卵清蛋白封闭固相而最大化结合力，该配体结合剂比如是抗体，或者是生物素特异性的配体结合剂比如SA。尽管这最大化结合性表面的抗原或生物素结合力，但各个抗体或生物素特异性的配体结合剂在结合性表面上很拥挤，没有特定的定向。并且传统的封闭策略不能必要地抑制或者减轻抗体或者生物素特异性的配体结合剂从结合性表面上脱落。另外，脱落能够引起很弱的分析灵敏度(最佳以下的信噪比)、准确度、精确性、稳定性、或可制造性、或其组合。由于空间位阻，结合性表面的拥挤和随机定向能够降低结合性表面的结合效率或能力。因此，需要有改进的结合性表面和组成、以及用于不依靠简单地最大化结合性表面上的配体结合剂的密度而制备改进的结合性表面的方法
技术实现思路
饱和的、或者不饱和的并且被定向的结合性表面；提供了用于制备不饱和的、或者不饱和的并且被定向的结合性表面的方法；并且提供了用于制备不饱和的、或者不饱和的并且被定向的结合性表面的成分的方法。本专利技术还提供了用于亲合分析比如，例如，免疫测定的不饱和的、或者不饱和的并且被定向的结合性表面的方法和组成。在一个方面，本专利技术提供了用于制备用于免疫测定的不饱和的、或者不饱和的并且被定向的捕获部分的方法和组合物，其中，由于结合至不饱和的、或者不饱和的并且被定向的结合性表面，该捕获部分是不饱和的、或者不饱和的并且被定向的。在一个特定的实施方式中，捕获部分包含免疫球蛋白或其片段，其中，捕获部分通过与固定在支持物连接物(coupler)上的配体结合而被固定在不饱和的、或者不饱和的并且被定向的结合性表面上，其中，支持物连接物被固定在固相支持物上。在一个特定的实施方式中，免疫球蛋白或其片段被生物素化，生物素化的免疫球蛋白或其片段与生物素特异性的配体结合剂(生物素结合性部分)相连接，并且生物素特异性的配体结合剂与直接地或者通过支持物连接物而附接于支持物的生物素相连接。在一个特定的实施方式中，支持物连接物包含蛋白质，并且固相支持物包含微粒。在另一个方面，本专利技术提供一种用于通过使用具有不饱和的、或者不饱和的并且被定向的结合性表面的支持物进行免疫测定的方法，其中，该方法包括使用免疫球蛋白或其片段来捕获分析物，其中免疫球蛋白或其片段是不饱和的、或者不饱和的并且被定向在结合性表面上。在各种实施方式中，免疫球蛋白或其片段的不饱和的、或者不饱和的并且被定向的性质由结合性表面的不饱和的、或者不饱和的并且被定向的性质所确定，因为免疫球蛋白或其片段被结合于该结合性表面。在另一个方面，本专利技术提供了一种具有不饱和的、或者不饱和的并且被定向的结合性表面的支持物，其包含直接地或通过偶联于支持物连接物间接地与支持物偶联的配体，其中所述支持物连接物被偶联于支持物。其中，配体的密度是约1.0 X10's至约5.0 X10—1微摩尔配体/每平方米支持物；或者约0.5X 10'2至约2.0 x 10—1微摩尔配体/每平方米支持物；或约1.0乂10'2至约1.6xl0"微摩尔配体/每平方米支持物；或约1.0Xl(^至约2.0x10—1微摩尔配体海平方米支持物。作为另一种选择，配体的密度是约0.5X10—4至约10X 10"4微摩尔配体/每毫克(mg)微粒；或约1.0X1(T"至约5.5 Xl(^微摩尔配体/每mg微粒。在各种实施方式中，支持物连接物以约1.2X10—z微摩尔/每平方米分析物支持物至约7.5X10—2微摩尔/每平方米分析物支持物的密度存在于分析物支持物上。在各种实施方式中，配体与配体结合剂相连接，其中，配体结合剂的密度是小于约0.4 X10'z至小于约8xl(^微摩尔配体结合剂/每平方米支持物、或者其密度是约1.0乂10'2至约5.()乂10'2微摩尔/每平方 米分析物支持物。本专利技术实施方式的目的在于使捕获部分以约1.0X 1(^微摩尔/每平方米分析物支持 物至约2.0Xl()J微摩尔/每平方米分析物支持物的密度存在于分析物支持物上。在各种实 施方式中，结合性表面还包括捕获部分，其中，捕获部分的密度是小于约2X10—3至小于约 4X10—"微摩尔捕获部分/每平方米支持物。在一个特定的实施方式中，配体(例如，生物 素)的密度是约1.9乂10—2至约1.6X10"微摩尔配体/每平方米支持物，配体结合剂(例如， 生物素结合性部分比如SA)的密度是约l.OX 10—2至约5.0X 10—2微摩尔/每平方米分析物支 持物、或者约1.2 乂10—2至小于约4.6乂10—2微摩尔配体结合剂/每平方米支持物，并且捕获 部分(例如，生物素化捕获部分比如生物素化对分析物特异的抗体)的密度是约2.5X10-3 至约1.4X10々微摩尔捕获部分/每平方米支持物。在本专利技术的至少一种实施方式中，支持 物连接物是任选的。在这样的一个实施方式中，配体可以是生物素或其衍生物。 在一个特定的实施方式中，配体包含生物素或其衍生物。在另一个特定的实施方 式中，配体结合剂包含生物素结合性部分或其片段比如，例如抗生物素蛋白、SA、 NeutrAvidin (卵白素)、SA的片段、抗生物素蛋白的片段、NeutrAvidin的片段、或者其 混合物。在各种实施方式中，捕获部分每含抗体、抗体的结合性片段、受体、受体配体、 激素、激素受体、酶、酶的底物、单链的低聚核苷酸、单链的多聚核苷酸、双链的低聚核 苷酸、双链的多聚核苷酸、抗原、肽或蛋白质中的一种或多种。在各种实施方式中，配体 通过支持物连接物与支持物偶联，并且支持物连接物依次与支持物偶联。在一个特定的实 施方式中，支持物连接物包含蛋白质。在一个特定的实施方式中，该蛋白质是BSA、卵清 蛋白、BSA的片段、卵清蛋白的片段、或其混合物。在一个特定的实施方式中，支持物是 微粒。在一个特定的实施方式中，结合性表面具有约1X10—z至约5Xl(T'微摩尔配体/每平 方米支持物；或者作为另一种选择，结合性表面具有约2X1(^至约2 X 10"微摩尔配体/ 每平方米支持物。在另一个特定的实施方式中，结合性表面具有约1.9X 10—2至约1.6 X 10"微摩尔配体/每平方米支持物。在另一个特定的实施方式中，结合性表面具有约1.6 X 10'2至约6.6 X 10'2微摩尔配体/每平方米支持物。在另一个特定的实施方式中，结合性表 面具有约1.6 Xl(^至约3.2 X 10本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于亲合分析的不饱和的结合性表面，其包含：　ａ）分析物支持物；以及　ｂ）至少一种支持物连接物，其中，少于饱和量的支持物连接物与所述分析物支持物偶联。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔舒亚C索尔多，詹姆斯L萨克里森，
申请(专利权)人：贝克曼考尔特公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]