一种IgG－IgM聚合物及其聚合方法技术

一种IgG－IgM聚合物及其聚合方法、所述IgG－IgM聚合物由IgG和IgM两种免疫球蛋白组成；所述IgG和IgM两种免疫球蛋白中的一者的多糖基团中的羟基氧化后生成的醛基与另一者的氨基结合生成Schiff碱化学键合。所述IgG－IgM聚合物经由透析、氧化、终止氧化、抗体交联、还原、提纯等步骤制备而得。本发明专利技术得到的IgM-IgG聚合体能有效地抑制非特异反应，从而提高反应系统的抗干扰能力。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种IgG - IgM聚合物及其聚合方法，特别涉及一种增强体外免疫反应体系的抗干扰能力的IgG - IgM聚合物及其聚合方法，属于分子生物学领域。
技术介绍
抗原(antigen)是指能在机体中产生特异性免疫应答的物质，它进入机体后，能刺激机体产生抗体(antibody)，激发细胞免疫。抗原的分子量一般大于5000，而小分子的半抗原(hapten)必须与大分子蛋白质结合后才能引起机体产生特异性抗体。抗原的反应性取决于抗原决定簇(antigenic determinant)，或表位(印itope)。根据抗原分子量大小和其蛋白质结构，一个抗原分子可带有不同的决定簇。抗体是指能与抗原特异结合的免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)，分为五类，即 IgG、IgM、IgA、IgD和IgE，与免疫测定有关的是IgG和IgM。每个Y型状的IgG单体有二个抗原结合部位或价，分子量为150000。而IgM是由五个单体组成的五聚体，具有10个抗原结合价，可是由于空间位置的影响，只表现为五个抗原结合价，IgM的分子量为900000。针对同一个抗原不同决定簇的同一个机体产生的系列抗体称为多克隆抗体。而针对同一个抗原、同一个决定簇的同一个机体产生的抗体称为单克隆抗体。抗体的动物源性是指抗体产生的动物种类。利用抗体抗原结合反应的原理从而检测待测物的含量已被广泛应用于体外诊断技术数十年。而显色化合物加入产生的酶联免疫技术，使得灵敏度得到了很大提高。同位素示踪物的加入而产生的放射免疫法，使灵敏度更上了一个台阶，可是由此产生的放射性废物的处理以及放射线对人体造成的可能伤害，妨碍了这个技术的进一步发展。上个世纪九十年代发展起来的化学发光免疫法，利用酶或其他标记物在抗体抗原结合反应而引发的链式化学反应，测定化学能转换过程中释放的光子，从而得到待测物的含量。由于这种链式化学反应能够几何数量级地放大光子信号，使得测量灵敏度获得了极大提高，同时扩大了线性范围从而改善了高低端的准确性，这奠定了化学发光在免疫检测中的理论基础。但是， 由于各个检测样本的多样性，其内含物各有所不同，许多小分子或相似物会干扰正常的抗体抗原特异反应，从而引起抗体的非特异结合反应。由于化学发光的高敏感性，如果不能有效的抑制这种非特异反应，那么不可避免的会产生假阳、假阴结果，特别是在线性低端的假阳不准确性。
技术实现思路
本专利技术提供一种IgG - IgM聚合物及其聚合方法，目的是降低免疫测定时小分子或相似物的干扰。为达到上述目的，本专利技术采用的第一种技术方案是一种IgG - IgM聚合物，所述聚合物由IgG和IgM两种免疫球蛋白组成；所述IgG和IgM两种免疫球蛋白中的一者的多糖基团中的羟基氧化后生成的醛基与另一者的氨基结合生成khiff碱化学键合。为达到上述目的，本专利技术采用的第二种技术方案是一种IgG — IgM聚合物的聚合方法，主要由下列步骤组成第一步、透析将IgM免疫球蛋白溶于pH值为7. 2的磷酸盐缓冲液中得到浓度为2mg/ml的IgM免疫球蛋白缓冲液，然后装入透析袋中，在2 8°C条件下，pH值为7. 2的磷酸盐缓冲液中透析 8 15小时；第二步、氧化移出第一步中透析后的IgM免疫球蛋白缓冲液，然后向所述透析后的IgM免疫球蛋白缓冲液中加入与其体积相等的浓度为43mg/ml的过碘酸钠水溶液，使IgM免疫球蛋白中的多糖基团中的羟基氧化反应后生成醛基得到氧化IgM免疫球蛋白水溶液，所述氧化反应的时间为25 35分钟，所述氧化反应的温度条件为2 8°C ；第三步、终止氧化向第二步得到的氧化IgM免疫球蛋白水溶液中加入与所述过碘酸钠水溶液体积相等的质量浓度为3%的乙二醇水溶液，然后在2 8°C条件下保持25 35分钟以终止所述氧化反应得到终止氧化IgM免疫球蛋白水溶液； 第四步、抗体交联向第三步得到的终止氧化IgM免疫球蛋白水溶液中加入IgG免疫球蛋白，然后装入透析袋中，置于浓度为0. 05mol/l、pH值为9. 6的碳酸盐缓冲液中透析8 15小时得到IgG — IgM免疫球蛋白聚合物原液，其中，所述IgM免疫球蛋白和IgG免疫球蛋白两者之间的摩尔比为1:1 ；第五步、还原取出第四步中得到的IgG - IgM免疫球蛋白聚合物原液，向其加入浓度为10mg/ml的硼氢化钠水溶液，于2 8°C条件下进行还原反应1. 5 2. 5小时得到IgG — IgM聚合物还原液，所述IgG - IgM聚合物原液与所述硼氢化钠水溶液两者之间的体积比为12. 5:1 ； 第六步提纯向第五步得到的IgG - IgM聚合物还原液中加入与其体积相等，且pH值为7. 6的25°C 硫酸铵饱和水溶液，置于2 8°C条件下反应1. 5 2. 5小时产生沉淀，然后采用离心分离的方式取出该沉淀；第七步、将第六步得到的沉淀溶于PH值为7. 4的0. 05mol/l的Tris-HCl缓冲液，稀释至浓度为2mg/ml后装入透析袋中，然后在2 8°C条件下，置于pH值为7. 4的0. 05mol/l 的Tris-HCl缓冲液中透析8 15小时即得IgG — IgM聚合物。上述技术方案中的有关内容解释如下上述方案中，将所述第七步中得到的IgG — IgM聚合物与其体积相等的甘油混合均勻， 然后与零下20°C条件下保存。本专利技术工作原理是由于上述技术方案运用，本专利技术与现有技术相比具有下列优点和效果 现有技术普遍采用的是在反应体系中加入与检测抗体相同动物源性的普通免疫球蛋白，通过竞争吸附非特异物质的原理，最大程度抑制非特异反应的发生，可是由于分子空间结构的原因，许多时候其效果并不理想。本专利技术得到的IgM-IgG聚合体能有效地抑制非特异反应，从而提高反应系统的抗干扰能力。 附图说明附图1为IgG-IgM聚合物即IgG单体对标准曲线的影响示意图。 具体实施例方式下面结合附图及实施例对本专利技术作进一步描述 实施例一种IgG - IgM聚合物及其聚合方法一种IgG - IgM聚合物的聚合方法，主要由下列步骤组成 第一步、透析将IgM免疫球蛋白溶于pH值为7. 2的磷酸盐缓冲液中得到浓度为2mg/ml的IgM免疫球蛋白缓冲液，然后装入透析袋中，在2 8°C条件下，pH值7. 2的磷酸盐缓冲液中透析过夜(12小时)；第二步、氧化移出第一步中透析后的IgM免疫球蛋白水溶液，然后向所述透析后的IgM免疫球蛋白水溶液中加入与其体积相等的浓度为43mg/ml的过碘酸钠水溶液，使IgM免疫球蛋白中的多糖基团中的羟基氧化反应后生成醛基得到氧化IgM免疫球蛋白水溶液，所述氧化反应的时间为30分钟，所述氧化反应的温度条件为4°C ；第三步、终止氧化向第二步得到的氧化IgM免疫球蛋白水溶液中加入与所述过碘酸钠水溶液体积相等的质量浓度为3%的乙二醇水溶液，然后在4°C条件下保持30分钟以终止所述氧化反应得到终止氧化IgM免疫球蛋白水溶液； 第四步、抗体交联向第三步得到的终止氧化IgM免疫球蛋白水溶液中加入小鼠IgG免疫球蛋白，然后装入透析袋中，置于浓度为0. 05mol/l、pH值为9. 6的碳酸盐缓冲液中透析过夜(12小时)得到IgG - IgM免疫球蛋白聚合物原液，其中，所述IgM免疫球蛋白和IgG免疫球蛋白两者之间的摩尔比本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种ＩｇＧ－ＩｇＭ聚合物，其特征在于：所述ＩｇＧ－ＩｇＭ聚合物由ＩｇＧ和ＩｇＭ两种免疫球蛋白组成；所述ＩｇＧ和ＩｇＭ两种免疫球蛋白中的一者的多糖基团中的羟基氧化后生成的醛基与另一者的氨基结合生成Ｓｃｈｉｆｆ碱化学键合。

【技术特征摘要】
1.一种IgG - IgM聚合物，其特征在于所述IgG - IgM聚合物由IgG和IgM两种免疫球蛋白组成；所述IgG和IgM两种免疫球蛋白中的一者的多糖基团中的羟基氧化后生成的醛基与另一者的氨基结合生成khiff碱化学键合。2.—种IgG - IgM聚合物的聚合方法，其特征在于主要由下列步骤组成第一步、透析将IgM免疫球蛋白溶于pH值为7. 2的磷酸盐缓冲液中得到浓度为2mg/ml的IgM免疫球蛋白缓冲液，然后装入透析袋中，在2 8°C条件下，pH值为7. 2的磷酸盐缓冲液中透析 8 15小时；第二步、氧化移出第一步中透析后的IgM免疫球蛋白缓冲液，然后向所述透析后的IgM免疫球蛋白缓冲液中加入与其体积相等的浓度为43mg/ml的过碘酸钠水溶液，使IgM免疫球蛋白中的多糖基团中的羟基氧化反应后生成醛基得到氧化IgM免疫球蛋白水溶液，所述氧化反应的时间为25 35分钟，所述氧化反应的温度条件为2 8°C ；第三步、终止氧化向第二步得到的氧化IgM免疫球蛋白水溶液中加入与所述过碘酸钠水溶液体积相等的质量浓度为3%的乙二醇水溶液，然后在2 8°C条件下保持25 35分钟以终止所述氧化反应得到终止氧化IgM免疫球蛋白水溶液；第四步、抗体交联向第三步得到的终止氧化IgM免疫球蛋白水溶液中加入IgG免疫球蛋白，然后装入透析袋中，置于...

【专利技术属性】
技术研发人员：王智联，范宝臣，徐德鸣，
申请(专利权)人：江苏昶迅生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：32