内在化抗-CD74抗体和使用方法技术

本发明专利技术提供了人源化、嵌合和人抗-CD74抗体，CD74抗体融合蛋白，免疫缀合物，疫苗和与CD74，主要组织相容性复合物(MHC)II类恒定链，Ii结合的双特异性抗体，其可用于诊断和治疗B细胞病症例如B细胞恶性肿瘤，其中细胞可与CD74反应的其它恶性肿瘤和自身免疫性疾病，以及治疗和诊断方法。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本申请是申请日为2003年3月3日，申请号为03809863.6的、专利技术名称和本专利技术相同的专利技术专利申请的分案申请。专利技术背景1.专利
本专利技术涉及人源化、嵌合和人抗-CD74抗体或其片段或包含至少一种抗-CD74抗体，尤其是单克隆抗体(mAb)的抗体融合蛋白，人源化、嵌合和人抗-CD74mAb或其片段的治疗性和诊断性缀合物，和使用这些人源化、嵌合和人抗-CD74mAb或其片段来治疗和诊断B细胞淋巴瘤和白血病，除淋巴瘤和白血病以外的其中细胞是CD74抗原阳性的恶性肿瘤和多种自身免疫病和免疫失调病的方法。本专利技术涉及多价和/或多特异性抗-CD74mAb或其片段，其包含抗-CD74mAb或其片段的至少一个臂和针对毒性物质，如病原生物体，如癌细胞、寄生虫或感染因子的多特异性mAb的至少一个臂。本专利技术还涉及与抗原肽缀合的抗-CD74mAb或其片段。所述人源化、嵌合和人抗-CD74mAb，其片段，及其缀合物可单独或作为多元治疗方案的部分进行施用。本专利技术涉及编码人源化、嵌合和人抗-CD74抗体，和多价和/或多特异性抗-CD74mAb及其片段，及其治疗性，诊断性和抗原性缀合物的DNA序列，包含所述DNA序列的载体和宿主细胞，和制备人源化、嵌合和人抗-CD74抗体的方法。2.专利技术背景免疫疗法的一个主要目标是固定防御肿瘤细胞或感染性生物体的患者免疫系统。关于癌症治疗，该目标涉及防御肿瘤细胞的患者免疫系统。非霍奇金淋巴瘤(NHL)，多发性骨髓瘤和慢性和急性淋巴细胞性白血病是仍为癌症死亡重要原因的B细胞恶性肿瘤。这些恶性肿瘤对多种治疗的应答是混合性的。诱导T-淋巴细胞应答是个体的免疫应答中的关键初始步骤。T细胞活化导致T细胞增殖，T细胞产生细胞因子和T细胞-介导的效应子作用的产生。T细胞活化需要通常被称为初级活化信号的抗原-特异性信号，该信号由存在于T细胞表面的同源分布的T细胞受体(TcR)的刺激生成。该抗原-特异性信号通常的形式是与抗原呈递细胞(APC)的表面上呈递的主要组织相容性复合体(MHC)I类蛋白质或MHC II类蛋白质结合的抗原肽。人类的MHC分子被称为HLA(人白细胞抗原)分子。发现II类分子存在于有限数量的细胞类型，主要是B细胞，单核细胞/巨噬细胞和树突细胞上，在大多数情况下，其呈递源自来自细胞外环境的蛋白的肽。MHC II类位于与细胞外环境交通的细胞区室中。在人中，MHC-II分子包含HLA-DR，HLA-DQ和HLA-DP分子，其存在于多种遗传编码的等位基因上。因此，例如，来自细胞外环境的细菌抗原可被摄取和被抗原呈递细胞的细胞内处理后呈递在其细胞表面上。CD4+T细胞识别与II类分子相关的肽。与放射性核素或其它细胞毒害剂缀合的靶向性单克隆抗体的使用提供了将所述药剂直接递送至肿瘤位点的可能性，从而限制了正常组织暴露于毒性药剂(Goldenberg，Semin.Nucl.Med.，19：332(1989))。近年来，基于抗体的治疗的潜能及其在肿瘤相关抗原定位中的准确度已经在实验室和临床研究中得到证实(例如，参见Thorpe，TIBTECH，-->11：42(1993)；Goldenberg，Scientific American，Science & Medicine，1：64(1994)；Baldwin等U.S.4,925,922和4,916,213；Young，U.S.4918163；U.S.5,204,095；Irie等U.S.5,196,337；Hellstrom等U.S.5,134,075和5,171,665)。一般而言，抗肿瘤相关标记物的放射标记的抗体或抗体片段在肿瘤定位中的应用要比治疗更成功，部分因为肿瘤对抗体的摄取通常低，仅为总注射剂量的0.01％～0.001％(Vaughan等Brit.J.Ra dio.，60：567(1987))。增加放射性标记物的浓度来增加对肿瘤的剂量通常起反作用，因为其也增加了健康组织对放射能的暴露量。鼠LL1(mLL1或鼠抗-CD74抗体)是与CD74，II类HLA样抗原，即，B-淋巴细胞，单核细胞和组织细胞，人B-淋巴瘤细胞系，黑素瘤，T细胞淋巴瘤和多种其它肿瘤细胞类型表面上的不变链(Ii决定子)发生反应的特异性单克隆抗体(mAb)(Hansen等Biochem.J.320：293(1996))。结合于细胞表面的LL1被溶酶体区室快速内在化然后被快速地分解，速度要远快于其它mAb，如抗-CD19和抗-CD22。同前。LL1的该固有特性克服了免疫治疗的某些前述困难。鼠LL1由小鼠骨髓瘤细胞和来自用源自Raji B-淋巴瘤细胞系的制剂(在Pawlak-Byczkows ka等Can.Res.，49：4568(1989)中称为EPB-1)免疫的BALB/c小鼠的脾细胞融合发展而来。mLL1的临床应用，如同大多数其它确信的鼠抗体一样，由于人抗-小鼠抗体(HAMA)响应在人中的发展而受到局限。在注射了mLL1Fab′后，通常不能检测到HAMA响应，如通过利用99MTC标记的mLL1Fab′骨髓成像研究所示。Juweid等Nuc.Med Comm.18：142-148(1997)。然而，在某些治疗性和诊断性用途中，可优选全长抗-CD74mAb。该全长抗-CD74mAb的用途可限制所述抗体和抗体缀合物的诊断和治疗有效性，不仅仅是因为潜在的致过敏问题，还可能是因为其作为循环缀合物的主要部分可与循环抗-小鼠抗体复合并被隔离。虽然mLL1的抗体片段的应用可以绕过免疫原性问题，仍存在更需要完整IgG和诱导用于治疗的细胞免疫或增强的抗体存活时间的情况。一般而言，HAMA响应是对鼠抗-CD74mAb的全部诊断和治疗潜能认识的障碍。因此，嵌合、人源化和人抗-CD74mAb及其片段，其抗体融合蛋白及其片段，免疫缀合物用于治疗和诊断的发展，多价和/或多特异性mAb，及其片段及其疫苗缀合物将在降低人抗-小鼠抗体制备的情况下非常适用于治疗和诊断。专利技术概述本专利技术涉及可被快速内在化进入细胞的抗-CD74抗体及其片段及其抗体融合蛋白，尤其是嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。本专利技术还涉及包含彼此融合和/或与本专利技术的其它抗体及其片段融合的抗体或其片段的抗-CD74抗体融合蛋白。本专利技术还涉及包含连接于诊断剂或治疗剂上的本专利技术的抗-CD74抗体或其片段或抗体融合蛋白或其片段的免疫缀合物。本专利技术还涉及包含抗体缀合物的疫苗，所述抗体缀合物含有连接于抗原肽的本专利技术的抗-CD74抗体或其片段或抗体融合蛋白或其片段。本专利技术还涉及双特异性或多特异性抗体，其包含抗体缀合物，所述缀合物包含连接于特异性针对癌标记物、感染性疾病生物体上的表位或血液或其它体液中毒性物质的抗-->体或抗体片段的本专利技术的抗-CD74抗体或其片段或抗体融合蛋白或其片段。本专利技术还涉及使用本专利技术的CD74抗体及其片段或其抗体融合蛋白及其缀合物治疗和诊断疾病的方法。本专利技术还涉及编码CD74抗体或其片段或抗体融合蛋白或其片段，免疫缀合物和抗体缀合物及其多特异性抗体的DNA序列，包含该DNA序列的表达载体和宿主细胞，和表达本专利技术的这些CD74抗体的方法。附图简介图1显示了鼠LL1重和轻链可变区的DNA和氨基酸序列。图1A显示了由RT-PCR本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．嵌合抗－ＣＤ７４（ｃＣＤ７４）单克隆抗体、（ｍＡｂ）或其片段，其中包含含有鼠抗－ＣＤ７４ｍＡｂ的互补决定区（ＣＤＲ）和鼠抗－ＣＤ　７４ｍＡｂ的构架区（ＦＲ）的轻链和重链可变区和人抗体的轻链和重链恒定区，其中所述嵌合ｍＡｂ的轻链可变区包含鼠抗－ＣＤ７４ｍＡｂ轻链可变区的ＣＤＲ，所述ＣＤＲ包括含有ＲＳＳＱＳＬＶＨＲＮＧＮＴＹＬＨ氨基酸序列的ＣＤＲ１，含有ＴＶＳＮＲＦＳ氨基酸序列的ＣＤＲ２，和含有ＳＱＳＳＨＶＰＰＴ氨基酸序列的ＣＤＲ３，而其中所述嵌合ｍＡｂ的重链可变区包含鼠抗－ＣＤ７４ｍＡｂ重链可变区的ＣＤＲ，所述ＣＤＲ包括含有ＮＹＧＶＮ　　氨基酸序列的ＣＤＲ１，含有ＷＩＮＰＮＴＧＥＰＴＦＤＤＤＦＫＧ　　氨基酸序列的ＣＤＲ２和含有ＳＲＧ　ＫＮＥＡＷＦＡＹ氨基酸序列的ＣＤＲ３。

【技术特征摘要】
2002.03.01 US 60/3602591.嵌合抗-CD74(cCD74)单克隆抗体、(mAb)或其片段，其中包含含有鼠抗-CD74mAb的互补决定区(CDR)和鼠抗-CD 74mAb的构架区(FR)的轻链和重链可变区和人抗体的轻链和重链恒定区，其中所述嵌合mAb的轻链可变区包含鼠抗-CD74mAb轻链可变区的CDR，所述CDR包括含有RSSQSLVHRNGNTYLH氨基酸序列的CDR1，含有TVSNRFS氨基酸序列的CDR2，和含有SQSSHVPPT氨基酸序列的CDR3，而其中所述嵌合mAb的重链可变区包含鼠抗-CD74mAb重链可变区的CDR，所述CDR包括含有NYGVN  氨基酸序列的CDR1，含有WINPNTGEPTFDDDFKG  氨基酸序列的CDR2和含有SRG KNEAWFAY氨基酸序列的CDR3。2.权利要求1的嵌合抗-CD74mAb或其片段，其中所述mAb或其片段包括图.2A的重链可变区和图.2B的轻链可变区。3.权利要求1的嵌合抗-CD74mAb或其片段，其中所述mAb或其片段是嵌合IgG1。4.人抗-CD74(huCD74)单克隆抗体(mAb)或其片段，其中包含人抗体的轻链和重链可变区和恒定区，其中所述人抗-CD74mAb轻链可变区的huCD74 CDR包括含有RSSQSLVHRNGNTYLH氨基酸序列的CDR1，含有TVSNRFS氨基酸序列的CDR2，和含有SQSSHVPPT氨基酸序列的CDR3，而其中所述人mAb的重链可变区包括鼠抗-CD74mAb重链可变区的CDR，所述CDR包括含有NYGVN氨基酸序列的CDR1，含有WINPNTGEPTFDDDFKG氨基酸序列的CDR2和含有SRGKNEAWFAY氨基酸序列的CDR3。5.权利要求4的人抗-CD74mAb或其片段，其中所述mAb或其片段是人IgG1。6.权利要求1-5任一项的人或嵌合抗-CD74mAb或其片段，其中包含至少一种下述特性：(a)所述mAb或其片段与CD-74的结合被特异性针对CD74的抗体或其片段阻断；(b)所述mAb或其片段被培养物中的Raji淋巴瘤细胞内在化；和(c)所述mAb或其片段当与山羊抗血清交联时诱导细胞培养物中的Raji淋巴瘤细胞的凋亡，所述山羊抗血清可与鼠IgG1mAb的Fc反应。7.权利要求1-6任一项的人或嵌合抗-CD74mAb或其片段，其中所述片段是F(ab′)2、Fab、scFv、Fv、或使用F(ab′)2、Fab、scFv或Fv的部分或全部轻链和重链的融合构建体，及其中所述片段与CD74结合。8.权利要求7的人或嵌合抗-CD74MAb或其片段，其中所述融合蛋白是多价的，或多价且多特异性的。9.权利要求1-8任一项的人或嵌合抗-CD74mAb或其片段，其中所述IgG1的恒定区被人IgG2a、IgG3或IgG4的人恒定区置换。10.包含一个或多个权利要求1-9任一项的mAb或其片段的抗体融合蛋白。11.权利要求10的抗体融合蛋白，其还含有一个或多个特异性针对不是CD74的肿瘤细胞标记物的抗体或及片段。12.权利要求11的抗体融合蛋白，其中所述肿瘤细胞标记物选自B细胞家族抗原。13.权利要求11的抗体融合蛋白，其中所述肿瘤细胞标记物是选自CD19，CD20，CD22，HLA-DR，CD30，CD33，CD52，MUC1和TAC的抗原。14.一种免疫缀合物，其中包括包含至少一种权利要求1-13任一项的与CD74结合的mAb或其片段或其抗体融合蛋白的抗体成分，其中将所述抗体成分连接于诊断剂或治疗剂上。15.一种治疗组合物在制备用于一种治疗疾病或病症的方法的药剂中的用途，所述治疗组合物包含药学上可接受的载体和至少一种权利要求1-14任一项的mAb或其片段或其抗体融合蛋白或免疫缀合物。16.权利要求15的用途，其中所述疾病或病症选自表达CD74的恶性肿瘤，免疫失调病，自身免疫性疾病，器官移植排斥和移植物抗宿主病。17.权利要求16的用途，其中所述表达CD74的恶性肿瘤选自实体瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤，另一B细胞恶性肿瘤和T细胞恶性肿瘤。18.权利要求17的用途，其中所述表达CD74的恶性肿瘤选自黑素瘤、癌、肉瘤、肾癌、肺癌、肠癌、胃癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤，霍奇金淋巴瘤，低度恶性B细胞淋巴瘤，侵袭性B细胞淋巴瘤、慢性淋巴性白血病、急性淋巴性白血病和多发性骨髓瘤。19.权利要求15-18任一项的用途，其中所述mAb或其片段或其抗体融合蛋白以20～2000mg的剂量经静脉内或肌内施用。20.权利要求15-19中任一项的用途，其中所述mAb或其片段或其抗体融合蛋白在施用至少一种治疗剂之前、期间或之后施用，其中所述治疗剂选自抗体、免疫调节剂、激素、细胞毒害剂、酶和与至少一种免疫调节剂、放射性核素、酶、激素、细胞毒害剂、反义寡核苷酸或其组合缀合的抗体。21.权利要求20的用途，其中所述细胞毒害剂是药物或毒素。22.权利要求20的用途，其中所述免疫调节剂选自细胞因子、干细胞生长因子、淋巴毒素、血细胞生成因子、集落刺激因子、干扰素、促红细胞生成素、促血小板生成素或其组合，其中所述血细胞生成因子是选自IL-1、IL-2、IL-3、IL-6、IL-10、IL-12、IL-18、IL-21及其组合的白介素，所述淋巴毒素是肿瘤坏死因子，所述干扰素选自α-干扰素、β-干扰素和γ-干扰素，所述集落刺激因子是粒细胞-集落刺激因子(G-CSF)或粒细胞巨噬细胞-集落刺激因子(GM-CSF)。23.权利要求20的用途，其中所述抗体选自可与CD4，CD5，CD8，CD14，CD15，CD19，CD20，CD21，CD22，CD23，CD25，CD30，CD33，CD37，CD38，CD40，CD40L，CD46，CD52，CD54，CD80，CD126、B7、MUC1、腱生蛋白、Ia、HM1.24和HLA-DR反应的mAb或其片段，在药学上可接受的载体中配制。24.一种治疗组合物在制备用于一种治疗恶性肿瘤的方法的药剂中的用途，包括对患有除淋巴瘤或白血病外的CD74抗原阳性恶性肿瘤的个体施用包含药学上可接受的载体和至少一种权利要求1-14任一项的mAb或其片段或其抗体融合蛋白的治疗组合物。25.权利要求24的用途，其中mAb或其片段或其抗体融合蛋白在施用至少一种用于治疗恶性肿瘤的治疗剂之前、期间或之后施用。26.权利要求25的用途，其中所述治疗剂包括抗体、免疫调节剂、激素、细胞毒害剂、药物、毒素、酶、放射性核素和与至少一种免疫调节剂、酶、放射性标记物、激素、反义寡核苷酸或细胞毒害剂或其组合缀合的抗体。27.权利要求26的用途，其中所述抗体选自可与除CD74外的，由包含要被治疗的恶性肿瘤的细胞所表达的肿瘤标记物反应的mAb或其片段，所述mAb或其片段在药学上可接受的载体中配制。28.一种治疗组合物在制备用于一种治疗患有至少一种按免疫失调病和自身免疫性疾病进行诊断的疾病的个体的方法的药剂中的用途，包括对所述个体施以包含药学上可接受的载体和至少一种权利要求1-14任一项的mAb或其片段或其抗体融合蛋白的治疗组合物。29.权利要求28的用途，其中mAb或其片段或其抗体融合蛋白在施用至少一种用于治疗疾病的治疗剂之前、期间或之后施用。30.一种治疗组合物在制备用于一种治疗选自淋巴瘤、白血病、其它表达CD-74的恶性肿瘤、免疫失调病，自身免疫性疾病及其组合的疾病的方法的药剂中的用途，所述治疗组合物包含药学上可接受的载体和至少一种权利要求1-14任一项的mAb或其片段或其抗体融合蛋白，其中通过化学缀合或基因融合将至少一种治疗剂连接于mAb或其片段或其抗体融合蛋白上。31.权利要求30的用途，其中所述治疗剂包括免疫调节剂、放射性标记物、激素、酶、细胞毒害剂、药物或毒素。32.一种诊断组合物在制备用于一种疾病诊断方法的药剂中的用途，包括对已诊断为或疑为患有至少一种选自淋巴瘤、白血病、其它表达CD-74的恶性肿瘤、免疫失调病，自身免疫性疾病及其组合的疾病的个体施以包含药学上可接受的载体和至少一种权利要求1-14任一项的mAb或其片段或其抗体融合蛋白的诊断组合物，其中通过化学结合将诊断剂连接于mAb或其片段或其抗体融合蛋白上。33.权利要求32的用途，其中所述诊断剂是可通过放射闪烁照相或PET检测的放射性同位素，可通过MRI检测的金属，或可通过超声检测的脂质体或气充的脂质体。34.一种包含权利要求1-14任一项的mAb或其片段共价连接于I类或II类MHC抗原肽而形成的抗体缀合物的疫苗，其中疫苗用于治疗癌症患者或感染性疾病患者。35.权利要求34的疫苗，其中I类或II类抗原肽通过蛋白水解消化而通过抗原呈递细胞从与所述mAb或其片段相连的较大肽或蛋白质中释放。36.权利要求34或35的疫苗，其中通过融合编码mAb或其片段的cDNA和编码抗原肽或蛋白质的cDNA，和在细菌、酵母或哺乳动物细胞中表达抗体融合蛋白来制备抗体缀合物。37.一种双特异性或多特异性抗体，其中将权利要求1-14任一项的mAb或其片段或其抗体融合蛋白连接于特异性针对癌症或炎性细胞标记物、感染性疾病生物体表面上的表位或血液或其它体液中的有毒物质的抗体或抗体片段上。38.包含核酸的DNA序列，所述核酸编码的mAb或其片段选自(a)权利要求1-14任一项的抗-C...

【专利技术属性】
技术研发人员：H·汉森，S·O·梁，Z·屈，D·M·戈登伯格，
申请(专利权)人：免疫医疗公司，
类型：发明
国别省市：US