一种基因重组技术领域的金属离子-蛋白质/高分子水相-水相混悬剂的制备方法，其特征在于，首先将蛋白质、高分子溶液和金属盐混合后混合分散为混悬剂，然后对混悬剂进行预冻，然后冻干以除去水相，得到金属离子-蛋白质/高分子干燥的样品，该样品重新加水可以得到具有活性的蛋白药物的混悬剂。本发明专利技术得到的蛋白质药物和金属盐水溶液在水溶性的高分子水溶液形成混悬剂，在室温至少可以稳定一星期。该混悬剂可以用来制备稳定的蛋白质颗粒和保持蛋白质的生物活性等作用，还可以用来作为口服或注射用药等。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及的是一种基因重组
的方法，具体是一种金属离子-蛋白质/ 高分子水相-水相混悬剂的制备方法。
技术介绍
基因重组技术用于治疗蛋白的表达和生产的20多年以来，到目前为止，已有30 多个蛋白药物产品投入临床使用，近200个在审批和研发过程中，涌现出一批诸如安进 (Amgen)、基因技术(Genentech)等一批新的大型医药公司。相对于蛋白大分子药物本身的快速发展，其剂型技术进展缓慢。一方面，蛋白大分子药物口服不吸收、体内半衰期短，需要注射给药；另一方面，许多何尔蒙、细胞因子类的蛋白药物药物治疗周期长，长期而频繁地注射成为必须，也影响患者顺应性的主要原因。缓释蛋白药物的剂型的研发，由于在制备微粒过程导致活性的损失诸如W/0/W法等。发展制备具有活性的微粒势在必行。经过对现有技术的检索发现，Stenekes等人利用修饰的葡聚糖和PEG水相制备混悬液，但是非常不稳定，一旦停止搅拌就分相的报道，如Stenekes. R. J. H.，Franssen. 0.，van Bomme 1. Ε. Μ. G，在国际药剂学杂志上发表了 Crommelin. J. A. D.，Hennink. W. E. The use of aqueouse PEG/dextran phase separation for the preparation of dextran microspheres.《利用聚乙二醇和葡聚糖相分离法制备微球》International Journal of Pharmaceutics, 1999，183 :29_32，而葡聚糖和PEG是常用来蛋白药物的冻干保护剂和分离纯化蛋白的试剂。到目前还未见在水溶性的环境下，不用表面活性剂在高分子水溶液中制备定的蛋白质药物_金属水相_水混悬剂的方法报道。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术存在的上述不足，提供一种金属离子_蛋白质/高分子水相-水相混悬剂的制备方法，得到的蛋白质药物和金属盐水溶液在水溶性的高分子水溶液形成混悬剂，在室温至少可以稳定一星期(不用任何外界作用，都不分层)。该混悬剂可以用来制备稳定的蛋白质颗粒和保持蛋白质的生物活性等作用，还可以用来作为口服或注射用药等。本专利技术是通过以下技术方案实现的，本专利技术首先将蛋白质、高分子溶液和金属盐混合后混合分散为混悬剂，然后对混悬剂进行预冻，然后冻干以除去水相，得到金属离子-蛋白质/高分子干燥的样品，该样品重新加水可以得到具有活性的蛋白药物的混悬剂。所述的蛋白质是指神经营养因子、干扰素或人生长激素；所述的高分子溶液是指聚乙二醇(PEG)溶液、聚维酮(PVP)溶液、聚乙烯醇 (PVA)或葡聚糖(Dex)溶液；所述的金属盐是指=Zn(AC)2· 2H20、ZnCl2、或 ZnSO4 ；蛋白质的用量为总液体混悬剂质量的0. 1-10%，锌盐占0. 01-5%，和高分子水溶液占 85-99. 89%o3所述的聚乙二醇的分子量为2000-22000 ；所述的葡聚糖的分子量为1000-5000000 ；所述的聚维酮的分子量为12000-90000 ；所述的聚乙烯醇的分子量为20000 200000 ；所述的高分子溶液的百分比浓度1-30% ；所述的混合分散是指采用摇晃、超声、勻质化、涡旋或离心的方式进行分散，所述的离心是指采用离心机在12000rpm环境下处理5min并去除上清液，重复该处理三次。本专利技术的选择了合适高分子溶液、及利用蛋白药物和锌盐形成复合物在具有高黏度高分子溶液不容易沉降的特性；然后把具有活性的蛋白药物和锌盐形成的复合物保持高稳定性，防止在注射此类药物，被堵塞针管，造成大量的药物不能有效的注射到病人体内。本专利技术通过上述方法制备得到的金属离子_蛋白质/高分子水相_水相混悬剂， 最少可以稳定7天，且不分层且粒径可以根据需要进行调控从0. 01 μ m到5 μ m。本专利技术制备得到的混悬剂大小的均勻度好，可以根据需要进行调控从0. 01 μ m到 5 μ m,混悬剂的径距分布较窄，其冻干粉剂为白色细腻，疏松，不塌陷，再分散性良好。可以运用到各种药物缓释微球的制备及疫苗的佐剂。本专利技术选择了合适的连续相和分散相，可以在完全不用表面活性剂制备稳定的混悬剂。可以避免表面活性剂对药物的治疗的作用影响，尤其是那些物理化学性质不稳定的， 如生物大分子药物蛋白药物等。附图说明图1为聚维酮-Zn2+-重组人生长素混悬剂的稳定性图。图2为PEG-Zn2+-重组人干扰素混悬剂的稳定性图；图中(a)为不同浓度的PEG对混悬剂的影响；(b)为不同分子量对混悬剂的影响。图3为PVA-Zn2+-胰岛素混悬剂的稳定性图；图中(a)为不同浓度的PVA 1. 3-2. 6万对混悬剂的稳定性影响；(b)为不同浓度的PVA 12. 4万对混悬剂的稳定性影响。图4为葡聚糖-Zn2+-重组人干扰素混悬剂的稳定性图；图中(a)为不同浓度的葡聚糖(500000)对混悬剂的稳定性影响；(b)为不同浓度的葡聚糖(64000-70000)对混悬剂的稳定性影响。图5为混悬剂微粒的粒径分布。具体实施例方式下面对本专利技术的实施例作详细说明，本实施例在以本专利技术技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本专利技术的保护范围不限于下述的实施例。实施例1稳定的金属盐_蛋白质/PEG水相-水相混悬剂的制备在25°C把Img的重组人生长素和0. Img Zn (AC)2 ·2Η20加到20%的PEG8000溶液 99mg旋涡30s-60s充分混勻，形成混悬剂，混悬剂的颗粒大小0. 5 μ m-2 μ m。如图1所示，为聚维酮-Zn2+-重组人生长素混悬剂的稳定性图；图中重量百分比浓度为30%的聚维酮(PVP)可使Zn2+-重组人生长素稳定一周以上；且随着PVP的浓度增大稳定性增强；取2. 5g PVP和0. IOOg重组人生长素；0. 050g Zn(AC)2 ·2Η20混勻得到一混悬剂。如图2所示，为PEG-Zn2+-重组人干扰素混悬剂的稳定性图；其中(a)为不同浓度的PEG对混悬剂的影响；(b)为不同分子量对混悬剂的影响20%的PEG(分子量8000， 6000)均可以使Zn2+-重组人干扰素稳定一周以上；取2. 5gPEG和0. IOOg重组人干扰素；0.050g Zn (AC)2 · 2H20 混勻得一混悬剂。如图3所示，为PVA-Zn2+-胰岛素混悬剂的稳定性图；图中(a)为不同浓度的PVA1.3-2. 6万对混悬剂的稳定性影响；(b)为不同浓度的PVA 12. 4万对混悬剂的稳定性影响； 15%的可以稳定PVA1. 3-2. 6万Zn2+-胰岛素一周以上，5%的可以稳定PVA 12. 4万Zn2+-胰岛素一周以上，取2. 5gPVA和0. IOOg胰岛素；0. 050g Zn (AC)2 · 2H20混勻得一混悬剂。如图4所示，为葡聚糖-Zn2+-重组人干扰素混悬剂的稳定性图；图中(a)为不同浓度的葡聚糖(500000)对混悬剂的稳定性影响；(b)为不同浓度的葡聚糖(64000-70000) 对混悬剂的稳定性影响；取2. 5g Dextran和0. IOOg重组人干扰素；0. 050g Zn(AC)2 ·2Η20 混勻得一混悬剂。实施例2本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种金属离子－蛋白质／高分子水相－水相混悬剂的制备方法，其特征在于，首先将蛋白质、高分子溶液和金属盐混合后混合分散为混悬剂，然后对混悬剂进行预冻，然后冻干以除去水相，得到金属离子－蛋白质／高分子干燥的样品，该样品重新加水可以得到具有活性的蛋白药物的混悬剂。
【技术特征摘要】
1.一种金属离子-蛋白质/高分子水相-水相混悬剂的制备方法，其特征在于，首先将蛋白质、高分子溶液和金属盐混合后混合分散为混悬剂，然后对混悬剂进行预冻，然后冻干以除去水相，得到金属离子-蛋白质/高分子干燥的样品，该样品重新加水可以得到具有活性的蛋白药物的混悬剂。2.根据权利要求1所述的金属离子-蛋白质/高分子水相-水相混悬剂的制备方法，其特征是，所述的蛋白质是指神经营养因子、干扰素或人生长激素；所述的高分子溶液是指聚乙二醇溶液、聚维酮溶液、聚乙烯醇或葡聚糖溶液；所述的金属盐是指 Zn(AC)2 · 2H20、ZnCl2、或 ZnSO4。3.根据权利要求2所述的金属离子-蛋白质/高分子水相-水相混悬剂的制备方法， 其特征是，所述的蛋白质的用量为总液体混悬剂质量的0. 1-10%，锌盐占0.01-5%...
【专利技术属性】
技术研发人员：袁伟恩，金拓，吴飞，胡振华，郑瑞媛，冯艳，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：31
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