大孔载体“同步法”共价交联-固载木瓜蛋白酶聚体及方法技术

本发明专利技术涉及一种大孔载体“同步法”共价交联-固载木瓜蛋白酶聚体及方法；木瓜蛋白酶聚体是在孔径大于0.5μm的载体的孔道中填埋有木瓜蛋白酶。以表面具有羟基的无机或有机大孔材料为固定化酶载体，经载体表面氨基改性、酶吸附、酶沉淀、同步交联最终实现交联木瓜蛋白酶聚体的形成和与大孔载体共价连接的同步完成。制得的固载化酶载酶量高于普通载体固定化酶；采用共价固定方法避免了应用大孔载体造成的酶泄漏，载体形状可依据实际需要调整，最适催化温度和pH，溶剂及热稳定性均有显著改善。本发明专利技术还可应用于其他蛋白酶及脂肪酶、淀粉酶、葡萄糖异构酶、青霉素酰化酶、纤维素酶、果胶酶、氧化酶、L-天冬酰胺酶、天冬氨酸酶、过氧化物酶等。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种新型固定化酶生物催化剂的制备方法，特别是一种使用大孔材料为载体“同步法”共价交联-固载木瓜蛋白酶聚体及方法，属于酶的固定化

技术介绍
交联酶聚体(cross-linked enzyme aggregates, CLEAs)是一种新型的固定化酶方法，在制备过程中首先利用沉淀剂使溶解态的酶聚集沉淀，随后对酶沉淀聚体进行共价交联。该方法制得的固定化酶具有较宽的最适催化PH范围和较宽的最适催化温度范围，对高温、有机溶剂、强酸强碱等具有较高的稳定性，是一种高效、稳定的固定化酶方法。然而， CLEAs的机械强度相对较低，粒径较小(通常为微米级)，采用普通的过滤方法难以回收，限制了其在工业上的利用。因此，利用载体固定CLEAs以提高CLEAs机械稳定性和操作回用性的方法近几年来备受关注。2007年Kim等人自制了一种内孔径37nm，通道直径13nm的分子蹄载体 HMMS (Hierarchically-ordered Mesocellular Mesoporous Silica),并米用先吸附后交联两步的方法令酶物理填埋在37nm的内孔形成CLEAs，而不会从13nm本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种使用大孔材料为载体“同步法”共价交联－固载木瓜蛋白酶聚体的方法，其特征是步骤如下：（１）载体表面氨基改性所选载体为表面具有羟基基团的无机或有机材料，将载体洗净，于９０～１２０℃烘干至质量不再改变；将１０～３０ｍＬ硅烷偶联剂与无水乙醇以１∶１～１∶３比例均匀混合５～３０ｍｉｎ，然后加入２～１０ｇ载体材料，令载体质量与硅烷偶联剂体积比为１∶３～１∶５（ｇ∶ｍＬ），于５０～７０℃水浴中减压旋蒸至液体不再减少；用乙醇洗涤载体３～４次，放于９０～１２０℃烘箱中干燥过夜至质量不再改变，载体表面氨基含量达到５～１５μｍｏｌ／ｇ；（２）木瓜蛋白酶的吸附用ｐＨ为４～１０的磷酸缓冲液溶解木瓜蛋白酶，配成浓...

【技术特征摘要】
1.一种使用大孔材料为载体“同步法”共价交联-固载木瓜蛋白酶聚体的方法，其特征是步骤如下(1)载体表面氨基改性所选载体为表面具有羟基基团的无机或有机材料，将载体洗净，于90 120°C烘干至质量不再改变；将10 30mL硅烷偶联剂与无水乙醇以1 1 1 3比例均勻混合5 30min，然后加入2 IOg载体材料，令载体质量与硅烷偶联剂体积比为1 3 1 5(g mL)，于50 70°C水浴中减压旋蒸至液体不再减少；用乙醇洗涤载体3 4次， 放于90 120°C烘箱中干燥过夜至质量不再改变，载体表面氨基含量达到5 15 μ mol/g ；(2)木瓜蛋白酶的吸附用pH为4 10的磷酸缓冲液溶解木瓜蛋白酶，配成浓度为0. 05 0. 25g/mL的木瓜蛋白酶溶液；取1 5mL此酶溶液，加入氨基改性后的大孔载体颗粒1 5g，于4 25°C下振摇吸附2 Mi ；(3)木瓜蛋白酶沉淀吸附结束后，用磷酸缓冲液洗涤载体颗粒一次；随后将吸附有木瓜蛋白酶的载体颗粒 1 5g加入到1 IOmL沉淀剂中，继续振摇10 30min ...

【专利技术属性】
技术研发人员：齐崴，王梦凡，苏荣欣，何志敏，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：12