本发明专利技术涉及一种以芦苇地表根须为载体的石油降解菌固定化方法，以强化自然湿地对石油污染水体的净污能力，其特征在于首先是用被石油污染的土壤筛选出纯化的石油降解菌种；然后将上述菌种接种于液体富集培养基而培养出石油降解菌浊液，最后取配制好的石油降解菌悬浊液加入海藻酸钠，混合后均匀地喷洒到芦苇根须上５小时后达到固定化，即将石油降解菌固定在湿地芦苇地表根须上。本发明专利技术具有材料来源广泛、工艺简单、费用低、净化效果好，并且即使取较低浓度的石油降解菌悬浊液也能达到很好的降解效果，可在芦苇湿地大面积推广使用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于强化自然湿地净污功能领域，特别涉及到。
技术介绍
当前我国地表水体一半以上均受到不同程度的污染，严重影响到人们的生产和生 活。净化污染地表水体的方法很多，主要分为物理净化法、化学净化法和生物净化法。其中 物理净化法是采用物理的、机械的方法对污染地表水体进行人工净化，该类方法工艺简单， 但费用高且治标不治本。化学净化法主要是指向污染的水体中投加化学药剂，通过药剂与 污染物质发生化学反应，使水体中的污染物得以去除，该类方法投资大，在时效和大水域或 水体流动性大的地方也有一定的局限性，还易造成二次污染。生物净化法是利用水生植物 对污染物质的吸收和吸附功能以及微生物的降解作用，并采用人工措施来创造更有利于水 生植物和微生物生长和繁殖的环境，培育出大量净化能力强的水生植物和微生物，以提高 对污染水体中有机物氧化降解效率的一种净化方法，该类方法投资省，净化效果好，同时还 能促进水域生态系统的自然恢复，目前使用频率最多是湿地净化。 应用湿地净化污染水体大多采用人工湿地，费时费力。我国自然湿地面积大、分布 广，如合理加以利用既可以净化水体又可以节约人力物力。但由于技术问题，自然湿地净化 污染地表水体的应用还比较少。鉴于自然湿地净污的主要是利用湿地土壤的吸附作用、湿 地植物的吸收作用及其植物根际微生物的降解作用，在自然条件下，湿地的净污能力十分 有限，尤其是针对特殊污染物。而通过延长污水在湿地内的水力停留时间，以期提高自然湿 地的净化效果，又会因过长的停留时间而导致污染物在土壤中累积，从而影响湿地的生产 能力。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种以芦苇地表裸露根须为载体的石油降解菌固定化方法， 以强化自然湿地对石油污染水体的净污能力，克服已有技术的不足。 本专利技术以石油污染的湿地芦苇地表裸露的根须为载体，从现场湿地采集的石油污 染土壤中进行石油降解菌的分离，并实验室驯化和培养，获得耐盐型石油降解菌，再将其固 定在芦苇根须载体表面，具体方法包括如下步骤 1、石油降解菌的筛选 (1)将石油污染的土壤10g，放入250mL锥形瓶，用100mL生理盐水充分混匀，待土 壤中微生物全部释放到生理盐水后，静置待固液分离。取其上清液lmL加入液体富集培养 基中，在3(TC、120r 'min—1的条件下于振荡培养箱中培养7 10天。待培养液混浊后，再从 中移取lmL液体加入新的液体富集培养基中，培养条件同上，重复同样操作至少三次以上； 从上述的液体富集培养基中吸取0. 2mL菌液均匀涂布于固体筛选培养基平板上，在3(TC恒 温培养，直至长出菌落；选择其中比较大的单菌落，划线转接入新的固体筛选培养基中，进行培养。待长出新菌落后，再重复上述操作，直至得到纯化的石油降解菌种。 2、配制石油降解菌悬浊液 将上述纯化的石油降解菌，用接种环挑取一部分接种于液体富集培养基中，在 120r/min、3(TC条件下培养5天，待菌液浑浊后进行涂板计数，确定配制好的石油降解菌悬 浊液浓度为2. 85 X 106 5. 7 X 106个/mL。 上述的液体富集培养基的成分包括柴油lg/L， NaN03 3. Og/L， K2HP04 0. 5g/L， KH2P04 0. 5g/L， MgS04 7H20 0. 5g/L， KC1 0. 5g/L， FeS04 7H20 0. 001g/L， CaCl20. 002g/L， pH 7. 0-7. 2。 3、石油降解菌的固定化 (1)根须的预处理将在湿地采集的芦苇的地表根须，用无菌水浸泡12小时洗净， 再用无水乙醇浸泡5小时后晾干。 (2)固定化称取0.7g芦苇根须均匀铺于培养皿中；取浓度在2.85X 106 5. 7X 106个/mL范围内的石油降解菌悬浊液50mL再加入海藻酸钠0. lg，混合后均匀地喷 洒到芦苇根须上5小时后达到固定化。 本专利技术具有材料来源广泛、工艺简单，费用低，净化效果好，且可用于实际芦苇湿 地的大面积推广使用等优点。具体实施例方式本专利技术根据辽河河口湿地普遍受到石油污染的实际情况，以戸苹湿地地表裸露的 根须为载体，从现场湿地采集的石油污染土壤中进行石油降解菌的分离，并实验室驯化和 培养，获得耐盐型石油降解菌，再将其固定在芦苇根须载体表面，具体步骤如下 1、石油降解菌的筛选 (1)将石油污染的土壤10g，放入250mL锥形瓶，用100mL生理盐水充分混匀，待土 壤中微生物全部释放到生理盐水后，静置待固液分离。 (2)自步骤(1)的上清液中移取lmL，加入液体富集培养基中，3(TC、120r 'min—1的 条件下在振荡培养箱中培养7 10天。待培养液混浊后，再从中移取lmL液体，加入新的 液体富集培养基中，培养条件同上，重复操作5次。 (3)从上述经5次培养之后的液体富集培养集中吸取0. 2mL菌液均匀涂布于固体 筛选培养基平板上，3(TC恒温培养，直至长出菌落；选择其中比较大的单菌落，划线转接入 新的固体筛选培养基中，进行培养。待长出新菌落后，再重复上述操作，直至得到纯化的石 油降解菌种。 2、配制石油降解菌悬浊液 将上述纯化的石油降解菌，用接种环挑取一部分接种于液体富集培养基中，120r/ min、3(TC培养五天。待菌液浑浊后进行涂板计数，确定配制好的石油降解菌悬浊液浓度为 5. 7Xl。6个/mL。 上述液体富集培养基的成分包括柴油lg/L， NaN03 3. Og/L， K2HP04 0. 5g/L， KH2P040. 5g/L， MgS04 7H20 0. 5g/L， KC1 0. 5g/L， FeS04 7H20 0. 001g/L， CaCl20. 002g/L， pH7. 0-7. 2。 3、石油降解菌的固定化 (1)根须的预处理将在辽河河口戸苹湿地采集戸苹的地表根须，用无菌水浸泡 12小时洗净，再用无水乙醇浸泡5小时后晾干。 (2)固定化根据辽河河口湿地芦苇地表根须的实际厚度，取适量芦苇根须均匀 铺于培养皿中；取步骤2的石油降解菌悬浊液加入海藻酸钠，混合后均匀地喷洒或滴到芦苇根须上进行固定化。 实施例1 取石油降解菌浓度为5. 70X 106个/mL的悬浊液50mL，加入0. lg海藻酸钠，混合 均匀后均匀地滴到芦苇根须上，固定化5小时后，将石油降解菌固定化载体浸入模拟辽河 河口石油污染的微污染水中(100mL海水+300mL自来水+lg柴油)。在室温16。C条件下20 天后，石油降解菌固定化载体对石油微污染水的净化效果为60%。 实施例2 取石油降解菌浓度为3. 82Xl(f个/mL悬浊液50mL，加入0. lg海藻酸钠，混合均 匀后均匀地滴到芦苇根须上，固定化5小时后，将石油降解菌固定化载体浸入模拟辽河河 口石油污染的微污染水中(100mL海水+300mL自来水+18柴油)。在室温16。C条件下20 天后，石油降解菌固定化载体对微污染水的净化效果为59%。 实施例3 取石油降解菌浓度为2. 85Xl(f个/mL悬浊液50mL，加入0. lg海藻酸钠，混合均 匀后均匀地滴到芦苇根须上，固定化5小时后，将石油降解菌固定化载体浸入模拟辽河河 口石油污染的微污染水中(100mL海水+300mL自来水+lg柴油)。在室温本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种以芦苇地表根须为载体的石油降解菌固定化方法，其特征在于首先筛选出石油降解菌，然后配制石油降解菌悬浊液，最后将石油降解菌固定化在湿地芦苇地表根须上。
【技术特征摘要】
一种以芦苇地表根须为载体的石油降解菌固定化方法，其特征在于首先筛选出石油降解菌，然后配制石油降解菌悬浊液，最后将石油降解菌固定化在湿地芦苇地表根须上。2. 如权利要求1所述的石油降解菌固定化方法，其特征在于上述石油降解菌的筛选方 法如下(1) 将石油污染的土壤10g，放入250mL锥形瓶，用lOOmL生理盐水充分混匀，待土壤中 微生物全部释放到生理盐水后，静置待固液分离；取其上清液lmL加入液体富集培养基中， 在3(TC、120r min—1的条件下于振荡培养箱中培养7 10天；待培养液混浊后，再从中移 取lmL加入另一个成分相同的液体富集培养基中，在相同条件下继续培养，重复操作至少3 次以上；(2) 再从中吸取O. 2mL菌液均匀涂布于固体筛选培养基平板上，在3(TC恒温培养，直至 长出菌落；选择其中比较大的单菌落，划线转接入新的固体筛选培养基中进行培养，待长出 新菌落后，重复划线转接与再培养操作，直至得到纯化的石油降解菌种，上述的液体富集培 养基的成分包括柴油lg/L， NaN033. Og/L， K2HP040. ...
【专利技术属性】
技术研发人员：田伟君，白洁，张竹圆，赵阳国，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：95[中国|青岛]
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