【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及胚胎生物
，特别是涉及家畜胚胎玻璃化冷冻法。
技术介绍
随着超数排卵技术、体外受精、胚胎移植技术以及动物克隆技术的发展，家畜胚胎已成为商品化产物。胚胎冷冻保存技术对于胚胎的商业化应用和克隆技术的推广极为重要，家畜胚胎冷冻技术已成为胚胎工程技术中的研究热点。近几年胚胎的冷冻保存技术特别是玻璃化冷冻法得到了迅速的发展，玻璃化冷冻技术是快速冷冻与高浓度冷冻保护剂相结合的结果。高浓度冷冻保护剂在快速冷却过程中形成透明的玻璃状固体，冷却过程中黏度很高，但无冰晶形成，避免了冷冻过程中冰晶对细胞脂质膜及细胞骨架结构的损伤，保留细胞内外液体正常的分子和离子分布。玻璃化冷冻操作步骤简单，包括高浓度的冷冻保护剂置换细胞内外的溶液，快速降温，使溶液黏稠度极度提高并固化，放置液氮保存。影响玻璃化冷冻效果的因素主要包括(1)冷冻保护剂。同一种组织细胞，冷冻保护剂的浓度和种类是最重要的一个影响因素。细胞外冷冻保护剂一般采用大分子物质，如多糖(蔗糖、海藻糖)聚乙二醇、胎牛血清白蛋白(BAS)和Percoll等；细胞内冷冻保护剂为具有良好穿透性的小分子物质，如二甲基亚砜、乙二醇和...
【技术保护点】
家畜胚胎在金属表面玻璃化冷冻法，包括冷冻保护剂置换胚胎细胞内外液体和冷冻胚胎液滴的快速冷冻步骤，其特征在于：快速冷冻是将冷冻胚胎液滴滴在一金属块的上表面，所述金属块浸泡或悬浮在液氮中，且其上表面露出于液氮表面。
【技术特征摘要】
1.家畜胚胎在金属表面玻璃化冷冻法，包括冷冻保护剂置换胚胎细胞内外液体和冷冻胚胎液滴的快速冷冻步骤，其特征在于快速冷冻是将冷冻胚胎液滴滴在一金属块的上表面，所述金属块浸泡或悬浮在液氮中，且其上表面露出于液氮表面。2.根据权利要求1所述的家畜胚胎在金属表面玻璃化冷冻法，所述金属块的材质为铜块。3.根据权利要求1所述的家畜胚胎在金属表面玻璃化冷冻法，所述冷冻保护剂置换胚胎细胞内外液体在39℃的恒温台上进行，采用如下步骤(1)将胚胎放入平衡液中平衡10-20分钟，(2)将胚胎移入VS1液中3-5分钟，(3)将胚胎移入VS2液中20-30秒，然后将2ul的VS2和经冷冻保护剂处理过的胚胎吸入玻璃吸管中形成冷冻胚胎液滴；所述平衡液是DPBS基础液中加入了5μg/ml的细胞松弛素B...
【专利技术属性】
技术研发人员：张家新，张向利，吴亦芳，张红霞，王月，安晶，
申请(专利权)人：北京锦绣大地农业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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