本发明专利技术公开了一种增加驴受胎率的冷冻精人工授精方法，它包括鲜精的冷冻处理过程、冷冻精的解冻处理过程和诱导排卵定时输精过程。实施时，首先将采集到取活率≥70％的公驴的精液进行稀释放入全自动冷冻仪自动完成冷冻过程；给待孕母驴人工授精前，迅速置于38℃水浴瞬时解冻，并在1小时之内完成诱导排卵定时输精过程。采用本发明专利技术采用诱导排卵定时输精的技术措施情期受胎率可达70％。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及牲畜人工授精方法。 技术背景 驴属于马属动物，为了增加繁育量，一般采取人工授精方法。由于马属动物的卵巢 结构的特殊性，在出现发情表现后发情持续期变化较大，一般会持续3~14天，驴的排卵 时间也会因卵巢上卵泡生长位置的差异，排卵时间也会出现较大差异，排卵时间多在发情 的第7~10天，在发情停止前的12~24小时内排卵不等，这就造成了驴输精时间难以确 定。传统技术是通过对卵巢的直肠触诊，在感觉到卵泡发育到卵泡柔软有弹性，具波动以后 时实施输精，即直肠检查的第3期和第4期，但直肠触诊技术需要技术人员很长时间的经验 积累，不同人对卵泡发育阶段的判断也存在差异，即使准确判定卵泡发育的阶段，也难以准 确的确定排卵时间，3期的卵泡会维持1~3天，4期的卵泡也会持续1-3天，也难以确定 排卵时间，这就造成了情期排卵难以控制，再加上驴冷冻精的处理过程不当，冷冻精的活率 低，一次人工输冷冻精后受胎率不足25%，需要对驴多次人工输精才能提高受胎率，费时费 力。
技术实现思路
为了提高驴人工授精的受胎率，本专利技术的目的是提出一种增加驴受胎率的冷冻精 人工授精方法。 本专利技术的目的是这样达到的： -种，其特征在于，它包括鲜精的冷冻处理 过程、冷冻精的解冻处理过程和诱导排卵定时输精过程，具体是： 鲜精的冷冻处理过程如下：1、采用假阴道采集公驴的精液，精液经灭菌的4层消毒纱布过滤，除去胶冻，用肉 眼观察原精液的颜色，正常精液色泽呈乳白、灰白色或淡黄色，取正常精液并记录原精液 量，在配有38°C恒温装置的相差显微镜上评定活率，取活率多70 %的原精进行稀释；稀释 按原精与稀释液1 :1的比例等温稀释；稀释液按以下成分配比：Tris33- 34g、柠檬酸8- 9g、葡萄糖15 -16.g、甘油70 - 71mL、青霉素5万单位、链霉素5万单位： 2、稀释后的鲜精装入离心管中，在22°C恒温放置10分钟，在离心机上按每分钟 1850转离心15每分钟，去掉离心管中的上清液，将粥状精液用冷冻稀释液按1 :1的比例 进行稀释；稀释时先加入冷冻稀释液稀释量的1/4,经初步稀释的精液在22°C下放置10分 钟，然后，加入剩余的稀释液完全稀释；完全稀释的用0. 5mL细管进行分装，然后超声波封 口；把分装封口后的细管精液放入不透明的塑料盒内，再把塑料盒放入4°C的冷藏柜中平 衡3~4小时；同时开启液氮罐阀门把全自动冷冻仪降温至4°C备用；把平衡后的细管精液 迅速放入全自动冷冻仪，按照最佳冷冻曲线程序自动完成冷冻过程；冻冷冻过程后放入液 氮罐中保存；所述的冷冻稀释液制作方法如下： 取以下成分：三羟基三甲基甲烷33- 34g、柠檬酸8 - 9g、葡萄糖15 - 16g、甘油 70 - 71mL、青霉素5万单位、链霉素5万单位配制成稀释液，将适量稀释液装入量筒，量筒 中再加入20%体积份的卵黄，用封口膜封口后，上下颠倒混匀，置于4°C冰箱中过夜分层； 之后，去除上层泡沫，取稀释液中层倒入烧杯中沉淀，弃去下层沉淀物；经4000转/分离心 3次，每次30分钟，离心后弃去表层杂质及底层沉淀物，倒入瓶中，加入适量甘油，用磁力搅 拌器充分搅拌均匀，置于4°C冰箱中存放备用，存放时间不宜超过24小时。 冷冻精的解冻处理过程为：给待孕母驴人工授精前，从液氮罐内取出精液细管，迅 速置于38°C水浴瞬时解冻，解冻后用吸水纸擦干细管，剪去细管无棉塞一端的封口，安装在 输精枪上，然后予以保温，并在1小时之内完成输精过程； 诱导排卵定时输精过程为：在驴出现发情表现后的第7~10天内，人工将直肠B超探头经驴直肠送至卵巢部位，通过调整直肠探头在卵巢部位的扫描面，检测卵巢上卵泡 发育的大小尺寸，当发现卵泡直径达到3. 4-3. 5cm时，给驴注射300单位的促黄体素或绒毛 膜促性腺素，使驴集中时间进行排卵，降低卵泡发育中闭锁的几率，并在排卵前10小时至 排卵后6小时内、用输精枪实施两次人工输精，每次输精剂量5mL，确保驴精子与驴卵子在 具有受精能力的时间内相遇完成受精过程，使驴受胎。 本专利技术采用诱导排卵定时输精的技术措施，积极效果如下： 1、利用B超技术检测卵巢，可清晰见到卵泡的大小，与传统直肠触诊技术相比，便 于技术人员掌握和技术推广，不需要长时间的经验积累和长时间培训，同时避免检测人员 对卵泡发育阶段的误判，减少对传统直肠触诊技术的依赖。 2、在卵泡达到特定大小后利用激素处理，可以降低卵泡发育中闭锁的几率，同时 卵泡发生排卵的时间相对比较集中，可以实现排卵后6小时内或排卵前10小时定时进行输 精，减少了传统直肠触诊技术难以确定排卵时间的问题。 3、保证了冷冻精液的活性；通过在规定时间内两次输精，保障驴精子与驴卵子均 在具有受精能力的时间内相遇完成受精，同时由于输精次数少，减少了母驴子宫的排异反 应，可以在一定程度上提尚受胎率，特别是冷冻精液受胎率。 下面是本专利技术与传统直肠触诊的方法实验效果对比： 从表中看出，采用本专利技术采用诱导排卵定时输精的技术措施情期受胎率可达 70%〇【具体实施方式】 本领域技术人员根据
技术实现思路
描述的鲜精采集、消毒稀释处理过程和诱导排卵定 时输精过程即可实施，在此不再详细描述。【主权项】1. 一种，其特征在于，它包括鲜精的冷冻处理过 程、冷冻精的解冻处理过程和诱导排卵定时输精过程，其中： 鲜精的冷冻处理过程如下： (1) 采用假阴道采集公驴的精液，精液经灭菌的4层消毒纱布过滤，除去胶冻，用肉眼 观察原精液的颜色，正常精液色泽呈乳白、灰白色或淡黄色，取正常精液并记录原精液量， 在配有38°C恒温装置的相差显微镜上评定活率，取活率多70%的原精进行稀释；稀释按原 精与稀释液1 :1的比例等温稀释；稀释液按以下成分配比：Tris33- 34g、柠檬酸8-9g、葡 萄糖15 - 16g、甘油70 - 71mL、青霉素5万单位、链霉素5万单位： (2) 稀释后的鲜精装入离心管中，在22°C恒温放置10分钟，在离心机上按每分钟1850 转离心15每分钟，去掉离心管中的上清液，将粥状精液用冷冻稀释液按1 :1的比例进行稀 释；稀释时先加入冷冻稀释液稀释量的1/4,经初步稀释的精液在22°C下放置10分钟，然 后，加入剩余的稀释液完全稀释；完全稀释的用0. 5mL细管进行分装，然后超声波封口；把 分装封口后的细管精液放入不透明的塑料盒内，再把塑料盒放入4°C的冷藏柜中平衡3~ 4小时；同时开启液氮罐阀门把全自动冷冻仪降温至4°C备用；把平衡后的细管精液迅速放 入全自动冷冻仪，按照最佳冷冻曲线程序自动完成冷冻过程；冻冷冻过程后放入液氮罐中 保存；所述的冷冻稀释液制作方法如下： 取以下成分：三羟基三甲基甲烷33- 34g、柠檬酸8 - 9g、葡萄糖15 - 16g、甘油70- 71mL、青霉素5万单位、链霉素5万单位配制成稀释液，将适量稀释液装入量筒，量筒中再加 入20%体积份的卵黄，用封□膜封□后，上下颠倒混勾，置于4°C冰箱中过夜分层；之后，去 除上层泡沫，取稀释液中层倒入烧杯中沉淀，弃去下层沉淀物；经4000转/分离心3次，每 次30分钟，离心后弃去表层杂质及底层沉淀物，倒入瓶中，加入适量甘油，用磁力搅拌器充 分搅拌均匀，置于4本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种增加驴受胎率的冷冻精人工授精方法，其特征在于，它包括鲜精的冷冻处理过程、冷冻精的解冻处理过程和诱导排卵定时输精过程，其中：鲜精的冷冻处理过程如下：(1)采用假阴道采集公驴的精液，精液经灭菌的4层消毒纱布过滤，除去胶冻，用肉眼观察原精液的颜色，正常精液色泽呈乳白、灰白色或淡黄色，取正常精液并记录原精液量，在配有38℃恒温装置的相差显微镜上评定活率，取活率≥70％的原精进行稀释；稀释按原精与稀释液1：1的比例等温稀释；稀释液按以下成分配比：Tris33—34g、柠檬酸8—9g、葡萄糖15—16g、甘油70—71mL、青霉素5万单位、链霉素5万单位：(2)稀释后的鲜精装入离心管中，在22℃恒温放置10分钟，在离心机上按每分钟1850转离心15每分钟，去掉离心管中的上清液，将粥状精液用冷冻稀释液按1：1的比例进行稀释；稀释时先加入冷冻稀释液稀释量的1/4，经初步稀释的精液在22℃下放置10分钟，然后，加入剩余的稀释液完全稀释；完全稀释的用0.5mL细管进行分装，然后超声波封口；把分装封口后的细管精液放入不透明的塑料盒内，再把塑料盒放入4℃的冷藏柜中平衡3～4小时；同时开启液氮罐阀门把全自动冷冻仪降温至4℃备用；把平衡后的细管精液迅速放入全自动冷冻仪，按照最佳冷冻曲线程序自动完成冷冻过程；冻冷冻过程后放入液氮罐中保存；所述的冷冻稀释液制作方法如下：取以下成分：三羟基三甲基甲烷33—34g、柠檬酸8—9g、葡萄糖15—16g、甘油70—71mL、青霉素5万单位、链霉素5万单位配制成稀释液，将适量稀释液装入量筒，量筒中再加入20％体积份的卵黄，用封口膜封口后，上下颠倒混匀，置于4℃冰箱中过夜分层；之后，去除上层泡沫，取稀释液中层倒入烧杯中沉淀，弃去下层沉淀物；经4000转/分离心3次，每次30分钟，离心后弃去表层杂质及底层沉淀物，倒入瓶中，加入适量甘油，用磁力搅拌器充分搅拌均匀，置于4℃冰箱中存放备用，存放时间不宜超过24小时；冷冻精的解冻处理过程是：给待孕母驴人工授精前，从液氮罐内取出精液细管，迅速置于38℃水浴瞬时解冻，解冻后用吸水纸擦干细管，剪去细管无棉塞一端的封口，安装在输精枪上，然后予以保温，并在1小时之内完成输精过程；诱导排卵定时输精过程是：在驴出现发情表现后的第7～10天内，人工将直肠B超探头经驴直肠送至卵巢部位，通过调整直肠探头在卵巢部位的扫描面，检测卵巢上卵泡发育的大小尺寸，当发现卵泡直径达到3.4‑3.5cm时，给驴注射300单位的促黄体素或绒毛膜促性腺素，使驴集中时间进行排卵，降低卵泡发育中闭锁的几率，并在排卵前10小时至排卵后6小时内、用输精枪实施两次人工输精，每次输精剂量5mL，确保驴精子与驴卵子在具有受精能力的时间内相遇完成受精过程，使驴受胎。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：常仲乐，谭景和，罗明久，刘冰，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：山东;37
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