２型猪圆环病毒和其用途制造技术

本发明专利技术提供一种在宿主细胞内具有高复制能力的２型猪圆环病毒（ＰＣＶ２）和其用途。

【技术实现步骤摘要】
相关专利申请案的交叉参考本申请案主张于2010年2月4日向韩国知识产权局提出申请的韩国专利申请案第10-2010-0010656号的权利，所述韩国专利申请案的公开内容以全文引用的方式并入本文中。
本专利技术涉及一种2型猪圆环病毒和其用途。
技术介绍
2型猪圆环病毒(PCV2)是一种小型、二十面体的无包膜DNA病毒，其直径在17到22纳米的范围内并含有单链圆形基因组。PCV2与1型猪圆环病毒(PCV1)具有约80％的序列一致度。尽管PCV1是不致病的，但感染PCV2的猪会有例如以下症状：断奶后多系统衰竭综合征(postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS)、猪呼吸道疾病综合征(porcine respiratory disease complex，PRDC)、PCV2引起的肠炎、PCV2引起的生殖疾病、猪皮炎肾炎综合征(porcine dermatitis nephritissyndrome，PDNS)、萎缩症、呼吸道症状、腹泻、黄疸和胃溃疡。PCV2是圆环病毒科的一员。PCV2基因组并不编码病毒DNA聚合酶，此使其依赖于细胞酶来完成其感染周期。当将PCV2接种于猪体内时，在病毒复制方面观察到高度变化。已观察到当同时接种其它如猪生殖-呼吸道综合征病毒(porcine reproductiveand respiratory syndrome virus，PRRSV)或猪细小病毒的病毒时，PCV2能够在宿主体内较好地复制(Allan等人(2000)Arch Virol.145，2421-2429；Allan等人(2000)J Vet Med B.47，81-94)。存在于受PCV2感染的细胞培养物中的PCV2滴度一般在3.4到4.5log10TCID50/毫升范围内。美国专利第7,566,562号公开一种活体外培养猪圆环病毒的方法，所述方法包括：给培养基中的连续动物细胞系细胞接种猪圆环病毒；在一或多种核内质溶酶体系统酸化抑制剂的存在下培养所述培养基中的所述连续动物细胞系；以及从所述培养基和/或所述受感染的连续动物细胞系分离出所述猪圆环病毒。然而，仍需要开发在宿主细胞内具有高复制能力的PCV2。特别是还需要开发在不使用如至少一种核内质溶酶体系统酸化抑制剂的病毒复制增强剂的情况下具有高复制能力的PCV2。
技术实现思路
本专利技术提供一种在宿主细胞内具有高复制能力的2型猪圆环病毒(PCV2)。本专利技术还提供一种使在宿主细胞内具有高复制能力的PCV2减毒的方法。本专利技术还提供一种免疫原性组合物，其包括在宿主细胞内具有高复制能力的减毒PCV2。本专利技术还提供一种使用所述免疫原性组合物来预防或治疗动物的PCV2感染相关-->疾病的方法。根据本专利技术的一个方面，提供一种用于治疗或预防动物的圆环病毒感染的组合物，所述组合物包含至少一种选自由减毒圆环病毒PCV2 GC0504和PCV2 GC0505组成的群组的减毒病毒。根据本专利技术的另一个方面，提供一种产生减毒圆环病毒的方法，所述方法包含使至少一种选自由圆环病毒PCV2 GC0504和PCV2 GC0505组成的群组的病毒与福尔马林反应，从而制备减毒圆环病毒。根据本专利技术的另一个方面，提供一种治疗或预防动物的圆环病毒感染的方法，所述方法包含向所述动物投予有效量的根据权利要求1至11中任一权利要求所述的组合物。根据本专利技术的另一个方面，提供一种圆环病毒PCV2 GC0504，其包含具有SEQ ID NO：1的核苷酸序列的基因组。根据本专利技术的另一个方面，提供一种圆环病毒PCV2 GC0505，其包含具有SEQ ID NO：4的核苷酸序列的基因组。附图说明通过参考随附图式详细地描述本专利技术的例示性实施例，本专利技术的上述和其它特征与优势将变得更加明显，在随附图式中：图1为说明各种浓度的PCV2的实时聚合酶链式反应(PCR)结果的图。图2为说明在PCV2攻击-接种到幼猪体内后经鼻腔的PCV2洗脱的图。图3为说明在攻击-接种PCV2和猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)到幼猪体内后经鼻腔的PCV2洗脱的图。图4为说明在PCV2攻击-接种到幼猪体内后经排泄物的PCV2洗脱的图。图5为说明在攻击-接种PCV2和PRRSV到幼猪体内后经排泄物的PCV2洗脱的图。具体实施方式在下文中，现将参考附图更充分地描述本专利技术，在附图中展示本专利技术的例示性实施例。本专利技术的一或多个实施例提供一种用于治疗或预防动物的圆环病毒感染的组合物，所述组合物包括至少一种选自由减毒圆环病毒PCV2GC0504和PCV2 GC0505组成的群组的减毒病毒。PCV2 GC0504可以包括具有SEQ ID NO：1的核苷酸序列的基因组。所述基因组可以具有由SEQ ID NO：1的核苷酸序列的51st到992nd核苷酸组成的开放阅读框架1(ORF1)核苷酸序列和与SEQ ID NO：1的核苷酸序列的1037th到1735th核苷酸互补的ORF2核苷酸序列。ORF1核苷酸序列为正义链的并且可以编码复制酶蛋白。ORF2核苷酸序列为反义链的并且可以编码衣壳蛋白。ORF1蛋白和ORF2蛋白可以分别地具有SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3的氨基酸序列。因为PCV2 GC0504在宿主细胞中具有高增殖活性，故可以容易地获得PCV2 GC0504病毒粒子。因此，PCV2 GC0504可以有效地用于制备减毒圆环病毒疫苗。举例来说，PCV2 GC0504可以通过以下步骤来制备：将PK-15细胞培养于补充有10％胎牛血清-->(fetal bovine serum，FBS)的达尔伯克氏改良伊格尔培养基(Dulbecco’s modified Eagle medium，DMEM)(900毫升DMEM、100毫升胎牛血清(FBS)、100微克/毫升链霉素(streptomycin)、200国际单位/毫升青霉素(penicillin)和100微克/毫升卡那霉素(kanamycin))中形成单层；由此移除所述培养基；通过用胰蛋白酶处理来由此分离出PK-15细胞；添加104.6TCID50/0.1毫升的PCV2到PK-15细胞悬浮液中以供接种；在37℃下静止培养所述细胞3到4天；通过冻融所述细胞三次来完全地破坏所述细胞；以及以每分钟2,500转的速度离心所述细胞15分钟，从而获得上清液。在所述上清液中，PCV2 GC0504的平均含量等于或大于105.6TCID50/毫升，例如在105.6到106.0TCID50/毫升范围内。由此可见PCV2 GC0504具有高增殖活性。PCV2 GC0504的高增殖活性也可以在无增殖增强剂(如葡糖胺)存在时获得。PCV2 GC0505可以包括具有SEQ ID NO：4的核苷酸序列的基因组。所述基因组可以具有由SEQ ID NO：4的核苷酸序列的51st到992nd核苷酸组成的ORF1核苷酸序列和与SEQ ID NO：4的核苷酸序列的1036th到1734th核苷酸互补的ORF2核苷酸序列。ORF1核苷酸序列为正义链的并且可以编码复制酶蛋白。ORF2核苷酸序列为反义链的并且可以编码衣壳蛋白。ORF1蛋白和ORF2蛋白可以分别地具有SEQ ID NO：5和SEQ 本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种用于治疗或预防动物的圆环病毒感染的组合物，所述组合物包含至少一种选自由减毒圆环病毒ＰＣＶ２ＧＣ０５０４和ＰＣＶ２ＧＣ０５０５组成的群组的减毒病毒。

【技术特征摘要】
KR 2010-2-4 10-2010-00106561.一种用于治疗或预防动物的圆环病毒感染的组合物，所述组合物包含至少一种选自由减毒圆环病毒PCV2GC0504和PCV2GC0505组成的群组的减毒病毒。2.根据权利要求1所述的组合物，其中PCV2GC0504包含具有SEQID NO：1的核苷酸序列的基因组。3.根据权利要求1所述的组合物，其中PCV2GC0505包含具有SEQID NO：4的核苷酸序列的基因组。4.根据权利要求1所述的组合物，其中PCV2GC0504和PCV2GC0505是通过与甲醛反应而被减毒。5.根据权利要求1所述的组合物，其中PCV2GC0504和PCV2GC0505的量在单一剂量下分别在104.5TCID50到106.5TCID50范围内。6.根据权利要求1所述的组合物，其中用于预防和治疗圆环病毒感染的所述圆环病毒是选自由PCV2a和PCV2b组成的群组。7.根据权利要求1所述的组合物，其中用于预防和治疗圆环病毒感染的所述圆环病毒包含PCV2a和PCV2b。8.根据权利要求1所述的组合物，其进一步包含兽医学上可接受的赋形剂。9.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋錞燮，姜普圭，金慧权，朴奉均，
申请(专利权)人：绿十字兽医药品株式会社，
类型：发明
国别省市：KR[韩国]