黄芩提取物在制备抗食道癌药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种黄芩提取物在制备抗食道癌药物中的应用，黄芩提取物特别指具有黄酮母体结构的提取物，可以是黄芩素，也可以是黄芩甙，还可以是两者的混合物及其黄芩提取物制成的药学上可接受的盐。利用黄芩提取物制备的抗食道癌药，能直接抑制癌细胞的分裂，并具有强烈诱导癌细胞凋亡的作用，而对正常细胞生长周期和凋亡无明显作用；并且它还具有抑制食道癌内部血管生成，特别是在缺氧环境下的血管再生，从而有效地切断食道癌的血液供应，使其变性坏死，显著地抑杀移植食道癌的生长，且无任何毒副作用，它对治疗或预防食道癌的药物的制备具有十分积极的现实意义。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及黄芩提取物的用途，特别是黄芩提取物在制备抗食道癌药物中的应用。食道癌的放疗不同于其它部位的肿瘤治疗，由于肿瘤始终与食管于一体，在规划靶区时，管腔和病变一起被划入，如果和照射其它部位的肿瘤一样，一次大剂量照射势必会引起食管粘膜的损伤，甚至穿孔，有发现在肺部肿瘤的定向放射时，食管接受24-30Gy量，即可出现放射性损伤，后期表现食管局部性狭窄。又由于食道癌患者就症时绝大多数已属晚期，不仅局部病变已广泛浸润，而且已有亚临床病灶的远处播散或淋巴结转移，尸检发现，许多临床认为局部早期的病例死亡时，已有半数以上伴远处转移，70％以上有广泛的淋巴结受侵，真正能根治性切除的病例不足1/3，常规放疗5年生存率仅为13％，局部复发也是食道癌手术和放疗失败的主要原因，占80％以上，由此可以看出，食道癌的治疗仅靠手术和放疗是远远不够的。由于在化疗过程中，伴有极大的副反应及并发症，即使通过放疗结合化学治疗，其5年生存率也仅13％左右。生存5年以上者，对于后期的生活质量也大受影响，不能从根本上有效地来治疗食道癌，更不能做到防患于未然。中药黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)首载于《神农本草经》，又名黄文、无芩等。根据现有文献的报道，黄芩的药理功效味苦，性寒，功能泄实火，除湿热，解毒，止血，安胎，对多种细菌均有抑制作用，对流感病毒，皮肤真菌也有抑制作用，并有除热，解毒，镇静，降压，利胆，利尿，解除平滑肌痉挛，抑制肠管蠕动等作用。黄芩的丙酮提取物还可望成为保存加工食品的天然抗氧化剂。黄芩的根、叶提取物有抗溃疡活性。黄芩提取物中的黄芩素和黄芩甙，现有文献报道其药理作用为抗炎、抗变态反应作用；保肝利胆作用；降压、利尿、镇静、解热作用；醛糖还原酶抑制作用。临床应用主要用于传染性肝炎、急性胆道感染、铅中毒、清热解毒、胸闷呕恶、肺热咳嗽、胎动不安及疮毒等。就黄芩甙，也有局限于针对乳腺癌细胞的体外研究报告。但这些研究都还处在非常前期，对于黄芩提取物的抗癌作用机理也不甚明了。为了达到上述目的，本专利技术提供一种黄芩提取物在制备抗食道癌药物中的应用，应用黄芩提取物所制备的药物用于治疗或预防食道癌。黄芩提取物特别指具有黄酮母体结构的提取物，可以是黄芩素，也可以是黄芩甙，还可以是两者的混合物，混合物中两者的配比可以是任意配比来进行混合。所述的黄芩提取物，可以是黄芩提取物制成的药学上可接受的盐，如用以下的酸马来酸、富马酸、琥珀酸、酒石酸、乙酸、盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸等类似酸加成盐；需要时可加合适的溶剂，如水、甲醇、乙醇、乙醚、四氢呋喃等类似物。黄芩提取物及药学上可接受的盐可以口服、注射给药，如粉剂、颗粒剂、片剂、小丸、胶囊、乳剂、糖浆剂、注射剂等。所述的制剂可用常规方法来制备。所述的具有黄酮母体结构的黄芩提取物，其黄酮母体结构如下图所示 所述黄芩素，又叫黄芩甙元，黄酮类化合物，是黄芩的主要活性成分之一。分子量270.25，可由黄芩甙水解得到。黄芩素的结构黄酮母体结构上4′，5，6，7四个氢基-H被羟基-OH取代。黄芩甙的结构是黄酮母体结构上4′，5，6三个氢基-H被羟基-OH取代，7位的羟基-OH与葡萄糖醛酸缩合，即黄芩素-7-O-葡萄糖醛酸。本专利技术所述的黄芩提取物在制备食道癌药物中的应用，公开了黄芩提取物在制药中的新用途。黄芩提取物，特别是黄芩素对食道癌细胞有明显的抑杀作用。细胞凋亡是普遍存在于细胞生物体内的一种自发、主动的细胞死亡过程，是生物体维持细胞数量相对稳定的固有机制，这一机制若有障碍或发生异常，就有可能引发肿瘤或其它病变，肿瘤是一种细胞凋亡过慢而增殖过多的疾病，如能抑制肿瘤细胞的增殖并诱导其凋亡，就能有效地控制肿瘤的发生和发展。另外，当肿瘤直径在1-2平方毫米大小时，由于瘤体中心部缺氧，肿瘤细胞会产生血管生成因子，这样，肿瘤可得到其自生生长所需的营养和氧气，通过对该新血管增殖的抑制，有助于抑制肿瘤细胞的继续生长，因此，抑制肿瘤细胞的生长，需要寻找能抑制肿瘤细胞的增殖并诱导其凋亡及其具有血管生成抑制活性的物质。而本专利技术的研究发现，黄芩提取物中黄芩素，其特殊的作用机制是，直接抑制食道癌细胞的分裂和增生，并具有强烈诱导癌细胞凋亡的作用，而对正常细胞生长周期和凋亡无明显作用；另一主要作用是抑制食道癌内部血管生成，特别是在缺氧环境下的的血管再生，从而有效地切断肿瘤的血液供应使其变性坏死。特别是在离体细胞培养实验中，表现为对食道癌细胞释放血管生长因子的抑制及诱导血管内皮细胞的凋亡。此外，在活体动物(裸鼠)实验中，发现能够显著地抑杀移植肿瘤的生长，最高有效达95％，且无任何毒副作用。本专利技术黄芩提取物在制药中的应用发掘了黄芩提取物，特别是黄芩素和黄芩甙在食道癌治疗和预防药物的生产领域中的新用途。本专利技术的黄芩提取物，特别是黄芩素、黄芩甙制备的药物毒性低，对人体无副作用。本专利技术的黄芩提取物、特别是黄芩素、黄芩甙原料来源广泛，成本较低。本专利技术对于食道癌治疗和预防这一难题的早日攻克具有深远的现实意义。为了更好地理解本专利技术的实质，以下结合对比药理实验以及结果对本专利技术加以进一步的描述。实验结果1如图1所示，该图片是黄芩提取物中的黄芩素(baicalein)诱导癌细胞核裂解，细胞凋亡始于细胞核的裂解。图中显示食道癌细胞经黄芩素处理2天后出现明显的细胞核裂解(右图中箭头所指)。黄芩素对正常细胞无此作用(左图)。此实验采用DAPI免疫染色法(特殊细胞核染色法)。Control是未经处理的对照组细胞。实验结果2如图2所示，该照片是黄芩素诱导食道癌细胞的凋亡情况。该实验采用特殊的免疫组化染色方法(tunel Stain)。此方法是目前世界范围内公认的最佳细胞凋亡鉴定手段，凋亡或正在凋亡的细胞经染色后呈显黄色或橘黄色，而正常细胞则呈显红色。照片显示食道癌细胞经黄芩素(baicalein)处理3天后诱导了这些细胞的凋亡，而经同样处理的正常细胞则不受影响。实验结果3如图3所示，该照片是黄芩素诱导血管内皮细胞的凋亡情况。该实验采用特殊的免疫组化染色方法(tunel stain).凋亡或正在凋亡的细胞经染色后呈现黄色，而正常细胞则呈现红色。图片中显示了两种血管内皮，即人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和人动脉内批皮细胞(HAEC)，经黄芩素(baicalein)处理3天后诱导了这些细胞的凋亡，control为未经处理的对照组细胞。实验结果4如图4所示，该表是黄芩素抑制食道癌细胞释放血管生长因子的实验状况。实验方法1×105食道癌细胞被种植在直径为15mm的培养盘上，培养液含有10％小牛血清。24小时待细胞贴壁后，将培养液换成无血清培养液。换液后24小时开始加药。经不同时间处理后，将培养液收集起来，用ELISA测定培养液中血管生长因子的含量，所测得含量需经实际细胞数校正。食道癌细胞经黄芩素处理2天后，血管生长因子释放明显减少。在缺氧的环境中(1％O2)，黄芩素抑制作用尤其显著。实验结果5如图5所示，该照片显示黄芩素抑制裸鼠上移植食道癌内的血管生成状况。实验方法先将食道癌细胞株接种在裸鼠皮下。自第2周开始，黄芩素经皮下给药，每周3次。实验持续至第12周，每周测量一次肿瘤的表面积。实验结束后，将肿瘤自裸鼠上分离下来，经化学固定和冰冻切片本文档来自技高网...

【技术保护点】
黄芩提取物在制备抗食道癌药物中的应用。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘新华，潘福生，胡祖耀，
申请(专利权)人：杭州华东医药集团生物工程研究所有限公司，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]