人溶菌酶在制备治疗眼病的药物中的新用途制造技术

本发明专利技术涉及人溶菌酶的新用途，尤其是人溶菌酶在制药领域中的应用。人溶菌酶在制备治疗各种眼病的药物中的应用。人溶菌酶在制备治疗由细菌、衣原体、病毒和耐药菌导致的各种红眼病、眼炎、角膜炎、角膜溃疡疾病的药中的应用。本发明专利技术基因重组人溶菌酶来源丰富，制备工艺简单，安全无毒副作用，有很好的药用前景，做成滴眼液，使用方便。发掘了新的医疗用途，开拓了一个新的应用领域。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及人溶菌酶的新用途，特别是在制药领域中的新用途。
技术介绍
目前由细菌、病毒、导致的各种红眼病、眼炎、角膜炎、角膜溃疡等疾病很常见，疗法一般是采用抗菌素滴眼液，但是21世纪的今天，耐药菌的发展令人触目惊心，从细菌的耐药发展史可以看出，在某种新的抗生素出现以后，就有一批耐药菌株出现。开发一种新的抗生素一般需要10年左右的时间，而一代耐药菌的产生只要2年的时间，抗生素的研制速度远远赶不上耐药菌的发展速度。使用抗菌素越多，造成细菌为躲避抗菌素而变异的方式越多。由于抗生素的滥用，相当多的耐药性细菌出现。几十年来，人类专利技术了大量的抗菌药物，目前应用于临床的已不下200种之多，而且仍以平均每年10种以上新的抗菌药物问世的速度在增长。虽然不断有新的抗生素研制和投入使用，但在很短的时间内，就有新的耐药性菌株产生。面对“适者生存，不断进化”的细菌，抗生素似乎已经无计可施。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种人溶菌酶在制备治疗眼疾的药物中的应用。有效针对由细菌、病毒、导致的各种红眼病、眼炎、角膜炎、角膜溃疡等疾病，剂型合理，使用方便。实际上本专利技术涉及人溶菌酶在制备治疗各种眼病的药物中的应用。涉及人溶菌酶在制备治疗由细菌、衣原体、病毒和耐药菌导致的各种红眼病、眼炎、角膜炎、角膜溃疡疾病的药中的应用。涉及人溶菌酶在制备治疗由沙门氏菌和衣原体引起的各种红眼病、眼炎、角膜炎、角膜溃疡疾病的药物中的应用。涉及人溶菌酶在制备治疗由I型疱疹病毒引起的疱疹病导致的各种红眼病、眼炎、角膜炎、角膜溃疡疾病的药物中的应用。涉及人溶菌酶在制备治疗由柯萨奇病毒引起的导致各种红眼病、眼炎、角膜炎、角膜溃疡疾病的药物中的应用。涉及人溶菌酶在制备治疗由线病毒引起的导致各种红眼病、眼炎、角膜炎、角膜溃疡疾病的药物中的应用。涉及人溶菌酶在制备治疗由病原性念球菌引起的导致各种红眼病、眼炎、角膜炎、角膜溃疡疾病的药物中的应用。所述药物为滴眼液，含有活性300U～300万U/mL人溶菌酶。所述人溶菌酶包括基因工程表达的重组人溶菌酶、基因工程表达人溶菌酶的氨基端带有(谷氨酸-丙氨酸)2或(谷氨酸-丙氨酸)3修饰的人溶菌酶、基因工程表达或化学合成突变体重组人溶菌酶。重组人溶菌酶基因来源人的外周血。再通过DNA重组技术，将基因克隆于pUC19质粒载体中，克隆株通过核苷酸DNA序列分析，证实为重组人溶菌酶基因。它是一种有效的抗菌剂，全称为1，4-β-N-溶菌酶或者称粘肽N-乙酰基胞壁酰水解酶。它能切断细菌细胞壁的肽聚糖中N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁酸之间的β-1，4糖苷键的联结，破坏肽聚糖支架，细菌在内部渗透压的作用下细胞胀裂开，引起细菌裂解。人和动物细胞无细胞壁结构亦无肽聚糖，故溶菌酶对人体细胞无毒性作用。重组人溶菌酶除可以直接裂解细菌外，还有抗病毒、抗肿瘤、抗炎和免疫调节作用。本专利技术基因重组人溶菌酶来源丰富，制备工艺简单，安全无毒副作用，有很好的药用前景，做成滴眼液，使用方便。发掘了新的医疗用途，开拓了一个新的应用领域。为了更好的理解本专利技术的实质，下面将用基因重组人溶菌酶的药理试验及结果来说明其在制药领域中的新用途。基因重组人溶菌酶以配制200毫升培养基为准，用磷酸6毫升、硫酸镁3克，硫酸钾4克，氢氧化钾1克，硫酸钙1.5克，加蒸馏水至200毫升，高压灭菌后接种甘油管种子，摇床转数为每分钟250转，培养温度为20-35℃，在恒温床上培养36-48小时。进行种子罐培养，最后进行生产罐培养。将发酵表达完成的培养液进行提取纯化，对提取纯化的蛋白浓缩液进行冻干，测蛋白测活性保存。在符合GMP要求的制药工厂，按制药规程，将纯度95％的基因重组人溶菌酶制得300U～300万U/mL，磷酸盐缓冲液10～20mM(pH6.5～7.5)80％、5～25％丙二醇、万分之五吐温80，在常温下混合均质，制成滴眼液。一、对动物的模型试验A、基因重组人溶菌酶(HLZ)体内外抗菌作用评价 (1)体外抗菌作用受试药品及试剂1、人溶菌酶(Human Lysozyme HLZ)活性单位30000单位/mL，由大连奇龙生物技术研究所提供。2、对照溶菌酶(contral Lysozyme，CLZ)白色粉未，活性单位50000单位/mg，美国SIGMA公司产品，批号L6876。3、克拉霉素效价948μ/mg，中国药品生物制品检定所标准品，批号4、罗红霉素效价878μ/mg，中国药品生物制品检定所标准品，批号5、注射用阿莫西林哈尔滨制药厂产品，批号010504。6、琼脂糖(B10WEST AGAROSE)7、三羟甲基氨基甲烷(Tris)成都化学试验厂，批号010211试验菌株所用菌株均为2001.4~2002.4月于四川、北京地区收集的临床分离致病菌。经本室用API方法重新鉴定后用于试验。质控菌株金黄色葡萄球菌ATCC25923大肠埃希菌ATCC25922铜绿假单孢菌ATCC27853培养基4、Tris-HCl缓冲液0.1MTris 100ml，0.1MHCl 70ml，High Water 800ml，测PH值，用HCl溶液调至PH7.2，加High Water至1000ml。2、Tris-HCl琼脂培养基在Tris-Cl缓冲液中加入琼脂糖116℃无菌后使用。3、M-H培养基中国药品生物制品检定所产品，M-H肉汤培养基称取25g加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，高压灭菌，116℃20分钟。M-H固体培养基称取36g，加1000ml蒸馏水，高压灭菌，116℃20分钟，用于革兰阳性、阴性需氧菌的药敏试验。4、血培养基，即在M-H培养基中加5-10％脱纤维兔血配制而成，用于肠球菌、链球菌的药敏试验。试验方法体外抗菌活性(MIC)测定采用琼脂二倍稀释法测定受试药物对试验菌株的最低抑菌浓度(MIC)。将受试药物用灭菌蒸馏水溶解，适当稀释。分别取1ml药液加9ml融化的Tris-HCl琼脂糖固体培养基混匀，以二倍稀释，制备系列含药平皿。每皿所含药物终浓度分别为4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.06、0.03……0.001mg/ml；用多点接种仪(Denley A400，England)将稀释至105CFU/ml的试验菌液接种于各含药平皿表面，置于37℃培养8-10小时，取出分别吸取6ml融化的M-H培养基(50℃)覆盖上述系列平皿表面，再置于37℃培养10小时取出，观察结果，以无细菌生长平皿内所含最低药物浓度为该菌的最低抑菌浓度(MIC)。(2)体内抗菌作用评价药品人溶菌酶来源同前。克拉霉素来源同前。罗红霉素来源同前。阿莫西林来源同前。细菌金黄色葡球菌01193，金黄色葡球菌MRSA021923均为临床分离致病菌。动物昆明种小鼠，体重18-22克，由本所动物室提供。试验方法体内保护试验挑取一定量的菌苔接种于2ml M-H液体培养基中，37℃培养6小时后，取出用灭菌干酵母液进行适当稀释(10-1，10-2，10-3，10-4)，再取昆明种小鼠，随机分组，每组5只鼠，分别腹腔感染不同菌量的受试菌液，测定引起小鼠100％死亡的最小致死菌量(MLD)。再按1∶0.5剂间距设置5个剂量组，每组10只鼠，每只小鼠腹腔感染1MLD菌量的菌液0.5ml，感染后即刻静脉注射受试药0.5ml，设感染对照组本文档来自技高网...

【技术保护点】
人溶菌酶在制备治疗各种眼病的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.人溶菌酶在制备治疗各种眼病的药物中的应用。2.人溶菌酶在制备治疗由细菌、衣原体、病毒和耐药菌导致的各种红眼病、眼炎、角膜炎、角膜溃疡疾病的药中的应用。3.人溶菌酶在制备治疗由沙门氏菌和衣原体引起的各种红眼病、眼炎、角膜炎、角膜溃疡疾病的药物中的应用。4.人溶菌酶在制备治疗由I型疱疹病毒引起的疱疹病导致的各种红眼病、眼炎、角膜炎、角膜溃疡疾病的药物中的应用。5.人溶菌酶在制备治疗由柯萨奇病毒引起的导致各种红眼病、眼炎、角膜炎、角膜溃疡疾病的药物中的应用。6.人溶菌酶在制备治疗由线病毒引起的导致各种红眼病、眼炎、角膜...

【专利技术属性】
技术研发人员：张华，
申请(专利权)人：张华，
类型：发明
国别省市：91[中国|大连]