人溶菌酶泡腾片、制法及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种生物制药，特别是人溶菌酶针对抗耐药菌、霉菌、病毒的药物、制法及其应用。人溶菌酶泡腾片，含有活性３０００Ｕ～３００万Ｕ／ｍｌ人溶菌酶。本发明专利技术基因重组人溶菌酶来源丰富，制备工艺简单，安全无毒副作用，有很好的药用前景，泡腾片剂药物不受胃肠ｐＨ或酶的破坏而失去活性，对胃粘膜有刺激性的药物可用直肠给药，可免受刺激；药物直肠吸收，不象口服药物受肝脏首过作用破坏；直肠吸收比口服干扰因素少；对不能或者不愿吞服片、丸及胶囊的病人，尤其是婴儿和儿童可用此法给药，使用方便；对伴有呕吐的患者的治疗为一有效途径。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物制药，特别是人溶菌酶针对抗耐药菌、霉菌、病毒的药物、制法及其应用。
技术介绍
21世纪的今天，耐药菌的发展令人触目惊心。所谓耐药菌就是细菌对药物产生抗性，是细菌多次与药物接触后，对药物的敏感性减小甚至消失，致使药物对细菌的敏感性降低甚至无效。其中耐药菌包括金黄色葡萄球菌MRSA、表皮葡萄球菌MRSE、肺炎链球菌、溶血性链球菌、肠球菌属、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、丙酸杆菌、淋病双球菌、枸橼酸杆菌、沙雷氏菌、阴沟肠杆菌、铜绿假单孢菌、白色念珠菌等。主要是对下列药品产生耐药性克拉霉素、罗红霉素、阿莫西林、万古霉素、德可霉素、广谱青霉素、甲氧西啉类、头孢类、青霉素钠、青霉素钾、磺胺类。具体的耐药标准是(抑菌圈直径mm) 从细菌的耐药发展史可以看出，在某种新的抗生素出现以后，就有一批耐药菌株出现。开发一种新的抗生素一般需要10年左右的时间，而一代耐药菌的产生只要2年的时间，抗生素的研制速度远远赶不上耐药菌的发展速度。目前急需开发一种针对不同耐药菌株均有效的“超级抗生素”用于临床治疗。如中国专利03110824.5所公开了人溶菌酶针对抗耐药菌的用途，重组人溶菌酶除可以直接裂解细菌外，还有抗病毒、抗肿瘤、抗炎和免疫调节作用，但是针对某些疾病是否有更合理有效的剂型，以及在制备治疗更多种疾病的开发上仍有很大空白。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种人溶菌酶泡腾片，有效针对抗耐药菌包括对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌引起的抗耐药性，胃肠兔受刺激，直接作用于患处，使用方便，效果好。本专利技术为实现上述目的所采用的技术方案是人溶菌酶泡腾片，含有活性3000U～300万U/ml人溶菌酶。所述人溶菌酶泡腾征，由纯度95％的基因重组人溶菌酶制得3000U～300万U/mL，磷酸盐缓冲液10～20mM(pH6.5～7.5)80％、万分之五吐温80，枸橼酸2100g，羧甲基纤维素纳100g，碳酸氢钠2520g，15％淀粉浆800g，干燥淀粉100g，硬脂酸镁60g制成泡腾片。所述人溶菌酶包括基因工程表达的重组人溶菌酶、基因工程表达人溶菌酶的氨基端带有(谷氨酸-丙氨酸)2或(谷氨酸-丙氨酸)3修饰的人溶菌酶、基因工程表达或化学合成突变体重组人溶菌酶。本专利技术人溶菌酶泡腾片的制备工艺流程为配方原料药物准备→配方药物分别制备→制粒→干燥→压片→含量及其它质量测定→成品包装。具体制法为第一步、基因重组人溶菌酶的制备基因重组人溶菌酶以配制200毫升培养基为准，用磷酸6毫升、硫酸镁3克，硫酸钾4克，氢氧化钾1克，硫酸钙1.5克，加蒸馏水至200毫升，高压灭菌后接种甘油管种子，摇床转数为每分钟250转，培养温度为20-35℃，在恒温床上培养36-48小时。进行种子罐培养，最后进行生产罐培养。将发酵表达完成的培养液进行提取纯化，对提取纯化的蛋白浓缩液进行冻干，测蛋白测活性保存。第二步、泡腾片的制备原料为纯度95％的基因重组人溶菌酶制得3000U～300万U/mL，磷酸盐缓冲液10～20mM(pH6.5～7.5)80％、万分之五吐温80，枸橼酸2100g，羧甲基纤维素纳100g，碳酸氢钠2520g，15％淀粉浆800g，干燥淀粉100g，硬脂酸镁60g； 称取已过120目筛的淀粉，将蒸馏水加热至沸，加入已解开的淀粉混悬液中，冲成浆糊，放至50℃以下，然后加入已过筛的羧甲基纤维素纳、碳酸氢钠中，搅拌均匀，制成软材、制粒，湿颗粒于50～60℃排风干燥，干颗粒水分控制在5％左右，再过18～20目尼龙筛整粒备用。将干燥淀粉用磷酸盐缓冲液按等量递加稀释法和适量活性重组人溶菌酶混合均匀，再与已过筛的枸橼酸混合均匀，最后与已整过粒的干颗粒、过筛的硬脂酸镁混合均匀、压片，含量及其它质量测定，成品包装。本专利技术人溶菌酶泡腾片在制备预防或治疗由耐药白色念珠菌引起的阴道炎的药物中的应用。涉及人溶菌酶泡腾片在制备预防或治疗由II型疱疹病毒引起的子宫颈炎的药物中的应用。涉及人溶菌酶泡腾片在制备预防或治疗由耐药淋病双球菌引起的尿道炎的药物中的应用。本专利技术基因重组人溶菌酶来源丰富，制备工艺简单，安全无毒副作用，有很好的药用前景，泡腾片剂药物不受胃肠pH或酶的破坏而失去活性，对胃粘膜有刺激性的药物可用直肠给药，可免受刺激；药物直肠吸收，不象口服药物受肝脏首过作用破坏；直肠吸收比口服干扰因素少；对不能或者不愿吞服片、丸及胶囊的病人，尤其是婴儿和儿童可用此法给药，使用方便；对伴有呕吐的患者的治疗为一有效途径。为了更好地理解本专利技术的实质，下面将用基因重组人溶菌酶的药理试验及结果来说明其在制药领域中的新用途。基因重组人溶菌酶以配制200毫升培养基为准，用磷酸6毫升、硫酸镁3克，硫酸钾4克，氢氧化钾1克，硫酸钙1.5克，加蒸馏水至200毫升，高压灭菌后接种甘油管种子，摇床转数为每分钟250转，培养温度为20-35℃，在恒温床上培养36-48小时。进行种子罐培养，最后进行生产罐培养。将发酵表达完成的培养液进行提取纯化，对提取纯化的蛋白浓缩液进行冻干，测蛋白测活性保存。将纯度95％的基因重组人溶菌酶制得3000U～300万U/mL，磷酸盐缓冲液10～20mM(pH6.5～7.5)80％、万分之五吐温80，枸橼酸2100g，羧甲基纤维素纳100g，碳酸氢钠2520g，15％淀粉浆800g，干燥淀粉100g，硬脂酸镁60g制成泡腾片。一、对动物的模型试验A、基因重组人溶菌酶(HLZ)体内外抗菌作用评价(1)体外抗菌作用受试药品及试剂1、人溶菌酶(Human Lysozyme HLZ)活性单位30000单位/mL，由大连奇龙生物技术研究所提供。2、对照溶菌酶(contral Lysozyme，CLZ)白色粉未，活性单位50000单位/mg，美国SIGMA公司产品，批号L6876。3、克拉霉素效价948μ/mg，中国药品生物制品检定所标准品，批号4、罗红霉素效价878μ/mg，中国药品生物制品检定所标准品，批号5、注射用阿莫西林哈尔滨制药厂产品，批号010504。6、琼脂糖(B10WEST AGAROSE)7、三羟甲基氨基甲烷(Tris)成都化学试验厂，批号010211试验菌株所用菌株均为2001.4~2002.4月于四川、北京地区收集的临床分离致病菌。经本室用API方法重新鉴定后用于试验。质控菌株金黄色葡萄球菌ATCC25923大肠埃希菌ATCC25922铜绿假单孢菌ATCC27853培养基4、Tris-HCl缓冲液0.1M Tris 100ml，0.1M HCl 70ml，High Water 800ml，测PH值，用HCl溶液调至PH7.2，加High Water至1000ml。2、Tris-HCl琼脂培养基在Tris-Cl缓冲液中加入琼脂糖116℃无菌后使用。3、M-H培养基中国药品生物制品检定所产品，M-H肉汤培养基称取25g加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，高压灭菌，116℃20分钟。M-H固体培养基称取36g，加1000ml蒸馏水，高压灭菌，116℃20分钟，用于革兰阳性、阴性需氧菌的药敏试验。4、血培养基，即在M-H培养基中加5-10％脱纤维兔血配制而成，用于肠球菌、链球菌的药敏试验。试验方法体外抗菌活性(MIC)测定采用琼脂二倍稀释法测定受试药物对试本文档来自技高网...

【技术保护点】
人溶菌酶泡腾片，含有活性３０００Ｕ～３００万Ｕ／ｍｌ人溶菌酶。

【技术特征摘要】
1.人溶菌酶泡腾片，含有活性3000U～300万U/ml人溶菌酶。2.根据权利要求1所述的人溶菌酶泡腾片，其特征是由纯度95％的基因重组人溶菌酶制得3000U～300万U/mL，磷酸盐缓冲液10～20mM(pH6.5～7.5)80％、万分之五吐温80，枸橼酸2100g，羧甲基纤维素纳100g，碳酸氢钠2520g，15％淀粉浆800g，干燥淀粉100g，硬脂酸镁60g制成泡腾片。3.根据权利要求1所述的人溶菌酶泡腾片，其特征是人溶菌酶为基因工程表达的重组人溶菌酶、基因工程表达人溶菌酶的氨基端带有(谷氨酸-丙氨酸)2或(谷氨酸-丙氨酸)3修饰的人溶菌酶、基因工程表达或化学合成突变体重组人溶菌酶。4.根据权利要求1、2或3所述的人溶菌酶泡腾片的制法，其特征是原料为纯度95％的...

【专利技术属性】
技术研发人员：安米，
申请(专利权)人：安米，
类型：发明
国别省市：91[中国|大连]