用于预防艾滋病的重组痘病毒疫苗制造技术

本发明专利技术涉及一种用于预防艾滋病的重组痘病毒疫苗，属于一种新的疫苗，尤其是，所述疫苗为含有编码人类免疫缺陷病毒－１（ＨＩＶ－１）结构蛋白的经过人工修饰的Ｇａｇ、Ｐｏｌ和野生的Ｅｎｖ核苷酸序列的重组痘病毒。这些疫苗在体内施用时用作病毒蛋白抗原生物合成的转录单位。本发明专利技术的优点在于：（１）表达水平高；（２）感染多种细胞，使抗原有效地提呈到不同的组织；（３）安全性好；（４）疫苗靶抗原包括了几乎所有的ＨＩＶ－１结构蛋白，如ＧａｇＰｏｌ和Ｅｎｖ，更好的诱导人体产生对ＨＩＶ有效的免疫保护。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种新的疫苗，尤其是，所述疫苗为含有编码人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)结构蛋白的经过人工修饰的Gag、Pol和野生的Env核苷酸序列的重组痘病毒。这些疫苗在体内施用时用作病毒蛋白抗原生物合成的转录单位。
技术介绍
艾滋病被认为是世界上直接威胁人类健康的第一大传染病，联合国艾滋病联合规划署发表的《2004全球艾滋病疫情年度报告》指出，目前全球有3800万名艾滋病病毒携带者，2003年共有290万人死于艾滋病。2003年，亚洲地区共有110万人被感染，50多万人死于艾滋病，该地区目前共有740万名艾滋病毒携带者。2003年底，中国有艾滋病病毒感染者约84万，其中艾滋病患者约8万例。报告感染数波及31个省、自治区、直辖市。虽然近几年抗艾滋病药物的“鸡尾酒”疗法在发达国家有效地控制了HIV的蔓延，但是昂贵的价格(在我国该药物价格大约为3000-10000元人民币/人/月)，耐药病毒株的产生，长期用药的副作用以及最终无法彻底清除患者体内病毒等方面的不利因素显示，只有艾滋病疫苗才能真正有效地预防和控制艾滋病。所以艾滋病疫苗研制势在必行。国内外有关方面研究现状 用HIV-1疫苗防治AIDS被国际上认为是目前最行之有效的方法，已成为世界上许多科研机构研究的热点。目前，关于艾滋病疫苗的生产国际上尚属空白。而HIV-1疫苗的研制工作在国外已有多家大型科研机构、制药公司正开展进行。自八十年代发现艾滋病以来，人们就开始进行艾滋病疫苗的研究。一般来说，减毒活疫苗和灭活疫苗能产生较好免疫保护性反应，但安全性较差，不适用于作为艾滋病疫苗。随着人类对艾滋病认识的不断提高，九十年代初人们意识到CTL(Cytotoxic T Lymphocytes细胞毒性T细胞，即细胞免疫应答)的重要性，越来越多的证据显示阳性CD8介导的CTL在控制艾滋病毒感染中起举足轻重的作用。因此人们开始研究用重组病毒载体疫苗来诱导CTL，然后用胞膜蛋白亚单位疫苗增强免疫来诱导中和抗体，力图从体液免疫和细胞免疫两方面来诱导人体对艾滋病毒的保护反应。但由于免疫强度有限，而用重组载体疫苗又难以进行多次增强免疫，所以在动物模型和人体试验结果都显示了较低的对HIV的免疫保护反应。痘病毒作为天花的有效疫苗被在世界范围内广泛应用，为人类最后在全世界范围内灭绝天花做出了决定性的贡献。痘病毒具有极高的免疫效率，但是它也具有明显的副作用。例如，接种者往往出现发烧，虚弱，肌肉痛，头痛，呕吐和淋巴结肿大等症状。绝大部分接种者都出现发烧症状。尤其儿童接种者，近70％的儿童接种者体温上升到38度，15-20％的儿童甚至达到更高的体温。更有甚者出现神经系统综合症，直至死亡。据McElwain等报道，美国七十年代平均每年有七人死于天花疫苗接种。由于痘苗病毒的副作用，人们在六、七十年代就开始了痘苗病毒的致弱工作。1960年至1974年期间，德国教授Anton Mayr领导的研究小组通过将痘病毒在鸡胚成纤维细胞中传代的方法，成功地将从Ankara地区分离得到的痘病毒CVA株致弱。当传到516代时，这株致弱毒株被命名为MVA(Modified Vaccinia Ankara)。MVA不但继承了CVA的免疫原性好，对天花的保护性高的特点，同时由于在哺乳细胞不能繁殖，所以MVA还具有对人和动物毒副作用小的特点。动物试验(鸡，兔和小鼠)结果显示，MVA对新生动物不产生任何副作用，甚至对于免疫能力低下的动物同样没有明显的副作用。1980年，随着世界卫生组织宣布天花在地球上的灭绝，痘苗病毒本身作为疫苗的历史结束了。然而在同一年，基因重组技术在痘苗病毒上的应用，为痘病毒作为病毒载体用于开发研制新疫苗拓开了崭新，广泛的应用前景。MVA作为病毒载体，具备其他痘病毒载体的优点如(1)外源基因容量大，MVA不但能够表达大的外源基因，而且能够同时容纳，表达多个外源基因，从而可以同时刺激产生针对多种抗原的免疫反应或表达免疫辅助因子，诱导产生高效保护反应；(2)表达水平高；(3)感染多种细胞，使抗原有效地提呈到不同的组织；(4)同时MVA还具有独特的优势，安全性好。MVA目前被广泛用于人类基因治疗和疫苗的研究，英国的Oxford Bio Medica和法国Strasbourg的TransGene，在分别以MVA为载体进行癌症基因治疗的人体临床试验，同时英国MRC和肯尼亚正在合作进行以MVA为载体的HIV疫苗的临床试验。国内研究艾滋病疫苗的队伍主要有中国预防医学科学院、卫生部艾滋病预防与控制中心和病毒学研究所、清华大学、中国科学院微生物所及一些部队院校等。
技术实现思路
本专利技术提供一种用于预防艾滋病的重组痘病毒疫苗(M-GPE)。本专利技术采取的技术方案是该预防艾滋病的重组痘病毒疫苗一种含有转录单位的经过重组的痘病毒，所述转录单位编码人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)结构蛋白序列，该人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)结构蛋白序列是具有免疫原性的人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)抗原，其中转录单位指导抗原的合成。本专利技术的一个重要方面，采用的痘病毒是经过修饰的痘病毒安卡拉株(Modified Vaccinia Virus Ankara，MVA)。在本专利技术的另一个重要方面，所含有的转录单位编码的是人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)B/C重组型的结构蛋白，进一步包括人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)的完整核心蛋白Gag、编码酶类蛋白的Pol和外膜蛋白Env。其各氨基酸序列分别如SEQ ID NO2、SEQ ID NO3、SEQ ID NO4所述。本专利技术所述的重组的痘病毒是非复制型的。本专利技术可作为一种用于预防艾滋病的非复制型重组痘病毒载体疫苗，它包含了可编码人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)结构蛋白的核苷酸序列。本专利技术包含一个β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)表达报告基因Lac Z，含有两个启动子，分别是引导Lac Z基因的启动子P11和引导人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)结构蛋白基因的HIV-1-GagPol和Env的P7.5，包含两个阅读框架，可以同时表达β-半乳糖苷酶表达报告基因Lac Z和人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)结构蛋白HIV-1-GagPol和Env。在本专利技术的一个重要实施方案中，包含由穿梭质粒PSC11-GPE与经过修饰的痘病毒安卡拉株重组而成，穿梭质粒PSC11-GPE包含了编码人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)结构蛋白的核苷酸序列，穿梭质粒PSC11-GPE的核苷酸序列如SEQ ID NO1所述，其中编码GagPol的核苷酸序列来源于经过修饰的野生型人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)的GagPol的核苷酸序列，而编码Env蛋白的核苷酸序列则来源于未经修饰的野生型人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)的Env的核苷酸序列。本专利技术提供了一种药用组合物，为含有转录单位的经过重组的痘病毒和一种可药用的载体。它的一个重要实施方案中含有转录单位的经过重组的痘病毒M-GPE与生理盐水的滴度体积比为106-1010pfu/ml，每次注射0.1ml，注射1次。本专利技术提供了一种抗原，其由含有转录单位的经过重组的痘病毒表达产生，该表达产生的是人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)的结构蛋白Gag、Pol和E本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含有转录单位的经过重组的痘病毒，所述转录单位编码人类免疫缺陷病毒－１（ＨＩＶ－１）结构蛋白序列，该人类免疫缺陷病毒－１（ＨＩＶ－１）结构蛋白序列是具有免疫原性的人类免疫缺陷病毒－１（ＨＩＶ－１）抗原，其中转录单位指导抗原的合成。

【技术特征摘要】
1.一种含有转录单位的经过重组的痘病毒，所述转录单位编码人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)结构蛋白序列，该人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)结构蛋白序列是具有免疫原性的人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)抗原，其中转录单位指导抗原的合成。2.如权利要求1所述的含有转录单位的经过重组的痘病毒，采用的痘病毒是经过修饰的痘病毒安卡拉株(Modified Vaccinia Virus Ankara，MVA)。3.如权利要求1所述的含有转录单位的经过重组的痘病毒，所含有的转录单位编码的是人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)B/C重组型的结构蛋白。4.如权利要求1所述的含有转录单位的经过重组的痘病毒，其转录单位所编码的结构蛋白包括人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)的完整核心蛋白Gag、编码酶类蛋白的Pol和外膜蛋白Env，其各氨基酸序列分别如SEQ ID NO2、SEQ ID NO3、SEQ ID NO4所述。5.如权利要求1所述的含有转录单位的经过重组的痘病毒是非复制型的。6.如权利要求5所述的含有转录单位的经过重组的痘病毒，可作为一种用于预防艾滋病的非复制型重组痘病毒载体疫苗，它包含了可编码人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)结构蛋白的核苷酸序列。7.如权利要求1所述的含有转录单位的经过重组的痘病毒，包含一个...

【专利技术属性】
技术研发人员：孔维，于晓方，田春娟，于湘辉，
申请(专利权)人：长春百克药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：82[中国|长春]