重组亚单位登革病毒疫苗制造技术

本发明专利技术提供了用于施用于人受试者的登革病毒疫苗和免疫原性组合物。本发明专利技术的疫苗组合物包含重组产生的单体和/或二聚体形式的截短的登革病毒包膜糖蛋白，所述包膜糖蛋白当与佐剂和药学上可接受的载体一起配制时诱导平衡的四价免疫应答。在本文所述的组合物的优选实施方案中，DEN4蛋白成分是二聚体形式的DEN4。该组合物被设计为对于在一般群体包括免疫抑制、免疫功能低下和免疫衰老的个体中使用是可接受的。本文还提供了通过将本文所述的组合物施用于患者而在人患者群体中诱导保护性免疫应答的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】重组亚单位登革病毒疫苗相关申请的交叉引用本申请要求2010年10月29日提交的美国临时申请序列号61/408,310(其内容整体通过引用并入本文)的权益。有关联邦政府资助的研究的声明本专利技术部分由美国政府资助编号5UO1AI056410-03、和1UC1AI062481(NIH)、和W81XWH-06-2-0035(DOD)支持。美国政府在本专利技术中具有某些权利。专利
本专利技术涉及在人受试者中引发针对登革病毒感染的免疫应答且可用于预防和/或治疗登革病毒感染的组合物，及其临床表现。专利技术背景黄病毒科包括原型黄热病病毒(YF)、登革病毒的4种血清型(DEN-1、DEN-2、DEN-3和DEN-4)、日本脑炎病毒(JE)、蜱传播脑炎病毒(TBE)、西尼罗病毒(WN)、圣路易斯脑炎病毒(SLE)和约70种其他引起疾病的病毒。黄病毒是包含单一正链RNA基因组的小的包膜病毒。10种基因产物由单个开放阅读框编码并翻译为以如下顺序组织的多聚蛋白：衣壳(C)，“膜前体”(preMembrane，prM，其在病毒粒子从细胞释放前才被加工成“膜”(M))，“包膜”(E)，接着是非结构(NS)蛋白NS1、NS2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b和NS5(在Chambers,T.J.等人,AnnualRevMicrobiol(1990)44:649-688;Henchal,E.A.和Putnak,J.R.,ClinMicrobiolRev.(1990)3:376-396中综述)。然后通过由宿主以及病毒编码的蛋白酶介导的精确的加工事件产生各个黄病毒蛋白。黄病毒的包膜来源于宿主细胞膜并包含病毒编码的膜锚定的膜(M)和包膜(E)糖蛋白。E糖蛋白是最大的病毒结构蛋白并包含负责细胞表面附着和内体内融合(intra-endosomalfusion)活性的功能结构域。其也是宿主免疫系统的主要目标，诱导病毒中和抗体的产生，这与保护性免疫相关。登革病毒通过伊蚊属的蚊子、主要是埃及伊蚊(A.aegypti)和白纹伊蚊(A.albopictus)传播给人。登革病毒的感染导致各种临床表现，范围为从不明显的或轻度的发热疾病，通过由高烧、头痛、关节和肌肉疼痛、皮疹、淋巴结病和白细胞减少表征的典型登革热(DF)(Gibbons,R.V.和D.W.Vaughn,BritishMedicalJournal(2002)324:1563-1566)，到儿童中更常见的更严重的感染形式，登革出血热/登革休克综合征(DHF/DSS)，标志为血管通透性和/或严重出血表现，范围为从存在瘀点和瘀斑至自发性严重出血和如果不治疗可能导致死亡的深度休克。在没有诊断和及时医疗干预的情况下，DHF/DSS的突然发病和快速进展可以是致命的。登革病毒在全球发病率和死亡率的方面是节肢动物传播病毒的最重要组，每年发生的估计1亿例登革热包括250,000至500,000例的DHF/DSS(Gubler,D.J.,Clin.Microbiol.Rev.(1998)11:480-496;同上的Gibbons)。随着全球人口的增加，人口、特别是整个热带地区的人口的城市化和持续蚊子控制措施的缺乏，登革的蚊子载体已经将它们的分布遍及热带、亚热带及一些温带地区，为超过一半世界人口带来了登革感染的风险。现代飞机旅行和人类迁徙已经促进了登革血清型的全球分布，使得多种登革血清型现在在许多地区是流行的。在过去20或更多年，存在登革流行频率和DHF/DSS发病率的增加。例如，在东南亚，DHF/DSS是儿童中住院和死亡的导致因素(Gubler,同上；Gibbons和Vaughn，同上)。迄今为止，黄病毒疫苗的开发已经取得了混合的成功(mixedsuccess)。为了产生保护免于由黄病毒引起的疾病的候选疫苗，已经实施了4种基本方法：活减毒、灭活的全病毒、重组亚单位蛋白和基于DNA的疫苗。黄热病病毒(YellowFevervirus)的活减毒疫苗已存在了数十年。灭活的全病毒疫苗的应用已被证明用于TBE和JE病毒。尽管上文强调的YF、JE、和TBE疫苗取得了成功，但是使用活减毒病毒和灭活的病毒方法来开发登革病毒的疫苗已经遇到了显著挑战。存在四种血清型的登革病毒(DEN1、DEN2、DEN3、和DEN4)和发现每种血清型的毒株传播遍及整个世界的登革流行地区。自然感染为感染性血清型但非其他登革血清型赋予了持久的免疫力。当登革病毒的一种血清型感染随后为另一种血清型的第二次感染时，在第二次登革感染后最经常发生更严重形式的疾病(DHF/DSS)。已经假设DHF和DSS与第二次登革感染的更频繁关联是由于由一种病毒类型感染诱导的非中和抗体增强第二种登革病毒类型的感染性(抗体依赖性增强-ADE)。这个概念对于疫苗开发具有重要的意义，因为有效的登革疫苗必须同时诱导针对所有四种登革血清型的平衡的特异性中和抗体和特异性记忆细胞(Halstead和Deen,2002)。这已被证明是登革疫苗开发中的主要问题。迄今为止，临床测试的大多数疫苗是活减毒疫苗，所述活减毒疫苗提出了对于给予健康受试者的所有活病毒疫苗常见的安全性担忧。病毒减毒不足可导致病毒相关的副作用，而减毒过度可削弱疫苗效力。此外，可能发生回复为野生型或突变为提高的毒性(或降低的效力)。此外，即使适当地减毒，活病毒疫苗对特定患者群体，例如免疫缺陷或免疫抑制患者，以及正常群体的特定部分，例如怀孕妇女、婴儿或老年个体是禁忌的。用于登革的活减毒病毒方法的进一步问题包括与在四价疫苗中组合四种独立复制病毒相关的挑战。干扰的问题一直困扰着迄今为止测试的所有四价制剂，并且已经导致不平衡的四价免疫力和以延长时间间隔(例如0、6、12个月)施用的多剂量的要求。这不是很理想，可能给已经部分免疫并且暴露于野生型病毒的个体带来安全性问题，因为这些个体可能处于疾病(例如登革出血热)恶化的更高风险中。Ivy等人(美国专利6,432,411)公开了包含DEN1-480%E(等同于DEN-2包膜多肽的氨基酸1-395)蛋白的四价亚单位疫苗。同上的Ivy等人也报道了包含DEN1-480%E和ISCOMATRIX®佐剂的组合物。然而，仍然存在对于可以诱导针对所有四种登革血清型的平衡免疫应答的稳定的四价疫苗的需要。专利技术概述本专利技术提供了用于人患者群体中使用的疫苗和免疫原性组合物，其用于预防和/或治疗与登革病毒感染相关的疾病。该疫苗通过组合源自一种或多种登革病毒包膜蛋白的一种或多种重组亚单位蛋白和佐剂而形成。设计本专利技术的登革病毒疫苗以诱导针对DEN1、DEN2、DEN3和DEN4的平衡的、保护性四价免疫应答，同时提供可接受的安全性概况。独特的疫苗制剂取决于新的正确折叠的重组包膜亚单位蛋白(“登革80E”或“DEN-80E”或“DEN1-80E”或“DEN2-80E”或“DEN3-80E”或“DEN4-80E”或“DEN480EZip”)，所述包膜亚单位蛋白与佐剂组合以产生疫苗制剂。特别设计制剂的不同比例的单体和/或二聚体形式的重组包膜蛋白的独特组合以解决对于平衡的四价应答的需要。设计该疫苗以诱导相关的平衡的四价保护性免疫应答，如在健康人志愿者中的病毒中和抗体，并保持对于施用于健康和免疫功能低下的个体的可接受的安全性概括本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.10.29 US 61/408,3101.免疫原性组合物，包含有效量的纯化的血清型DEN-1、DEN-2、DEN-3、和DEN-4的登革病毒包膜蛋白，即E蛋白单体、药学上可接受的赋形剂、和有效量的佐剂；其中所述E蛋白是SEQIDNO:6所示的DEN1-80E、SEQIDNO:7所示的DEN2-80E、SEQIDNO:8所示的DEN3-80E和SEQIDNO:9所示的DEN4-80E；其中所述DEN4E蛋白的量是DEN1、DEN2、和DEN3E蛋白各自的量的2至3倍，并且其中所述组合物在人受试者中诱导中和抗体的产生。2.权利要求1的组合物，其中所述DEN4E蛋白的量是DEN1、DEN2、DEN3E蛋白各自的量的2倍。3.权利要求2的组合物，其中所述DENE蛋白的量选自：(a)3μgDEN1-80...

【专利技术属性】
技术研发人员：BAG科勒，VB派，DE帕克斯，M耶尔梅内，AJ贝特，T马特雅克，
申请(专利权)人：默沙东公司，
类型：
国别省市：