用于治疗和预防肠道细菌感染的方法及组合物技术

本发明专利技术公开了一种治疗和预防革兰氏阴性菌引起的肠道疾病的方法。该方法包括向一个个体施以一种疫苗或者一种抗所述疫苗产生的高免疫物质的步骤，所用疫苗包含有一种或多种具有Ｏ组血清型作用特性或脂多糖相关抗原作用特征的细胞壁抗原，所述抗原中至少一部分是从细菌细胞壁或细胞壁碎片分离的。本发明专利技术还公开了含有高免疫物质的组合物，以及所述组合物和疫苗的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及胃肠道紊乱的治疗或预防，涉及包含有胃肠道病原体抗原的疫苗，涉及从注射所述疫苗的动物(包括家畜和家禽)的血液、乳汁和禽蛋中获得的免疫物质及其制备方法。具体地，本专利技术涉及用于治疗和预防胃肠道紊乱的化合物和组合物，例如由诸如肠毒性大肠杆菌(E.coli)的革兰氏阴性菌引起的腹泻，本专利技术还涉及腹泻的治疗或预防方法。
技术介绍
本专利技术可以用于治疗和预防由一系列微生物所引起的胃肠道疾病，这些微生物包括大肠杆菌(E.coli)、沙门氏菌(Salmonella)、弯曲状杆菌(Campylobacter)、螺旋杆菌(Helicobacter)、弧菌(霍乱菌，Vibrio)、志贺氏菌(Shigelia)、耶尔森鼠疫杆菌(Yersinia)和气单胞菌(Aeromonas)。然而，为了公开起见，本专利技术将以其针对人体内肠毒性大肠杆菌(ETEC)的应用为例进行说明。应当理解，本专利技术的范围并不限于这一个特定的应用。肠毒性大肠杆菌(ETEC)引起的腹泻会给成人带来极大的不适，并能导致未成年人和老年人的脱水死亡。很大一部分前往墨西哥、非洲和东南亚的旅游者所遭受的腹泻就是由ETEC引起的。对于旅游者腹泻，常用的治疗方法是预防性抗生素治疗，例如用阿莫西林治疗。然而，抗生素耐药性降低了抗生素治疗的效果，便秘或腹泻等副作用是常有的。症状性治疗用于治疗呕吐和腹泻，例如用盐酸洛哌丁胺、硫酸阿托品和盐酸地芬诺酯。然而洛哌丁胺和阿托品的使用不当会导致严重的便秘，而地芬诺酯的使用不当会导致依赖性。这些药剂对于孩子们来说也是不适用的。进一步的治疗包括使用等渗压饮料的流体替代治疗。然而，流体替代治疗几乎不能减轻病情，并且不会减少临床腹泻。进一步的症状治疗和流体治疗能够治疗症状，但不能根除病因。乳汁和禽蛋制品在减轻胃肠道紊乱疾病的症状中显示出潜在的治疗和预防作用。Peterson和Campbell在美国专利US 3,376,198中介绍了免疫产乳汁的蹄类动物以生产抗细菌和病毒的抗体或“保护性成分”。Carlendar等在BioDrugs，2002，16(6)433-7中介绍了源于鸡蛋黄的抗体在减少胃肠道开口部分(口腔)中巴斯德氏细菌中的应用。Shimamoto等在Hepatogastroenterology，2002，49(45)709-714中介绍了鸡蛋中产生的抗幽门螺旋杆菌的特异性抗体在减少胃病患者体内幽门螺旋杆菌数量中的应用。Linggood等在美国专利US 4,971,794中介绍了高免疫牛初乳作为抗大肠杆菌的抗体源的用途。母牛用混合菌株的菌毛制品进行疫苗接种。该专利介绍该疫苗必须包含表达Type 1菌毛、CFA 1菌毛、CFA 2菌毛和K88菌毛的多种大肠杆菌菌株的抗原。K88菌毛与猪的ETEC有关。Hastings在美国专利US 5,017,372中介绍了蹄类动物的高免疫初乳作为大肠杆菌抗体源的用途。蹄类动物的疫苗用下述方法制造不同类型的大肠杆菌在一定条件下生长得到CFA 1或CFA 2，或者两者同时得到。然后细菌用超声波裂解以释放出这些抗原，并加热不稳定的毒素。Freedman等在The Journal of Infection Diseases 1998，177662-7中介绍了高免疫初乳作为抗大肠杆菌的抗体源的用途。疫苗的制备是让细菌菌株在肉汤培养基中生长以优化CFA的表达，然后使用沉降法及随后的排阻色谱法或离子交换色谱法纯化CFA。Teckett等在The New England Journal of Medicine，1988，5，12.pp1240-1243中描述了在牛的疫苗中引入多种失活(用甲醛或戊二醛处理)的细菌完整细胞悬液。所述完整细胞悬液包含O型血清组O6，O8，O15，O20，O25，O27，O63，O78，O114，O115，O128，O148，O153和O159的大肠杆菌以及热不稳定的肠毒素、霍乱毒素、CFA1和大肠杆菌表面抗原3。大肠杆菌的O型抗原如O6，O8，O15，O20，O25，O27，O63，O78，O114，O115，O128，O148，O153和O159是热稳定的抗原，位于细菌的细胞壁上而不是诸如菌毛(纤毛)或鞭毛的突出结构上。这些O型抗原由与通常为大多数革兰氏阴性菌细胞壁材料的核脂多糖复合物相连接的多糖的一部分所组成。由于O型抗原与细胞壁之间的紧密联系，基于O型抗原的疫苗可以由细胞壁或完整的失活细菌制得。脂多糖内毒素是细菌细胞外壁的一个常规部分，它们的毒性区域包埋在细胞壁中(参见Endotoxins in Health andDisease.1999，第12章和其他章节)。在常规的兽医实践中，使用完整细胞细菌抗原优于使用单一O型抗原组分这样一个事实的深层原因在于O型抗原是内毒素—就动物福利和产量而言，在孕期牲畜身上使用高浓度内毒素在实践中被认为是有问题的。现有技术中使用乳制品和蛋制品预防胃肠道紊乱症状存在诸多问题。霍乱毒素(参见Teckett等，1988)很可能由于他们的高毒性而难以注册。此外，热不稳定性毒素，尽管有很高的免疫性也难以获得保护。上述方法生产得到的抗体的保护范围难以令人满意。一个附带的问题是要产生令人满意的预防效果需要大量的免疫浓缩物。当使用完整细胞抗原时，会产生许多不同类型的抗体反应，并且抗体滴定度的化验难以标定。一个关键的问题是特定检测的抗体是否有保护性。完整细菌细胞有许多未必与保护性有关的抗原。另外，包含革兰氏阴性菌的疫苗极有可能产生不利的疫苗反应，从而表现出由于不利的动物伦理报告和治疗物品的不利反应报告所带来的调节问题。不利的疫苗反应很可能会使牛奶厂的农场主停止参与任何生产牛奶抗体的冒险。这里对于本专利技术背景的讨论用于解释本
技术实现思路
。这不应认为是承认任何相关的物质是公开、公知的，或者是任何国家的普通常识部分。
技术实现思路
专利技术人惊奇地发现，通过对动物体或人体施以一种疫苗或抗所述疫苗产生的高免疫物质可以改善对革兰氏阴性菌引起的肠道疾病的治疗或预防。其中所述疫苗的特征在于该疫苗包含有一种或多种具有O组血清型作用特性或脂多糖相关抗原作用特征的细胞壁抗原，所述抗原中的至少一部分是从细菌细胞壁或细胞壁碎片分离的。因此，本专利技术一方面提供了一种治疗或预防革兰氏阴性菌引起的肠道疾病的方法，该方法包括向一个个体施以一种疫苗或者一种抗所述疫苗产生的高免疫物质的步骤，其中所述疫苗包含有一种或多种具有O组血清型作用特性或脂多糖相关抗原作用特征的细胞壁抗原，所述抗原中的至少一部分是从细菌细胞壁或细胞壁碎片分离的。另一方面，本专利技术提供了一种用于治疗或预防革兰氏阴性菌引起的肠道疾病的组合物，该组合物含有通过用一种疫苗免疫宿主动物而制得的高免疫物质，所述疫苗包含有一种或多种具有O组血清型作用特性或脂多糖相关抗原作用特征的细胞壁抗原，所述抗原中的至少一部分是从细菌细胞壁或细胞壁碎片分离的。另一方面，本专利技术提供了一种用于治疗或预防诸如ETEC的产肠毒素的革兰氏阴性菌引起的胃肠道功能障碍的高免疫物质的制备方法，所述高免疫物质是抗一种疫苗而产生的，所述疫苗包含有一种或多种具有O组血清型作用特性或脂多糖相关抗原作用特征的细胞壁抗原，所述抗原中的至少一部分是从细菌细胞壁或细胞壁碎片分离的。另一方面，本专利技术提供了本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗或预防革兰氏阴性菌引起的肠道疾病的方法，该方法包括对一个个体施以一种疫苗或者一种抗所述疫苗所产生的高免疫物质的步骤，其特征在于，所述疫苗含有一种或多种细胞壁抗原，该抗原具有Ｏ组血清型作用特性或者脂多糖相关抗原作用特征，所述抗原中至少一部分是从细菌细胞壁或细胞壁碎片分离的。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】AU 2003-3-4 20039010081.一种治疗或预防革兰氏阴性菌引起的肠道疾病的方法，该方法包括对一个个体施以一种疫苗或者一种抗所述疫苗所产生的高免疫物质的步骤，其特征在于，所述疫苗含有一种或多种细胞壁抗原，该抗原具有O组血清型作用特性或者脂多糖相关抗原作用特征，所述抗原中至少一部分是从细菌细胞壁或细胞壁碎片分离的。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述疫苗包含一个水相，且每毫升所述疫苗的所述水相中脂多糖相关抗原的量大于每毫升104/ml的革兰氏阴性菌的培养液中脂多糖相关抗原的量。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，每毫升所述疫苗的所述水相中脂多糖相关抗原的量大于每毫升106/ml的革兰氏阴性菌的培养液中脂多糖相关抗原的量。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，每毫升所述疫苗的所述水相中脂多糖相关抗原的量大于每毫升108/ml的革兰氏阴性菌的培养液中脂多糖相关抗原的量。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脂多糖相关抗原中的至少20％是从细菌细胞壁或细胞壁碎片分离的。6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述脂多糖相关抗原中的至少40％是从细菌细胞壁或细胞壁碎片分离的。7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述脂多糖相关抗原中的至少60％是从细菌细胞壁或细胞壁碎片分离的。8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述疫苗包含一个水相，该水相的每毫升中所含脂多糖相关抗原的重量与每毫升含有细胞壁物质的重量为W的革兰氏阴性菌培养液中发现的脂多糖相关抗原的重量等量，且每毫升水相中革兰氏阴性菌细胞壁或者细胞壁碎片的重量小于0.8W。9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述疫苗包含一个水相，该水相的每毫升中所含脂多糖相关抗原的重量与每毫升含有细胞壁物质的重量为W的革兰氏阴性菌培养液中发现的脂多糖相关抗原的重量等量，且每毫升水相中革兰氏阴性菌细胞壁或者细胞壁碎片的重量小于0.3W。10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述疫苗包含一个水相，该水相的每毫升中所含脂多糖相关抗原的重量与每毫升含有细胞壁物质的重量为W的革兰氏阴性菌培养液中发现的脂多糖相关抗原的重量等量，且每毫升水相中革兰氏阴性菌细胞壁或者细胞壁碎片的重量小于0.1W。11.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述疫苗进一步含有菌毛或类菌毛抗原CFA-1或CFA-2、或其它定居因子或其它公认的定居因子、或者是它们的组合，所述抗原中至少一部分是从细菌细胞壁或细胞壁碎片分离的。12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述疫苗包含一个水相，每毫升所述水相中CFA的量大于每毫升在促进CFA生成的培养条件下生长的104革兰氏阴性菌的培养液中CFA抗原的量。13.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述每毫升所述水相中CFA的数量大于每毫升在促进CFA生成的培养条件下生长的106革兰氏阴性菌的培养液中CFA抗原的量。14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，所述每毫升所述水相中CFA的数量大于每毫升在促进CFA生成的培养条件下生长的108革兰氏阴性菌的培养液中CFA抗原的量。15.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述CFA抗原的至少20％是从细菌细胞壁或者细胞壁碎片分离的。16.如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述CFA抗原的至少40％是从细菌细胞壁或者细胞壁碎片分离的。17.如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述CFA抗原的至少60％是从细菌细胞壁或者细胞壁碎片分离的。18.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脂多糖相关抗原从细菌细胞壁的分离是通过匀浆或者加热的方式、或者是它们的有效组合。19.如权利要求18所述的方法，其特征在于，所述匀浆是在转子-定子装置中进行的，其中转子外围速率(米每秒)与转子-定子间隙(毫米)的比值在0.2～20的范围内。20.如权利要求19所述的方法，其特征在于，所述转子外围速率(米每秒)与转子-定子间隙(毫米)的比值在0.4～12的范围内。21.如权利要求20所述的方法，其特征在于，所述转子外围速率(米每秒)与转子-定子间隙(毫米)的比值在0.8～6的范围内。22.如权利要求18所述的方法，其特征在于，所述匀浆器中高剪切区域的剪切速率与权利要求19的转子-定子设置所产生的剪切速率相当。23.如权利要求18所述的方法，其特征在于，所述脂多糖相关抗原从细胞壁的分离是通过在40～80C的范围内持续10～200分钟加热处理的方式。24.如权利要求23所述的方法，其特征在于，所述脂多糖相关抗原从细胞壁的分离是通过在50～70℃的范围内加热处理的方式。25.如权利要求23或24所述的方法，其特征在于，所述脂多糖相关抗原从细胞壁的分离是通过持续30～60分钟的加热处理的方式。26.如权利要求1～25中任一项所述的方法，其特征在于，所述革兰氏阴性菌选自螺旋菌属、弧菌属、肠杆菌属。27.如权利要求26所述的方法，其特征在于，所述革兰氏阴性菌为大肠杆菌。28.如权利要求27所述的方法，其特征在于，所述大肠杆菌为ETEC、EHEC或者EPEC。29.如权利要求28所述的方法，其特征在于，所述革兰氏阴性菌是ETEC，且所述脂多糖相关抗原选自以下O型抗原组O6，O8，O15，O20，O25，O27，O63，O78，O114，O115，O128，O148，O153，O159和其它与肠毒性大肠杆菌相关的血清型O型抗原。30.如权利要求29所述的方法，其特征在于，所述脂多糖相关抗原包含O78。31.如权利要求29所述的方法，其特征在于，所述分离的O型抗原是通过硫酸铵沉淀法纯化的。32.如权利要求31所述的方法，其特征在于，初始的沉淀作用用于去除外来蛋白质，而最后的沉淀作用用于从沉淀物获取O型抗原。33.如权利要求29所述的方法，其特征在于，所述疫苗包含由至少两个O型抗原组成的一组抗原，单独的O型抗原是在单独的细菌培养基中生长并分离的，在单独的O型抗原从...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗伊迈克尔罗宾斯布朗，格兰特托马斯罗林，戈特弗里德利希蒂，
申请(专利权)人：阿纳迪斯有限公司，
类型：发明
国别省市：AU[澳大利亚]