治疗细胞外基质紊乱的方法和组合物技术

本发明专利技术提供一种改变细胞产生的细胞外基质水平的方法，该方法包括调节细胞分裂自身抗原（ＣＤＡ）的表达或活性。申请人惊奇的发现，ＣＤＡ参与哺乳动物细胞产生的ＥＣＭ蛋白水平的控制途径。本发明专利技术涉及多种ＥＣＭ相关紊乱，例如肾脏纤维化和动脉粥样硬化。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及结缔组织生物学领域。更具体地，本专利技术涉及治疗细胞外基质(extracellular matrix，ECM)相关的结缔组织紊乱，例如纤维化，和继发性疾病，例如肾脏疾病，糖尿病和动脉粥样硬化。前言ECM是一种胶样物质，通常在结缔组织中具有结构功能。ECM由基质和纤维组成。基质是无定形物质，其填充间质组织，由组织液，细胞吸附蛋白和蛋白聚糖组成。细胞吸附蛋白使得结缔组织细胞附着到基质元件上。蛋白聚糖能保持水份，从而形成半硬水合胶。多聚糖的相关数量和种类有助于决定基质的性能。例如，多聚糖数量越多，基质越硬。基质支撑细胞，将其连接在一起，并作为一种介质，通过该介质，营养成分和其他溶解物质能在毛细血管和细胞之间扩散。基质中的纤维提供强度。结缔组织基质中发现三种纤维胶原，弹性和网状纤维。胶原纤维(白纤维)极为强韧，提供高抗张强度，该强度是抵抗纵向应力的能力。由于新鲜胶原纤维具有闪亮的白色外观，该纤维有时也被称之为“白纤维”。弹性纤维(黄纤维)能伸展到原长度的1-1.5倍，但松解后又能回缩到初始长度。在需要更大弹性的组织中能发现他们，例如肺，血管壁。新鲜的弹性纤维外观呈黄色，也称之为黄纤维。网状纤维是一种纤细成胶纤维。该纤维形成精巧分枝状的网状物，支撑着柔软器官，例如肝脏和脾脏。虽然ECM在机体内明显地起到重要的结构功能，但ECM紊乱也是常见和严重的。纤维化是在动物体中源于ECM超量产生导致瘢痕组织产生的普通术语。已经证实，在美国，45％的死亡归因于纤维增生紊乱。纤维化可能源于多种原因，包括外伤，手术，感染，环境污染，酒精和其它类毒素。有多种纤维化的实例，包括心脏病发作后的瘢痕组织形成，结果损伤心脏泵功能。糖尿病经常引起肾脏损伤和瘢痕形成，结果导致肾功能进行性损伤。甚至手术后，瘢痕组织能在内部器官之间形成，从而引起挛缩、疼痛，在某些情况下还引起不孕。尽管纤维化紊乱可以是急性或者慢性的，但都具有相同的特征过度胶原聚集，和正常组织被瘢痕组织代替后，出现相关功能丧失。急性纤维化(通常伴随突然和严重的发作和短期持续)作为各种外伤形式的共同反应而发生，所述外伤包括事故损伤、感染、手术、烧伤、放射和化疗治疗。所有外伤损伤组织都倾向于瘢痕化且变为纤维化，尤其是反复损伤时。慢性纤维化可源于病毒感染、糖尿病、高血压和其他慢性状况诱导进行性纤维化，结果引起组织功能持续丧失。影响最普遍的是肝脏、肾脏和肺。深度器官纤维化常常是极为严重的，因为器官功能进行性丧失导致发病、住院治疗、透析、残疾和甚至死亡。尽管ECM紊乱广泛普遍存在，使人衰弱，且经常威胁生命，但目前没有有效的治疗。由于这种ECM相关紊乱的多种形式的不利临床反应，显然需要有效的治疗。申请人克服或减轻了现有技术中的问题，发现一种已知细胞蛋白参与ECM紊乱的病理生理过程。专利技术概述本专利技术一方面提供一种改变细胞产生的细胞外基质(ECM)蛋白水平的方法，所述方法包括调节细胞分裂自身抗原(cell division autoantigen，CDA)的表达或活性。申请人惊奇地发现，CDA参与哺乳动物细胞产生的ECM蛋白水平的控制途径。本专利技术涉及多种ECM相关紊乱，例如肾脏纤维化和动脉粥样硬化。CDA可以是细胞分裂自身抗原1(CDA1)，或其功能等同物或衍生物。本专利技术另一方面提供一种治疗或预防ECM蛋白合成相关状况的方法，所述方法包括调节CDA的表达和/或活性。本专利技术还提供一种非-人动物，用于研究ECM紊乱，所述动物包含以改变水平表达CDA1的细胞。本专利技术另一方面提供一种筛选能调节ECM合成的试剂的方法，该方法包括以下步骤提供能表达CDA1的动物或者细胞，将所述动物或者细胞暴露到试剂中，和测定试剂对CDA1表达和/或活性的影响。本专利技术进一步包括通过本专利技术的筛选方法鉴定的试剂，以及包括该试剂的药物组合物。本专利技术进一步包括一种治疗或预防ECM相关状况的方法，该方法包括对需要所述治疗或预防的动物施予有效量的本专利技术的药物组合物。本专利技术还提供一种调节细胞中CDA1表达和/或活性的方法，该方法包括将细胞暴露在能调节下列因子活性的试剂中，所述因子选自血管紧张素II，TGFβ和结缔组织生长因子。本专利技术还进一步提供一种诊断ECM蛋白合成相关状况的方法，所述方法包括从动物体中获得生物样本，测定样本中的CDA1水平，和比较样本中的CDA1水平和参考值其中，样本中的CDA1水平统计学意义上显著高于或低于参考值时，诊断为阳性。 附图说明附图1显示远端小管和集合管中的CDA1表达。该部分(sections)用HE对染(核染为蓝色)。板A人组织。板B大鼠肾脏组织。附图2显示响应于体内Ang II刺激，肾脏内CDA1表达增高。板ACDA1表达对照。板B暴露于血管紧张素II后的CDA1表达。板C暴露于血管紧张素II后的TGFβ1表达。图D暴露于血管紧张素II后的TGFβ2表达。附图3显示肾脏质量减少后CDA1表达和纤维化增加。该部分用HE对染(核染为蓝色)。板A次全部肾切除术时的CDA1表达。板B暴露于缬沙坦(valsartan)后次全部肾切除术时的CDA1表达。附图4显示近端小管细胞(proximal tubule cells)中CDA1过表达和细胞外基质蛋白产生。板A在载体转染的NRK细胞中的胶原IV染色。板B在CDA1转染的NRK细胞中的胶原IV染色。板C在载体转染的NRK细胞中的纤连蛋白染色。板D在CDA1转染的NRK细胞中的纤连蛋白染色。附图5显示糖尿病大鼠肾脏中的CDA1表达。该部分用HE对染(核染为蓝色)。板A对照肾脏中的CDA1表达。板B8周时的CDA1表达。板C32周时的CDA1表达。附图6显示动脉粥样硬化斑块中的CDA1表达。CDA1染色为棕色，核染色为蓝色。板A非糖尿病小鼠动脉。板B糖尿病(apoE)小鼠动脉。附图7显示编码人CDA1的DNA序列。附图8显示人CDA1蛋白质序列。专利技术详述一方面，本专利技术提供一种改变细胞产生的细胞外基质(ECM)蛋白水平的方法，所述方法包括调节细胞分裂自身抗原(CDA)的表达或活性。申请人惊奇地发现，CDA参与控制哺乳动物细胞产生的ECM蛋白水平的途径。ECM是一种复杂结构实体，围绕并支撑着哺乳动物组织中的细胞。ECM经常被认为是结缔组织。ECM由三个主要的生物分子类别组成结构蛋白(胶原和弹性蛋白)，特化蛋白(原纤蛋白，纤连蛋白，和层粘连蛋白)和蛋白聚糖。因此，本专利技术的优选ECM蛋白选自胶原，弹性蛋白，原纤蛋白，纤连蛋白，层粘连蛋白和蛋白聚糖。更为优选，ECM蛋白为纤连蛋白或胶原IV。本专利技术中，术语“调节CDA的表达或活性”是指和非更改水平比较，更改或改变CDA的表达和/或活性。调节表达可以包括诱导或增加表达和/或活性或者减少表达和/或活性。细胞中CDA的表达和/或活性的调节可通过使用CDA拮抗剂、抑制剂、模拟物或衍生物而获得。本专利技术的术语“拮抗剂”或“抑制剂”是指阻滞或调节CDA生物活性的试剂。拮抗剂和抑制剂蛋白，核酸，碳水化合物，抗体或其他任何分子或配体。蛋白可以包括酶，该酶能降解CDA，因而影响细胞内外的CDA水平。其他CDA活性和/或表达调节剂包括一些合理设计的，合成的抑制剂。CDA的表达和/或活性的调节可通过直接或间接方法而获得。通过本领域技术人本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种改变细胞产生的细胞外基质（ＥＣＭ）蛋白水平的方法，所述方法包括调节细胞分裂自身抗原（ＣＤＡ）的表达或活性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】AU 2003-7-1 20039033631.一种改变细胞产生的细胞外基质(ECM)蛋白水平的方法，所述方法包括调节细胞分裂自身抗原(CDA)的表达或活性。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述ECM蛋白选自胶原、弹性蛋白、原纤蛋白、纤连蛋白、层粘连蛋白和蛋白聚糖。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述ECM蛋白是纤连蛋白或胶原IV。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞来源于肾脏组织或者血管组织。5.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞选自肾足细胞，肾近端小管细胞，肾集合管细胞，泡沫细胞和巨噬细胞。6.根据权利要求1所述的方法，其中所述CDA包括N-端脯氨酸富集区，中心碱性区和C-端双酸区。7.根据权利要求1所述的方法，其中所述CDA是细胞分裂自身抗原1(CDA1)，或其片段，功能等同物，类似物，突变体或变体。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述CDA1由如附图7所示核苷酸序列编码。9.根据权利要求7所述的方法，其中所述CDA1包含附图8所示氨基酸序列或其功能等同物或衍生物。10.一种治疗或预防ECM蛋白合成相关状况的方法，该方法包括调节CDA的表达和/或活性。11.根据权利要求10所述的方法，其中所述状况是纤维化。12.根据权利要求11所述的方法，其中所述纤维化是由于烧伤、心脏病发作、化疗药物治疗、暴露于放射线或手术。13.根据权利要求11所述的方法，其中所述纤维化是主要器官纤维化。14.根据权利要求13所述的方法，其中所述主要器官选自肾脏、肝脏、心脏和眼睛。15.根据权利要求13所述的方法，其中所述主要器官纤维化是由于选自由以下成员构成的组的状况糖尿病、高血压、病毒性肝炎、酒精滥用、黄斑变性、视网膜病变和玻璃体视网膜病变。16.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：Z柴，
申请(专利权)人：迪亚B技术有限公司，
类型：发明
国别省市：AU[澳大利亚]